安兒寧顆粒的體外抗菌、抗炎和免疫增強活性研究

劉帆　張穎穎　侯林

中圖分類號 R285.5 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2019）16-2221-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.16.12

摘 要 目的：評價安兒寧顆粒的體外抗菌、抗炎和免疫增強活性。方法：采用微量稀釋法檢測安兒寧顆粒（1.562 5～100 mg/mL）對10種臨床常見致病菌的抑制作用并計算其最低抑菌濃度（MIC）;以RAW 264.7細胞（單核巨噬細胞）為對象，采用脂多糖（LPS）誘導建立細胞炎癥模型，以MTT法考察安兒寧顆粒（0.312 5～20 mg/mL）對細胞增殖及其釋放一氧化氮（NO）的影響;以BALB/c小鼠脾臟淋巴細胞為對象，以MTT法考察安兒寧顆粒（0.312 5～20 mg/mL）對細胞增殖的影響。結果：安兒寧顆粒對表皮葡萄球菌和肺炎鏈球菌的MIC均為6.25 mg/mL，對變形桿菌、肺炎克雷伯菌、枯草芽孢桿菌和大腸埃希菌（標準菌株）的MIC均為12.5 mg/mL，對銅綠假單胞菌、糞腸球菌、蠟樣芽孢桿菌的MIC均為25 mg/mL，對大腸埃希菌（臨床分離菌株）、傷寒沙門菌的MIC均為50 mg/mL。與LPS模型組比較，安兒寧顆粒在0.312 5～1.25 mg/mL的劑量下能顯著降低LPS誘導的RAW 264.7細胞中NO的釋放（P<0.05）;與空白對照組比較，安兒寧顆粒在試驗劑量下對RAW 264.7細胞和小鼠脾臟淋巴細胞增殖無干擾或有促增殖趨勢，其在0.625、0.312 5 mg/mL劑量下能顯著促進淋巴細胞增殖（P<0.05）。結論：安兒寧顆粒在體外對臨床常見的革蘭氏陽性和革蘭氏陰性致病菌均有一定的抑制作用，并具有抗炎和免疫增強作用。

關鍵詞 安兒寧顆粒;抗菌;抗炎;免疫活性

Study on in vitro Antibacterial，Anti-inflammatory and Immunopotentiating Activity of An’erning Granules

LIU Fan1，2，ZHANG Yingying1，HOU Lin1，2（1. College of Pharmacy， Shandong University of TCM， Jinan 250355， China; 2. Qingdao Academy of Chinese Medical Sciences， Shandong University of TCM， Shandong Qingdao 266114， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To evaluate the in vitro antibacterial， anti-inflammatory and immunopotentiating activity of An’erning granules. METHODS： Micro-dilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration（MIC）of An’erning granules （1.562 5-100 mg/mL） on 10 kinds of common pathogenic bacteria. Using RAW 264.7 cells （mono-nuclear macrophage） as objects， LPS was used to replicate inflammation model. MTT assay was used to investigate the effects of An’erning granules （0.312 5-20 mg/mL） on proliferation and the release of NO of macrophage. Using spleen lymphocyte of BALB/c mice as objects， MTT assay was used to investigate the effects of An’erning granules （0.312 5-20 mg/mL） on lymphocyte proliferation. RESULTS： MIC of An’erning granules to Epidermis staphylococcus and Streptococcus pneumoniae was 6.25 mg/mL; MIC of An’erning granules to Proteus vulgaris， Klebsiella pneumoniae， Bacillus subtilis and Escherichia coli （standard strain） were 12.5 mg/mL; MIC of An’erning granules to Pseudomonas aeruginosa， Enterococcus faecalis and Bacillus cereus were 25 mg/mL; MIC of An’erning granules to E. coli （clinical isolates） and Salmonella typhia were 50 mg/mL. Compared with LPS model group， An’erning granules could significantly reduce the LPS-induced release of NO in RAW 264.7 cells at the dose of 0.312 5-1.25 mg/mL （P<0.05）. Compared with blank control group， An’erning granule had no interference on the proliferation of RAW 264.7 cells and spleen lymphocytes of mice or had a tendency to promote proliferation. It could significantly promote lymphocyte proliferation at doses of 0.625 and 0.312 5 mg/mL （P<0.05）. CONCLUSIONS： An’erning granules not only have certain in vitro inhibitory effects on clinical common Gram-positive and Gram-negative pathogenic bacteria， but also have anti-inflammatory and immunization enhancement effects.

KEYWORDS? ?An’erning granule;Antibacterial;Anti-inflammatory;Immune activity

呼吸道感染疾病是主要由細菌、病毒及少數支原體、衣原體等病原體感染引起的常見疾病，在兒童中發病率最高，而抗菌、抗炎是其主要治療手段之一[1]。但化學類抗菌藥物在治療感染性疾病的同時也常常引起患者體內菌群失調，加之其不合理使用導致的耐藥性逐年增加[2]，使得尋找其他安全、有效的藥物用于治療呼吸道感染疾病具有重要的臨床意義。

扶正祛邪類中藥能通過多途徑、多靶點發揮作用，在治療感染性疾病尤其是呼吸道感染方面優勢顯著[3]。安兒寧顆粒處方源于藏醫經典方“九西更卓”，至今已有300年應用史;該藥由天竺黃、人工牛黃、紅花、巖白菜、唐古特烏頭、高山辣根菜、甘草、洪連和檀香等9味藥材組方精制而成，具有清熱祛風、止咳化痰的功效，主要用于治療小兒風熱感冒、咽痛發熱、咳嗽有痰、上呼吸道感染見上述證候者[4]。在臨床實踐中發現，安兒寧顆粒不僅可用于治療小兒上呼吸道感染，還可用于治療小兒急性支氣管炎、支氣管肺炎等下呼吸道感染疾病，對以上疾病引起的發熱、咳嗽、咳痰、咽痛等癥狀也有較好的治療作用[5]。藥效學研究證實，安兒寧顆粒有較好的鎮咳祛痰、解熱鎮痛、抗炎作用[6]，且處方中的紅花、甘草也已明確具有抗菌、抗炎及增強免疫作用[7]。為明確安兒寧顆粒抗菌、抗炎和增強免疫的作用，本研究作為“安兒寧顆粒二次開發”課題的一部分，就該顆粒劑對常見呼吸道感染致病菌、脂多糖（LPS）誘導巨噬細胞炎癥反應的抑制作用以及對脾臟細胞增殖的影響進行考察，為該顆粒劑臨床用藥適應證范圍的拓寬、進一步深入開發及應用提供實驗依據。

1 材料

1.1 儀器

BS110S型電子天平（北京賽多利斯天平公司）;CKX-31型倒置顯微鏡（日本Olympus公司）;MK3型酶標儀（芬蘭Finnpipette公司）;TD5Z型酶標板離心機（湖南凱達科學儀器有限公司）;LH-SDS型超凈工作臺（濟南隆宏凈化設備有限公司）;HF90型CO2細胞恒溫培養箱（上海力申科學儀器有限公司）;MJ37600型全自動高壓滅菌鍋（山東德強儀器有限公司）;DW-86L286型低溫儲物箱（海爾電器有限公司）;101A-1E型電熱鼓風干燥箱（上海市試驗儀器總廠）;LRH -250A型生化培養箱（廣東醫療器械廠）;Vortex3型渦旋振蕩器（德國IKA公司）;SZH-82型氣浴恒溫振蕩器（江蘇省金壇市城東久久實驗儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

安兒寧顆粒（批號：02170612）由金訶藏藥股份有限公司提供。處方組成：天竺黃66.7 g、人工牛黃5.3 g、甘草53.3 g、洪連66.7 g、唐古特烏頭66.7 g、紅花53.3 g、巖白菜53.3 g、高山辣根菜53.3 g、檀香66.7 g。提取及制備工藝：取檀香、紅花提取揮發油（另器收集），殘渣與天竺黃、甘草、洪連、唐古特烏頭、巖白菜、高山辣根菜等6味藥材混合，加入10倍量水（mL/g）煎煮2次（分別煎煮3、2 h），合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.30～1.35（50 ℃）的稠膏;取稠膏加入人工牛黃和蔗糖（輔料）適量，制粒，干燥;加入檀香、紅花揮發油混勻，制成1 000 g，即得。以甘草酸的含量為指標進行成分轉移監測，每1 g干浸膏粉相當于安兒寧顆粒13.68 g，相當于生藥材6.57 g。因輔料蔗糖可導致抗菌試驗產生假陽性結果，故本研究以安兒寧顆粒未加蔗糖前的干浸膏粉（即稠膏在鼓風干燥箱中干燥后獲得）添加人工牛黃和檀香、紅花揮發油制成不含蔗糖的安兒寧顆粒樣品，用于后續試驗。

LPS（美國 Sigma 公司，批號：S11060）;硫酸慶大霉素注射液（辰欣藥業股份有限公司，批準文號：國藥準字H37021973，規格：2 mL/支）;2%RPMI 1640細胞維持液[賽默飛世爾科技（中國）有限公司，批號：61870-036];MH（B）肉湯（北京奧博星生物技術有限責任公司，批號：20151206001）;紅細胞裂解液（美國Hyclone公司，批號：00-4333-57）;胎牛血清（浙江天杭生物科技股份有限公司）;青霉素、鏈霉素（山東魯抗醫藥股份有限公司）;pH7.4磷酸鹽緩沖液（PBS，無菌級別）、0.25%胰蛋白酶-EDTA（美國Gibco公司）;二甲基亞砜（DMSO，天津化學試劑廠）;噻唑藍（MTT，北京索萊寶科技有限公司）;生理鹽水（辰欣藥業股份有限公司）;水為蒸餾水。

1.3 菌株及細胞株

革蘭氏陽性菌：肺炎鏈球菌CMCC（B）31001，大腸埃希菌（標準菌株）CMCC（B）44102，枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501，蠟樣芽孢桿菌CMCC（B）63301，傷寒沙門菌CMCC（B）50071，糞腸球菌ATCC 35667，大腸埃希菌（臨床分離菌株）D1812;革蘭氏陰性菌：表皮葡萄球菌ATCC 12228，銅綠假單胞菌CMCC（B）10104，變形桿菌CMCC（B）49027，肺炎克雷伯菌CMCC（B）46117。以上菌株均由山東中醫藥大學微生物教研室提供。

RAW 264.7細胞株（單核巨噬細胞）由山東省醫學科學院微生物室提供。

1.4 動物

BALB/c小鼠，SPF級，雄雌各半，體質量（20±2）g，由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供，動物生產許可證號：SCXK（魯）20140007。

2 方法

2.1 安兒寧顆粒的體外抑菌試驗

參考文獻[8]，采用微量稀釋法進行試驗。取“1.2”項下不含蔗糖的安兒寧顆粒樣品，以生理鹽水配制成100 mg/mL的藥液，以一次性無菌0.22 μm微孔過濾器濾去雜質和細菌，備用。在96孔板每行的第1～8孔分別加入液體細菌培養基[MH（B）肉湯粉21 g，加入1 000 mL水中加熱攪拌至溶解，121 ℃滅菌20 min，即得]100 μL;在第1孔中加入100 mg/mL的安兒寧顆粒藥液100 μL，從第2～6孔依次對半稀釋至最低質量濃度1.562 5 mg/mL，作為不同給藥劑量組（劑量根據文獻[8]方法制定）;在第7孔中加入質量濃度為0.4 mg/mL的慶大霉素藥液（生理鹽水配制）10 μL，作為陽性對照組;然后在每行的第1～8孔中均分別加入“1.3”項下11種菌株（其中大腸埃希菌有2種來源菌株）的菌液（1×106CFU/mL，均以液體細菌培養基配制）10 μL，第8孔作為陰性對照組;同時設置不含菌、只加入液體細菌培養基的空白對照組。將96孔板在37 ℃條件下培養24 h，觀察細菌的生長狀況。每種細菌的每個濃度均設置3個復孔。

2.2 安兒寧顆粒的體外抗炎活性試驗

2.2.1 安兒寧顆粒對巨噬細胞增殖的影響 參照文獻[9-10]方法進行試驗。取生長狀態良好的RAW 264.7細胞，用10% RPMI 1640細胞培養基調整密度至1×105個/mL，按每孔100 μL加入96孔板，然后每孔加入質量濃度為20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312 5 mg/mL的安兒寧顆粒藥液（取“1.2”項下不含蔗糖的安兒寧顆粒樣品，以2%RPMI 1640維持液配制）100 μL，作為不同給藥劑量組（劑量根據文獻[9-10]方法和預試驗結果制定）;同時設置加入等體積2% RPMI 1640維持液的空白對照組。將96孔板在37 ℃、5%CO2的條件下培養48 h后，每孔加入5 mg/mL的MTT溶液（以PBS配制）20 μL，繼續按上述條件培養4 h;棄去上清液，每孔加DMSO 150 μL，于37 ℃條件下采用酶標儀震蕩10 min后，在492 nm波長處測定各孔光密度（OD）值，用以表示存活細胞數。每組均設置3個復孔。

2.2.2 安兒寧顆粒對LPS誘導巨噬細胞釋放一氧化氮（NO）的影響 參照文獻[11]方法進行試驗。取生長狀態良好的RAW 264.7細胞，按“2.2.1”項下方法設置安兒寧顆粒20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312 5、0.156 25 mg/mL劑量組并加入相應藥液;另設空白對照組和LPS模型組，均分別加入等體積2% RPMI 1640維持液;除空白對照組外，各給藥劑量組和LPS模型組細胞均加入LPS溶液（以生理鹽水配制，終質量濃度均為2 μg/mL）。將96孔板在37 ℃、5%CO2的條件下培養48 h后，以Griess法[12]測定上清液OD值。以OD值為橫坐標（x）、細胞中的亞硝酸根離子含量（NO2-）為縱坐標（y），得標準曲線方程為y=45.685x2+115.82x-5.112 8（r=0.999 8）。按標準曲線法計算各組細胞上清液中NO2-的含量，用以間接表示細胞釋放的NO含量。按公式計算NO釋放抑制率：抑制率（%）=[1-（給藥組NO含量-空白對照組NO含量）/（模型組NO含量-空白對照組NO含量）]×100%。每組均設置3個復孔。

2.3 安兒寧顆粒的體外免疫活性試驗

參照文獻[13]方法進行試驗。

2.3.1 小鼠淋巴細胞的制備 取BALB/c小鼠，斷頸脫臼處死后放入75%乙醇中浸泡2～3 min后轉移至超凈工作臺上，在無菌條件下切開其腹腔，剪去與脾臟相連的組織，取下脾臟，用鈍頭鑷子在滅菌后的200目鋼絲網上磨碎，用無菌PBS 2 mL沖洗。將含脾臟細胞的PBS沖洗液以800 r/min離心10 min;棄去上清液，向離心管中加入紅細胞裂解液200 μL，于冰上放置13 min，以渦旋震蕩儀輕輕渦旋2次，再以800 r/min離心5 min;棄去上清液，加入紅細胞裂解液100 μL，再以800 r/min離心5 min;棄去上清液，將細胞以10%RPMI 1640 細胞培養基重懸，計數并稀釋至密度為1.5×106個/mL，備用。

2.3.2 安兒寧顆粒對小鼠淋巴細胞的影響 取“2.3.1”項下的脾臟淋巴細胞重懸液，用10%RPMI 1640 細胞培養液稀釋至密度為1.0×105個/mL，按每孔100 μL加入96孔板，按“2.2.1”項下方法設置安兒寧顆粒不同給藥劑量組并加入相應藥液;同時設置加入等體積2% RPMI 1640維持液的空白對照組。將96孔板在37 ℃、5%CO2的條件下培養44 h后，按“2.2.1”項下“每孔加入5 mg/mL的MTT溶液（以PBS配制）……用以表示存活細胞數”步驟同法操作。每組均設置3個復孔。

2.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件對數據進行統計分析。計量資料以x±s表示，組間比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 安兒寧顆粒的體外抗菌活性

肉眼觀察結果顯示，陰性對照組孔培養基渾濁、細菌生長良好，陽性對照組孔培養基澄清、細菌生長不明顯，空白對照組孔培養基澄清、細菌生長不明顯，提示安兒寧顆粒對11種細菌均有抑制作用。安兒寧顆粒對傷寒沙門菌和大腸埃希菌（臨床分離菌株）的最低抑菌濃度（MIC）為50 mg/mL，對糞腸球菌和蠟樣芽孢桿菌的MIC為25 mg/mL，對變形桿菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌（標準菌株）、肺炎克雷伯菌和枯草芽孢桿菌的MIC為12.5 mg/mL，對表皮葡萄球菌和肺炎鏈球菌的MIC為6.25 mg/mL。安兒寧顆粒的體外抑菌活性檢測結果見表1。

3.2 安兒寧顆粒的體外抗炎活性

3.2.1 安兒寧顆粒對RAW 264.7細胞增殖的影響 與空白對照組比較，安兒寧顆粒0.312 5、1.25 mg/mL劑量組細胞OD值未明顯降低，表明此劑量對細胞無毒性;0.625 mg/mL劑量組OD值有一定升高，表明此劑量有促進細胞增殖的趨勢，但差異均無統計學意義（P>0.05）。安兒寧顆粒對RAW 264.7細胞增殖的影響考察結果見表2（注：當安兒寧顆粒劑量≥2.5 mg/mL時，藥液顏色較深，干擾試驗結果，略去）。

3.2.2 安兒寧顆粒對LPS誘導RAW 264.7細胞釋放NO的影響 與空白對照組比較，LPS模型組細胞中NO含量顯著升高，差異有統計學意義（P<0.05），表明炎癥模型成功建立;與模型組比較，安兒寧顆粒0.312 5～1.25 mg/mL劑量組細胞中NO含量顯著降低，差異均有統計學意義（P<0.05），表明上述劑量安兒寧顆粒均能抑制LPS誘導的RAW 264.7細胞釋放NO，且NO釋放抑制率呈劑量依賴趨勢，提示其抗炎效果良好。安兒寧顆粒對LPS誘導RAW 264.7細胞釋放NO的影響考察結果見表3。

3.3 安兒寧顆粒的體外免疫活性

與空白對照組比較，安兒寧顆粒0.312 5、0.625 mg/mL劑量組細胞OD值顯著升高，差異有統計學意義（P<0.05），并呈劑量依賴趨勢，表明此劑量能明顯促進淋巴細胞增殖。安兒寧顆粒對小鼠脾臟淋巴細胞增殖的影響考察結果見表2（注：當安兒寧顆粒劑量≥2.5 mg/mL時，藥液顏色較深，干擾試驗結果，略去）。

4 討論

表皮葡萄球菌滋生于人體的皮膚和陰道等，是導致醫院交叉感染的主要細菌之一[14-15]。肺炎鏈球菌和肺炎克雷伯菌均存在于呼吸道，可引起支氣管炎、大葉性肺炎和腦膜炎等疾病，其中前者為革蘭氏陽性球菌，對青霉素類抗生素的耐藥現象目前極少，而后者為革蘭氏陰性球菌，存在于呼吸道和腸道，其感染致死率較高[16]。糞腸球菌、大腸埃希菌和變形桿菌均可引起消化道感染，誘發各種疾病[17]。枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌及傷寒沙門菌易污染食物產生腸毒素，并導致食物中毒[18]。銅綠假單胞菌感染易引起敗血癥和菌血癥，且具有高度耐藥性，在燒傷后感染可能導致患者死亡[19]。本研究發現，安兒寧顆粒對上述多種臨床常見細菌均具有一定抑制作用，表現出較好的廣譜抗菌效果;根據MIC值結果可知，其對表皮葡萄球菌和肺炎鏈球菌具有相對較強的抑制作用，對大腸埃希菌（臨床分離菌株）和傷寒沙門菌的抑制作用較弱。該顆粒劑的體內抗菌效果有待于進一步研究。

巨噬細胞是重要的免疫細胞，能對機體起到免疫防御、免疫監視、免疫調節和抗原呈遞等作用，在免疫系統中發揮著重要作用[20]。活化后的巨噬細胞對多種腫瘤細胞均有殺滅作用，可通過釋放NO、白細胞介素1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、IL-6、IL-12等因子誘導細胞免疫，殺滅病原體[21]。巨噬細胞主要通過釋放NO發揮抗病原生物、殺傷病毒感染細胞和腫瘤細胞等作用：一方面，巨噬細胞能通過分泌NO，提高對各種病原體殺滅的效率;另一方面，其產生的過量NO可促進炎癥發生，誘導炎癥因子，如TNF-α、IL-1β和IL-6等的釋放，從而啟動炎癥反應[9]。當巨噬細胞經LPS誘導活化后，會合成并釋放大量炎癥因子如NO，加重機體的炎癥反應，對組織器官造成損傷[21]。因此，可采用LPS建立巨噬細胞炎癥模型，并根據藥物降低巨噬細胞中NO釋放量的程度來反映藥物的抗炎活性[10]。本研究發現，安兒寧顆粒在0.312 5～1.25 mg/mL的劑量下對細胞中NO釋放的抑制率達46.29%～97.39%，表明其能抑制LPS誘導巨噬細胞中NO的產生，具有一定的體外抗炎活性。

脾臟是哺乳動物最重要的外周免疫器官，脾細胞中含有約40%T淋巴細胞和60%B淋巴細胞，是機體應對外界抗原入侵、進行免疫反應、產生相應抗體的重要器官，其主要參與體液免疫，在細胞免疫中也具有重要的作用[22]。有些免疫細胞激活物如LPS在體內外均可刺激脾臟中的B淋巴細胞增殖分化，刀豆蛋白或植物血凝素等在體內外可刺激脾臟中T淋巴細胞的增殖分化，進而增強機體的免疫應答能力，因此脾臟細胞的增殖情況可直接反映機體的免疫狀態[23]。本研究結果顯示，安兒寧顆粒在0.625、0.312 5 mg/mL的劑量下作用于脾臟細胞后的OD值較空白對照組明顯增高，表明該顆粒劑在一定劑量下可促進脾臟淋巴細胞的增殖，并呈現劑量依賴趨勢，提示其具有增強機體免疫的作用。

綜上所述，安兒寧顆粒在體外對臨床常見的革蘭氏陽性和革蘭氏陰性致病菌均有一定的抑制作用，并具有抗炎和增強免疫的作用，在感染性疾病的治療方面具有較好的前景，尚待進一步深入研究開發。

參考文獻

[ 1 ] 佟德恩.急診治療上呼吸道感染臨床用藥分析[J].中國衛生產業，2013，10（23）：10-11.

[ 2 ] 王兆霞.抗生素的使用情況調查及細菌耐藥性分析[J].北方藥學，2018，15（3）：191.

[ 3 ] 許玲，呂書勤.扶正祛邪中藥對急性呼吸窘迫綜合征模型大鼠影響研究[J].實用中醫藥雜志，2009，25（3）：141- 142.

[ 4 ] 劉憲勇，付加雷，王麗娥，等.安兒寧顆粒治療小兒上呼吸道感染108例療效觀察[J].山東醫藥，2009，49（15）：79.

[ 5 ] 王海蘋.安兒寧顆粒藥理作用及臨床應用[J].中國中醫藥現代遠程教育，2014，12（3）：160-161.

[ 6 ] 宋艷芹，杜源，孫雪，等.安兒寧顆粒解熱抗炎鎮痛作用[J].醫藥導報，2013，10（32）：1300-1302.

[ 7 ] 扈曉佳，殷莎，袁婷婷，等.紅花的化學成分及其藥理活性研究進展[J].藥學實踐雜志，2013，31（3）：161-169.

[ 8 ] 王新紅，殷麗，魏娟，等.西吡氯銨漱口液對銅綠假單胞菌和MRSA的抗菌活性研究[J].現代醫藥衛生，2015，31（9）：1389-1391.

[ 9 ] 孟慶然.酸漿宿萼總皂苷對巨噬細胞炎癥反應的調控作用[D].晉中：山西農業大學，2014.

[10] 房雷雷，趙肖通，張彥青，等.姬松茸多糖誘導巨噬細胞釋放NO的機制[J].食品與機械，2018，34（5）：16-19.

[11] 劉鵬飛，朱偉，萬進，等.人參多糖對LPS誘導小鼠巨噬細胞炎癥因子生成的抑制作用及其機制[J].中國實驗方劑學雜志，2018，24（14）：102-107.

[12] 于紅紅，吳瑪莉，張智偉，等.黃連解毒湯含藥血清對脂多糖誘導的巨噬細胞炎癥因子影響研究[J].亞太傳統醫藥，2016，12（14）：11-13.

[13] 張艷.溪黃草提取物的免疫活性篩選及其有效單體成分的免疫抑制機理研究[D].上海：華東理工大學，2006.

[14] 曹曉光.臨床分離表皮葡萄球菌的耐藥性分析及與icaD基因表達關系的研究[D].合肥：安徽醫科大學，2012.

[15] 席曉霞.初生嬰兒腸道菌群與母體各部位菌群相關性研究[D].呼和浩特：內蒙古農業大學，2017.

[16] HAQUE NZ，ZUNIGA LC，PEYRANI P，et al. Relationship of vancomycin minimum inhibitory concentration to mortality in patients with methicillin-resistant Staphylococcus aureushospital-acquired，ventilator-associated，or health-care-associated pneumonia[J]. Chest，2010，138（6）：1356-1362.

[17] 劉百祥，黃旭，賓琳，等.試管中椒艾合劑對常見腸道感染菌的抑制作用[J].中醫藥導報，2006，12（3）：9-10、21.

[18] 張穎穎，付業佩，王萍.羅勒多糖抗菌作用研究[J].山東化工，2017，46（20）：6-7.

[19] 王文晶，黃茂，趙旺勝，等.下呼吸道感染銅綠假單胞菌流行和耐藥現狀分析[J].實用臨床醫藥雜志，2006，10（3）：33-36.

[20] MULLINS DW，WALKER TM，BURGER CJ，et al.Taxo-lmediated changes in fibrosarcoma-induced immune cell function：modulation of antitumor activities[J]. Cancer Immunol Immunother，1997，45（1）：20-28.

[21] 李敏，劉耕陶.雙環醇對脂多糖誘導巨噬細胞iNOS蛋白的表達和NF-kB活化的抑制作用[J].中國藥理學通報，2006，22（12）：1438-1443.

[22] 陳星星，李焰，楊小燕，等.鐵皮石斛對免疫抑制模型小鼠脾臟淋巴細胞體外增殖的影響[J].中國獸醫雜志，2018，54（4）：100-103.

[23] 林志.藥物免疫毒性評價關鍵技術的研究[D].北京：北京中醫藥大學，2013.

（收稿日期：2018-12-28 修回日期：2019-07-02）

（編輯：段思怡）