HPLC法同時測定真武湯中11種活性成分的含量

田萍 馬開 張薇 張迪文 劉碧碧 郭曉燕 韓德恩

摘 要 目的：建立同時測定真武湯中5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Phenomenex Kinetex C18，流動相為乙腈-0.2%磷酸水溶液（梯度洗脫），流速為1.0 mL/min，檢測波長為285 nm（4.4～7 min，5-羥甲基糠醛）、203 nm[7～12 min，（+）-兒茶素]、233 nm（12～50 min，芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷）、200 nm（50～62.3 min，6-姜酚、8-姜酚;62.9～90 min，6-姜烯酚、茯苓酸）、222 nm（62.3～62.9 min，白術內酯Ⅱ），柱溫為35 ℃，進樣量為20 μL。結果：5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸檢測質量濃度線性范圍分別為0.62～12.47 μg/mL（r=0.999 6）、2.36～47.25 μg/mL（r=0.999 7）、200.80～4 016 μg/mL（r=0.999 7）、4.45～89.04 μg/mL（r=0.999 6）、4.28～85.54 μg/mL（r=0.999 5）、5.16～103.13 μg/mL（r=0.999 9）、5.53～110.66 μg/mL（r=0.999 9）、0.84～16.89 μg/mL（r=0.999 8）、0.60～12.04 μg/mL（r=0.999 9）、0.53～10.62 μg/mL（r=0.999 5）、1.04～20.78 μg/mL（r=0.999 7）;定量限分別為0.155、0.590、1.210、1.112、1.070、0.258、0.553、0.421、0.153、0.354、0.431 μg/mL，檢測限分別為0.047、0.179、0.134、0.337、0.324、0.078、0.168、0.128、0.046、0.107、0.131 μg/mL，精密度、穩定性、重復性試驗的RSD均小于3%;加樣回收率分別為96.06%～103.01%（RSD=2.64%，n=6）、95.11%～101.57%（RSD=2.58%，n=6）、97.22%～102.11%（RSD=1.93%，n=6）、96.43%～102.78%（RSD=2.35%，n=6）、96.42%～101.43%（RSD=2.15%，n=6）、96.86%～102.05%（RSD=2.10%，n=6）、95.32%～100.55%（RSD=1.87%，n=6）、97.04%～103.25%（RSD=2.22%，n=6）、96.78%～103.22%（RSD=2.62%，n=6）、97.04%～103.14%（RSD=2.28%，n=6）、97.08%～103.51%（RSD=2.94%，n=6）。結論：該方法準確、專屬性好，可用于同時測定真武湯中11種活性成分的含量。

關鍵詞 真武湯;高效液相色譜法;5-羥甲基糠醛;（+）-兒茶素;芍藥苷;苯甲酰烏頭原堿;苯甲酰次烏頭原堿;苯甲酰芍藥苷;6-姜酚;8-姜酚;白術內酯Ⅱ;6-姜烯酚;茯苓酸;含量測定

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish a method for simultaneous determination of eleven active constituents in Zhenwutang decoction， such as 5-hydroxymethylfurfural， （+）-cianidanol， paeoniflorin， benzoylaconitine， benzoylhypacoitine， benzoylpaeoniflorin， 6-gingerol， 8-gingerol， atractylenolide Ⅱ， 6-shogaol and pachymic acid. METHODS： HPLC method was adopted. The separation was performed on Phenomenex Kinetex C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.2 % phosphoric acid solution（gradient elution） at flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 285 nm （4.4-7 min， 5-hydroxymethylfurfural）， 203 nm [7-12 min，（+）-cianidanol]， 233 nm （12-50 min，paeoniflorin， benzoylaconitine， benzoylhypacoitine， benzoylpaeoni- florin）， 200 nm （50-62.3 min， 6-gingerol， 8-gingerol; 62.9-90 min， 6-shogaol， pachymic acid） and 222 nm （62.3-62.9 min， atractylenolide Ⅱ）. The column temperature was set at 35 ℃， and the sample size was 20 μL. RESULTS： The linear ranges of 5-hydroxymethylfurfural， （+） -cianidanol， paeoniflorin， benzoylaconitine， benzoylhypacoitine， benzoylpaeoniflorin， 6-gingerol， 8-gingerol， atractylenolide Ⅱ， 6-shogaol， pachymic acid were 0.62-12.47 μg/mL （r=0.999 6），2.36-47.25 μg/mL （r=0.999 7），200.80-4 016 μg/mL （r=0.999 7），4.45-89.04 μg/mL （r=0.999 6），4.28-85.54 μg/mL （r=0.999 5），5.16-103.13 μg/mL （r=0.999 9），5.53-110.66 μg/mL （r=0.999 9），0.84-16.89 μg/mL （r=0.999 8），0.60-12.04 μg/mL （r=0.999 9），0.53-10.62 μg/mL （r=0.999 5），1.04-20.78 μg/mL （r=0.999 7）， respectively. The limits of quantitation were 0.155， 0.590， 1.210， 1.112， 1.070， 0.258， 0.553， 0.421， 0.153， 0.354， 0.431 μg/mL， respectively. The limits of detection were 0.047， 0.179， 0.134， 0.337， 0.324， 0.078， 0.168， 0.128， 0.046， 0.107， 0.131 μg/mL， respectively. RSDs of precision， stability and reproducibility tests were all lower than 3%. The average recovery rates were 96.06%-103.01%（RSD=2.64%，n=6）， 95.11%-101.57%（RSD=2.58%，n=6）， 97.22%-102.11%（RSD=1.93%，n=6）， 96.43%-102.78%（RSD=2.35%，n=6）， 96.42%-101.43%（RSD=2.15%，n=6）， 96.86%-102.05%（RSD=2.10%，n=6）， 95.32%-100.55%（RSD=1.87%，n=6）， 97.04%-103.25%（RSD=2.22%，n=6）， 96.78%-103.22%（RSD=2.62%，n=6）， 97.04%-103.14%（RSD=2.28%，n=6）， 97.08%-103.51%（RSD=2.94%，n=6）， respectively. CONCLUSIONS： The method is accurate and specific， and suitable for simultaneous determination 11 active components of Zhenwutang decoction.

KEYWORDS? ?Zhenwutang decoction; HPLC; 5-hydroxymethylfurfural; （+）-cianidanol; Paeoniflorin; Benzoylaconitine; Benzoylhypacoitine; Benzoylpaeoniflorin; 6-gingerol; 8-gingerol; Atractylenolide Ⅱ; 6-shogaol; Pachymic acid; Content determination

真武湯是張仲景《傷寒論》中溫陽利水的代表方[1]，由白芍、茯苓、白術、附子、生姜等5味中藥組成，主要用于治療腎病[2]、心力衰竭[3]等癥，療效顯著。白芍中芍藥苷、苯甲酰芍藥苷具有抗炎、抗應激、調節免疫等作用，可用于糖尿病腎病、腎病綜合征、慢性腎小球腎炎等多種腎臟疾病的治療[4];其酚類成分兒茶素具有腎保護作用[5]。茯苓酸是茯苓的主要有效活性成分之一，具有改善膿毒癥引起的急性腎損傷的作用[6]。白術中白術內酯Ⅱ能顯著抑制炎癥介質和炎癥細胞因子的產生[7];5-羥甲基糠醛對鏈脲佐菌素誘導的糖尿病腎病模型大鼠具有腎保護作用，但有基因和細胞毒性[8-9]。附子水煎劑可改善微小病變腎病模型大鼠的腎臟損傷[10]，苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿等單酯型生物堿既是其有效成分，也是毒性成分[11]。生姜中6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚對急性腎損傷和糖尿病腎損傷均具有保護作用[12-13]。以上成分均為真武湯中具有腎保護作用的活性成分。目前關于真武湯的研究，主要為測定方中一味或多味藥材所含的有效成分[14-16]，尚未涵蓋方中所有藥材有效成分或指標成分含量。而中藥復方通過多成分、多靶點而發揮協同增效的作用，因此對其中單一或幾種成分進行含量測定，難以全面體現其整體質量。為此，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）測定了真武湯中5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸等11種活性成分的含量，旨在為完善其質量標準提供參考。

1 材料

1.1 儀器

2695型HPLC儀，包括二極管陣列檢測器、Empower 2-Build 2154色譜工作站（美國Waters公司）;AE240型十萬分之一分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）;LIBROR-160DPT型萬分之一電子分析天平（日本Shimadzu公司）;ULUP- IV-10T型超純水器（四川優普超純科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110736-201640，純度：>99.0%）;苯甲酰芍藥苷對照品（批號：wkq16122906，純度：>98%）、茯苓酸對照品（批號：wkq16071903，純度：>98%）、白術內酯Ⅱ對照品（批號：wkq16060503，純度：>98%）均購自四川維克奇生物科技有限公司;（+）-兒茶素對照品（批號：MUST- 16030812，純度：>98%）、5-羥甲基糠醛對照品（批號：MUST- 15051212，純度：>98%）、苯甲酰烏頭原堿對照品（批號：MUST-17022805，純度：>98%）、苯甲酰次烏頭原堿對照品（批號：MUST-17022807，純度：>98%）均購自成都曼斯特生物科技有限公司;6-姜酚對照品（批號：20171206）、6-姜烯酚對照品（批號：20171222）、8-姜酚對照品（批號：20180408）均由河南省中醫藥研究院馬開實驗室自制，采用面積歸一化法檢測純度均大于98%;乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 藥材

白術飲片（批號：170605CP0175，產地：浙江）、白芍飲片（批號：171102，產地：安徽）、附子飲片（黑順片，批號：17050202，產地：四川）、茯苓飲片（批號：170602，產地：安徽）均購自河南本草國藥館;生姜購自鄭州市家輝超市，經河南省中醫藥研究院劉杰研究員鑒定分別為菊科植物白術（Atractylodes macrocephala Koidz.）的干燥根莖、毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根、毛茛科植物烏頭（Aconitum carmichaelii Debx.）的子根加工品、多孔菌科真菌茯苓[Poria cocos（Schw.）Wolf]的干燥菌核、姜科植物姜（Zingiber officinale Rosc.）的新鮮根莖。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex Kinetex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～25 min，8%A→17%A;25～70 min，17%A→ 65%A;70～75 min，65%A;75～76 min，65%A→ 90%A;76～90 min，90%A;90～95 min，90%A→ 8%A）;流速：1.0 mL/min;檢測波長：285 nm（4.4～7 min，5-羥甲基糠醛）、203 nm[7～12 min，（+）-兒茶素]、233 nm（12～50 min，芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷）;200 nm（50～62.3 min，6-姜酚、8-姜酚;62.9～90 min，6-姜烯酚、茯苓酸）、222 nm（62.3～62.9 min，白術內酯Ⅱ）;柱溫：35 ℃;進樣量：20 μL。

2.2 真武湯的制備

按《傷寒論》和《方劑學》（7版）中真武湯的處方量[1，17]，精密稱取白芍9 g、茯苓9 g、白術 6 g、生姜 9 g、附子（黑順片）5 g，置于同一2 000 mL 圓底燒瓶中，加水800 mL，浸泡 30 min，回流提取 2 次，每次30 min，趁熱紗布濾過，合并濾液，減壓濃縮至約40 mL，放置室溫，加水定容至50 mL，搖勻，即得。共制備3批真武湯樣品（編號：S1、S2、S3）。

2.3 溶液的制備

2.3.1 混合對照品溶液 取5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸對照品適量，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，得5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸質量濃度分別為270.25、1 179.5、1 066.25、1 127.75、1 335.75、1 416.50、343.75、216.00、115.50、469.50 μg/mL的單一對照品貯備液。另取芍藥苷對照品適量，置于5 mL量瓶中，分別加入上述各單一對照品貯備液適量，加甲醇定容，搖勻，得含5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸質量濃度分別為12.47、47.25、4 016、89.04、85.54、103.13、110.66、16.89、12.04、10.62、20.78 μg/mL的混合對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液 精密量取“2.2”項下樣品3 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，室溫放置12 h，再搖勻，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.3.3 陰性樣品溶液 按“2.2”項下方法分別制備缺白芍、茯苓、白術、附子（黑順片）、生姜的陰性樣品，再按“2.3.2”項下方法分別制備各陰性樣品溶液。

2.4 系統適用性試驗

精密量取“2.3”項下混合對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖 1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達到基線分離，分離度均大于1.5，理論板數以6-姜酚峰計均不低于5 000，陰性樣品對測定無干擾。

2.5 線性關系考察

精密量取“2.3.1”項下混合對照品溶液0.25、0.50、1.0、2.0、4.0、5.0 mL，分別置于5 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，得系列線性關系工作溶液。精密量取上述系列線性關系工作溶液各20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以各待測成分質量濃度（x，μg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，結果見表1。

2.6 定量限與檢測限考察

取“2.3.1”項下混合對照品溶液適量，加甲醇倍比稀釋，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分別計算定量限、檢測限。結果，5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸的定量限分別為0.155、0.590、1.210、1.112、1.070、0.258、0.553、0.421、0.153、0.354、0.431 μg/mL，檢測限分別為0.047、0.179、0.134、0.337、0.324、0.078、0.168、0.128、0.046、0.107、0.131 μg/mL。

2.7 精密度試驗

取“2.3.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6 次，記錄峰面積。結果，5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸峰面積的RSD分別為2.11%、1.78%、1.96%、2.30%、1.56%、2.28%、1.77%、1.33%、1.57%、1.96%、2.36%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.8 穩定性試驗

取“2.3.2”項下供試品溶液（編號：S2）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸峰面積的RSD分別為1.31%、0.58%、1.76%、1.64%、1.46%、1.18%、1.57%、1.38%、1.77%、1.86%、1.94%（n=6），表明供試品溶液于室溫下放置24 h 內穩定性良好。

2.9 重復性試驗

取樣品（編號：S2）適量，共6份，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并按標準曲線法計算樣品中11種成分的含量。結果，5-羥甲基糠醛、（+）-兒茶素、芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚、8-姜酚、白術內酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸的平均含量分別為9.31、40.19、3 500.65、72.60、70.53、79.99、86.89、12.95、5.06、3.34、14.80 μg/mL，RSD分別為2.78%、2.18%、2.76%、2.04%、2.67%、1.87%、2.57%、2.08%、2.17%、2.96%、2.99%（n=6），表明本方法重復性良好。

2.10 加樣回收率試驗

取已知含量的“2.2”項下樣品（編號：S2），共6份，每份約1.5 mL，分別加入混合對照品溶液[含5-羥甲基糠醛6.98 μg/mL、（+）-兒茶素30.24 μg/mL、芍藥苷2 626.04 μg/mL、苯甲酰烏頭原堿55.31 μg/mL、苯甲酰次烏頭原堿53.27 μg/mL、苯甲酰芍藥苷60.47 μg/mL、6-姜酚65.15 μg/mL、8-姜酚10.46 μg/mL、白術內酯Ⅱ3.88? μg/mL、6-姜烯酚2.87 μg/mL、茯苓酸11.12 μg/mL] 2 mL，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表2。

2.11 耐用性試驗

取“2.2”項下樣品（編號：S2）適量，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件[分別以不同流動相（B）體積比例（0.15%、0.20%、0.25%磷酸水溶液）、流速（0.9、1.0、1.1 mL/min）、柱溫（30、35、40 ℃）]進樣測定，記錄峰面積并按標準曲線法計算樣品中11種成分的含量，結果見表3。結果表明，本方法可滿足試驗要求，提示耐用性良好。

2.12 樣品含量測定

取“2.2”項下3批樣品適量，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，平行操作3次，記錄峰面積并按標準曲線法計算樣品中11種成分的含量，結果見表4。

3 討論

有研究認為，同時測定中藥復方中多個成分時，因各成分的紫外最大吸收波長不同，因此需要采用波長切換法測定各成分的含量[18]。筆者參考相關文獻[14-16，18-20]，在190～400 nm波長范圍內對11種待測成分進行全波長掃描，結果發現，在233 nm波長處芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷有較大吸收，222 nm波長處白術內酯Ⅱ有最大吸收，285 nm波長處5-羥甲基糠醛有最大吸收，200 nm波長處茯苓酸有較大吸收，200、227、280 nm波長處6-姜酚、6-姜烯酚、8-姜酚有吸收峰，203、279 nm波長處（+）-兒茶素有吸收峰;考慮到部分成分含量較低，因此在保證各待測成分檢測靈敏度及基線分離的情況下，本研究采用“2.1”項下波長作為檢測波長[21]。

本研究將樣品濾過后直接進樣與經甲醇處理后進樣的色譜圖進行比較。結果發現，經甲醇處理后，各成分分離度好，噪聲小，故本研究將樣品用甲醇進行處理后再進樣分析。與此同時，本研究又比較了樣品與不同體積比甲醇（1 ∶ 4、2 ∶ 3、1 ∶ 1、3 ∶ 2、4 ∶ 1）混勻后的色譜情況。結果發現，不同體積比的色譜圖中峰數未有明顯變化，但當樣品與甲醇體積比為3 ∶ 2時待測成分峰面積最大，且基線較平穩，故筆者將樣品與甲醇按體積比3 ∶ 2混勻后，分別放置2、4、6、8、10、12、14、16 h后過濾進樣，發現混勻后的樣品在放置12 h后過濾，其濾液不會產生白色的粉狀沉淀，且各成分含量變化不大。因此本研究采用“2.3.2”項下方法處理樣品。

此外，筆者比較了甲醇-水、乙腈-水等流動相系統。結果顯示，乙腈的洗脫能力優于甲醇，色譜峰分離度較好，但略有拖尾，在加入磷酸溶液后峰形和分離度均有所改善，故選擇乙腈-磷酸水溶液為流動相。同時，本研究還比較了乙腈-磷酸水溶液中磷酸不同體積分數（0.2%、0.3%、0.4%）對各成分與雜質峰分離度的影響。結果發現，當磷酸溶液體積分數大于0.2%時，分離度并沒有隨磷酸體積分數的增加得到明顯的改善，因此選擇乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，此時各成分與雜質峰可達到完全分離，滿足相關要求[22]。

耐用性試驗結果顯示，當流速為0.9～1.1 mL/min、磷酸溶液體積分數為0.15%～0.25%、柱溫為30～40 ℃時，雖然各成分保留時間偏差在（±0.16） min內，但樣品含量的RSD均小于3%，表明其耐用性良好，能滿足試驗要求[22]。樣品含量測定結果顯示，（+）-兒茶素、芍藥苷、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰芍藥苷、6-姜酚含量較高;5-羥甲基糠醛、白術內酯Ⅱ、8-姜酚、6-姜烯酚、茯苓酸含量較低，但因其分別為方中白術、茯苓、生姜的主要活性成分[6-7，12-13， 20]，故仍將這5種成分作為真武湯質量控制的指標性成分。

綜上所述，本研究所建含量測定方法準確、專屬性好，可用于同時測定真武湯中11種活性成分的含量。

參考文獻

[ 1 ] 張仲景.傷寒論[M].北京：人民衛生出版社，2005：27.

[ 2 ] LIANG CL，ZHANG PC，WU JB，et al. Zhen-wu-tang attenuates adriamycin-induced nephropathy via regulating AQP2 and miR-92b[J]. Biomed Pharmacother，2019. DOI：10.1016/j.biopha.2018.10.146.

[ 3 ] 李崢，李文杰，尚雪瑩，等.真武湯通過SIRT1 信號通路減輕心力衰竭大鼠心肌細胞線粒體損傷及心肌細胞凋亡[J].中華中醫藥學刊，2018，36（5）：1062-1067.

[ 4 ] 劉千紅，侯亮，丘軍，等.白芍總苷對 IgA 腎病患者炎性因子的影響[J].長春中醫藥大學學報，2018，34（3）：512- 514.

[ 5 ] 王海，連燕娜，高麗萍，等.兒茶素對順鉑所致人胚腎細胞氧化損傷的影響[J].癌變·畸變·突變，2017，29（1）：51- 54.

[ 6 ] CAI ZY，SHENG ZX，YAO H. Pachymic acid ameliorates sepsis-induced acute kidney injury by suppressing inflammation and activating the Nrf2/HO-1 pathway in rats[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci， 2017，21（8）：1924-1931.

[ 7 ] 彭騰，李鴻翔，鄧赟，等.白術內酯類成分及其藥理作用研究進展[J].中國藥房，2012，23（39）：3732-3734.

[ 8 ] 趙穎，張璐欣，李越，等. 5-羥甲基糠醛的研究概況[J].醫學綜述，2016，22（17）：3431-3434.

[ 9 ] SHUKLA R，BANERJEE S，TRIPATHI YB. Antioxidant and antiapoptotic effect of aqueous extract of Pueraria tuberosa（Roxb. Ex Willd.）DC. on streptozotocin-induced diabetic nephropathy in rats[J]. BMC Complement Altern Med， 2018. DOI：10.1186/s12906-018-2221-x.

[10] 楊金風，王長松，王媛媛，等.附子對微小病變腎病大鼠的影響[J].遼寧中醫雜志，2010，37（S1）：245-247.

[11] 孔小強，蔣且英，羅云，等.基于外翻腸囊模型的黃芪-附子配伍對附子6 種生物堿腸吸收的影響研究[J].中草藥，2017，48（23）：4928-4934.

[12] RODRIGUES FAP，SANTOS ADDC，DE MEDEIROS PHQS，et al. Gingerol suppresses sepsis-induced acute kidney injury by modulating methylsulfonylmethane and dimethylamine production[J]. Sci Rep，2018. DOI：10.1038/s41598-018-30522-6.

[13] XU Y，BAI L，CHEN X，et al. 6-Shogaol ameliorates diabetic nephropathy through anti-inflammatory，hyperlipidemic，anti-oxidative activity in db/db mice[J]. Biomed Pharmacother， 2018. DOI：10.1016/j.biopha.2017.10.084.

[14] 陳忠新，李強，戴臨風，等.真武湯顆粒劑質量標準研究[J].黑龍江醫藥，2015，28（1）：52-55.

[15] 劉碧好，白莉霞，盧瑞瑞，等.真武湯顆粒劑制備工藝研究[J].中國藥師，2018，21（1）：6-9.

[16] 吳俊標，賀雨，梁春玲，等.真武湯水提液 HPLC特征圖譜研究及指標成分的測定[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20（18）：45-49.

[17] 王付，許二平，張大偉.方劑學[M].7版.北京：中國中醫藥出版社，2010：253-254.

[18] 韓真真，邵長森，張元元，等. HPLC 法同時測定桂枝加芍藥湯中 8 種成分的含量[J].中國藥房，2019，30（6）：784-788.

[19] 張金蓮，謝日健，劉明貴，等.不同炮制方法對白術中白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2016，22（21）：15-18.

[20] 張樂，潘歡歡，劉飛，等.白術麩炒過程中 5-羥甲基糠醛的含量變化規律及其與飲片溫度、顏色變化的相關性分析[J].中國實驗方劑學雜志，2016，22（17）：11-14.

[21] 汪東庚，劉文英，沈于蘭. HPLC法測定虎杖提取物中白藜蘆醇和大黃素的含量[J].中草藥，2004，35（10）：1126-1128.

[22] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：374-377.

（收稿日期：2019-03-25 修回日期：2019-06-19）

（編輯：陳 宏）