腦心通對(duì)高血壓大鼠左心室重構(gòu)的影響及機(jī)制

王景武 李彬彬 孫克陸 吳永祥

摘要?目的：探討腦心通對(duì)自發(fā)性高血壓（SHR）大鼠左心室重構(gòu)的影響及機(jī)制。方法：將SHR大鼠隨機(jī)分為低/高劑量組、模型組和對(duì)照組，每組20只，15只WKY大鼠為正常組。模型組灌胃30.0 mg/kg卡托普利，低/高劑量組灌胃1.0、2.0 g/kg腦心通，正常組、模型組大鼠則灌胃等量生理鹽水，1次/d，各組均干預(yù)3個(gè)月。分別于干預(yù)4、8、12周檢測(cè)各組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓，超聲心動(dòng)圖評(píng)估各組大鼠左心室形態(tài)及左心收縮功能，用蘇木精-伊紅（HE）染色觀察大鼠心肌組織病理學(xué)形態(tài)，蛋白免疫印跡法檢測(cè)各組大鼠心肌組織中PPARα、PPARγ蛋白表達(dá)。結(jié)果：與正常組比較，術(shù)后4周、8周、12周模型組尾動(dòng)脈收縮壓升高;而低/高劑量組和對(duì)照組較模型組降低，且高劑量組低于低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組LVDd、LVDs較正常組升高，而低/高劑量觀察組和對(duì)照組較模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;模型組LVSd、LVSs、LVEF、FS較正常組降低，而低/高劑量組和對(duì)照組較模型組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與正常組比較，模型組大鼠心肌組織中PPARα、PPARγ蛋白水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而對(duì)照組及低/高劑量組較模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：腦心通可劑量依賴性降低SHR大鼠血壓，減輕大鼠左心室重構(gòu)，其機(jī)制可能與上調(diào)PPARα、PPARγ蛋白表達(dá)相關(guān)。

關(guān)鍵詞?高血壓;腦心通;血壓;心肌損傷;過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體

Effects and Mechanism of Naoxintong on Left Ventricular Remodeling in Hypertensive Rats

Wang Jingwu1， Li Binbin1， Sun Kelu1， Wu Yongxiang2

（1 First Department of Cardiology， 901 Hospital of the Chinese People′s Liberation Army， Hefei 230031， China; 2 Emergency Room， Jiangsu People′s Hospital， Nanjing 210000， China）

Abstract?Objective：To investigate the effects and mechanism of Naoxintong on left ventricular remodeling in spontaneous hypertension（SHR）rats.Methods：SHR rats were randomly divided into a low/high dose experimental group， a model group and a control group， with 20 rats in each group and 15 WKY rats in the normal group.The model group was given 30.0 mg/kg captopril， and the low/high dose experimental group was given 1.0 and 2.0 g/kg Naoxintong， and the model group and the normal group were given the same amount of saline once a day.All rats were intervened for 3 months.Systolic blood pressure of tail artery was measured at 4， 8 and 12 weeks after intervention.Left ventricular morphology and left ventricular systolic function were evaluated by echocardiography.Myocardial histopathological morphology was observed by hematoxylin-eosin（HE）staining.PPARα and PPARγ protein in myocardium were detected by Western blotting（WB）.Results：Compared with the normal group， the systolic pressure of tail artery in the model group increased at 4， 8 and 12 weeks after operation（P<0.05）; compared with the model group， the systolic pressure of tail artery in the low/high dose experimental group and the control group decreased at 4， 8 and 12 weeks after intervention， and the systolic pressure of tail artery in the high dose experimental group was lower than that in the low dose experimental group（P<0.05）.LVDd and LVDs in model group were higher than those in normal group， while those in low/high dose group and control group were lower than those in model group（P<0.05）; LVSd， LVSs， LVEF and FS in the model group were lower than those in normal group， while those in the low/high dose group and the control group were higher than those in the model group（P<0.05）.Compared with the normal group， the contents of PPARα and PPARγ protein in the myocardium of the model group increased（P<0.05）.Compared with the model group， the contents of PPARα and PPARγ protein in the myocardium of the control group and the low/high dose experimental group decreased significantly（P<0.05）.Conclusion：Naoxintong can reduce blood pressure and left ventricular remodeling in SHR rats in a dose-dependent manner.Its mechanism may be related to up-regulation of PPARα and PPARγ protein expression.

Key Words?Hypertension; Naoxintong; Blood pressure; Myocardial injury; Peroxisome proliferator-activated receptor

中圖分類號(hào)：R283;R544文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.12.021

高血壓為心腦血管疾病發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素之一，也是我國(guó)疾病譜中的重要慢性病[1]。高血壓可引起心臟等多處靶器官損傷，出現(xiàn)心室壁增厚及心肌重量的增加，表現(xiàn)為心肌重塑及心肌細(xì)胞肥大和心肌纖維化，因此心力衰竭、心肌梗死及腦卒中等并發(fā)癥也導(dǎo)致高血壓具有較高的臨床致殘率和致死率[2-3]。腦心通膠囊臨床治療腦梗死恢復(fù)期有效中藥之一，其抗血栓、腦保護(hù)及改善認(rèn)知功能作用顯著，可調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)環(huán)境[4-5]。研究顯示，腦心通膠囊可保護(hù)血管內(nèi)皮功能、改善心肌細(xì)胞代謝、增加心臟供血，減少心血管不良事件的發(fā)生[6]。本研究旨在探究腦心通對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠左心室重構(gòu)的影響及機(jī)制。現(xiàn)報(bào)道如下。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動(dòng)物

SPF級(jí)SHR大鼠，野生型WKY大鼠10只，雄性，10周齡，體質(zhì)量180～220 g，均購(gòu)自山東綠葉制藥有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：SCXK（魯）20130009。

1.1.2?藥物

腦心通膠囊（陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：190230，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20025001）;卡托普利片（江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：63180501）。

1.1.3?試劑與儀器

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）檢測(cè)試劑盒（美國(guó)R&D公司，貨號(hào)：LOT201602—DZE10824）;過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α（PPARα，批號(hào)：sc-398394）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）抗體（美國(guó)Santa Cruz公司，批號(hào)：E-sc-72738）等。

鼠尾血壓檢測(cè)儀（上海埃德儀器國(guó)際貿(mào)易公司，型號(hào)：PowerLab-NIBP）;自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)R&D公司，型號(hào)：Model-550）;超凈臺(tái)（蘇州蘇凈集團(tuán)安泰公司，型號(hào)：JX192546VD-650）;凝膠成像分析系統(tǒng)（美國(guó)Media Cybernetics公司，型號(hào)：Meta-Morph）等。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備

將60只SHR隨機(jī)分為低/高劑量組、模型組和對(duì)照組，每組20只，15只WKY大鼠為正常組。

1.2.2?給藥方法

模型組灌胃30.0 mg/kg卡托普利，低/高劑量組灌胃1.0 g/kg/2.0 g/kg腦心通，正常組、模型組則灌胃等體積生理鹽水，1次/d，均干預(yù)3個(gè)月，每周復(fù)測(cè)大鼠體質(zhì)量調(diào)整藥物劑量。

1.2.3?檢測(cè)指標(biāo)與方法

大鼠血壓的檢測(cè)：分別于干預(yù)4、8、12周，各組隨機(jī)選取5只進(jìn)行尾靜脈壓檢測(cè)，將大鼠置于30 ℃溫箱內(nèi)，連接鼠尾血壓檢測(cè)儀，檢測(cè)靜態(tài)時(shí)尾動(dòng)脈收縮壓。

超聲心動(dòng)圖評(píng)估各組大鼠左心室形態(tài)及左心收縮功能：藥物干預(yù)結(jié)束后，大鼠以水合氯醛腹腔注射麻醉，取平臥位，剪胸毛，涂抹耦合劑，以超聲心動(dòng)儀進(jìn)行檢測(cè)，探頭垂直于左胸壁，并于胸骨成25°夾角，顯示心臟沿二尖瓣口至心尖方向的左室長(zhǎng)軸成像;然后將探頭旋轉(zhuǎn)90°，顯示垂直于左室長(zhǎng)軸的左室短軸成像。在左室長(zhǎng)軸像引導(dǎo)下，左室內(nèi)徑最大處顯示M型圖像，記錄左室舒張/收縮末期內(nèi)徑（LVDd/LVDs）、左室舒張/收縮末期室間隔厚度（LVSd/LVSs），計(jì)算LVEF、左室短軸縮短率（FS）[7]。

大鼠心臟大體觀察及重量檢測(cè)：稱取大鼠體質(zhì)量，經(jīng)麻醉后取出心臟，稱取心臟重量及左心室重量，計(jì)算心臟重量與體質(zhì)量比值（HW/BW）、左心室重量與體質(zhì)量比值（LV/BW）。

蘇木精-伊紅（HE）染色觀察大鼠心肌組織病理?yè)p傷：采集各組大鼠心肌組織，常規(guī)制備石蠟組織切片，厚度約5 μm，蘇木精染色洗滌后用伊紅染色后封片，顯微鏡觀察[8]。

蛋白免疫印跡法檢測(cè)各組大鼠心肌組織中PPARα、PPARγ信號(hào)通路蛋白表達(dá)：各組大鼠心肌組織用裂解液裂解，測(cè)定蛋白濃度，聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯膜，加入PPARα、PPARγ一抗及二抗，4 ℃搖床過(guò)夜后，化學(xué)發(fā)光底物發(fā)光并曝光后，用Meta-Morph凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度掃描分析[9]。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間行t檢驗(yàn)，組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?腦心通對(duì)SHR大鼠尾動(dòng)脈收縮壓的影響

干預(yù)后4周正常組、模型組、低/高劑量觀察組和對(duì)照組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓分別為（120.25±3.69）mm Hg、（179.68±6.48）mm Hg、（172.46±3.94）mm Hg、（163.45±2.45）mm Hg、（164.35±2.85）mm Hg。干預(yù)后8周正常組、模型組、低/高劑量觀察組和對(duì)照組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓分別為（119.58±6.24）mm Hg、（189.52±12.05）mm Hg、（168.45±4.69）mm Hg、（159.68±6.24）mm Hg、（162.45±3.48）mm Hg。干預(yù)后12周正常組、模型組、低/高劑量觀察組和對(duì)照組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓分別為（121.36±5.06）mm Hg、（215.68±4.25）mm Hg、（156.48±5.29）mmHg、（150.69±4.82）mmHg、（154.26±2.38）mm Hg。與正常組比較，術(shù)后4周、8周、12周模型組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓升高，而低/高劑量組和對(duì)照組大鼠較模型組降低，且高劑量組低于低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2?腦心通對(duì)SHR大鼠超聲心動(dòng)圖指標(biāo)的影響

模型組大鼠LVDd、LVDs較正常組升高，而低/高劑量觀察組和對(duì)照組較模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;模型組LVSd、LVSs、LVEF、FS較正常組降低，而低/高劑量觀察組和對(duì)照組較模型組升高，且高劑量組低于低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.3?腦心通對(duì)SHR大鼠心肌組織病理學(xué)形態(tài)的影響

HE染色顯示，正常組大鼠心肌組織心肌纖維排列整齊，間隙正常，且細(xì)胞間質(zhì)未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及充血;模型組大鼠心肌纖維紊亂，心肌細(xì)胞肥大，伴有明顯的心肌間質(zhì)纖維化;低/高劑量組和對(duì)照組上述病理學(xué)變化較模型組顯著改善，血管周?chē)w維化及間質(zhì)纖維化減輕，高劑量組和對(duì)照組大鼠心肌組織病理?yè)p傷減輕程度更為顯著。見(jiàn)圖1。正常組、模型組、低/高劑量組和對(duì)照組大鼠HW/BW分別為（2.65±0.21）mg/g，（5.87±0.58）mg/g，（5.06±0.14）mg/g，（4.21±0.17）mg/g，（4.06±0.21）mg/g，LV/BW分別為（0.54±0.02）mg/g，（1.64±0.12）mg/g，（1.26±0.03）mg/g，（0.89±0.03）mg/g，（0.86±0.07）mg/g。與正常組比較，模型組大鼠HW/BW、LV/BW水平升高，而低/高劑量組和對(duì)照組低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.4?腦心通對(duì)SHR大鼠心組織中PPARα、PPARγ蛋白表達(dá)的影響

正常組、模型組、低/高劑量觀察組和對(duì)照組大鼠心肌組織中PPARα蛋白水平分別為（1.24±0.27）、（0.43±0.35）、（0.81±0.19）、（0.86±0.23）、（0.77±0.24），PPARγ蛋白分別為（1.67±0.24）、（0.21±0.08）、（0.62±0.12）、（0.75±0.19）、（0.89±0.11）。與正常組比較，模型組大鼠心肌組織中PPARα、PPARγ蛋白水平降低，而對(duì)照組及低/高劑量組較模型組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖2。

3?討論

原發(fā)性高血壓屬于中醫(yī)“頭痛”“眩暈”“肝風(fēng)”等范疇，先天稟賦不足、情志失調(diào)、飲食不節(jié)、體虛及過(guò)度勞累等導(dǎo)致患者肝腎陰虧、陰陽(yáng)失衡、虛火外越、血隨氣逆;現(xiàn)代人生活節(jié)奏與生活方式的轉(zhuǎn)變使得機(jī)體憂思過(guò)度，勞倦傷脾，加之過(guò)食肥甘厚味，脾胃受損則致脾運(yùn)失職，水谷不化，濕氣化痰，痰阻于內(nèi)，風(fēng)痰上擾，蒙蔽清陽(yáng)，清陽(yáng)不升，濁陰不降，清竅失養(yǎng)，最終引發(fā)眩暈[10-11]。腦心通膠囊中黃芪益氣行血，地龍、全蝎熄風(fēng)通絡(luò)，丹參、赤芍、川芎、當(dāng)歸、紅花活血化瘀，桂枝、雞血藤溫經(jīng)通絡(luò)，乳香、沒(méi)藥活血止痛。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，地龍、全蝎可溶栓并預(yù)防血栓形成;赤芍、紅花、乳香可抑制血小板聚集、降低血液黏度;黃芪可擴(kuò)張腦血管，增加腦部血流量，清除氧自由基，抗氧化應(yīng)激損傷[12-13]。本研究結(jié)果顯示，與正常組比較，術(shù)后4周、8周、12周模型組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓升高;與模型組比較，干預(yù)后4周、8周、12周低/高劑量組和對(duì)照組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓降低，且高劑量組低于低劑量組，表明腦心通可降低SHR大鼠血壓，且呈現(xiàn)劑量依賴性。

高血壓可致左心室肥厚，除左室重量增加外，心肌間質(zhì)結(jié)構(gòu)也發(fā)生了改變，心室重構(gòu)與心力衰竭、心律失常和猝死等有密切的關(guān)系，是心臟事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，也是心臟疾病走向終末期的一個(gè)必然階段[14-15]。左心室肥厚發(fā)生過(guò)程中心肌細(xì)胞體積變大，膠原纖維合成增加，使左室順應(yīng)性下降，心肌收縮力下降，出現(xiàn)收縮功能障礙;心腔擴(kuò)張，心室舒張末期容量增大，舒張功能下降，心腔內(nèi)舒張壓升高，心室充盈壓及左房壓力升高。因此目前認(rèn)為高血壓治療的關(guān)鍵之一是防治和逆轉(zhuǎn)左心室重塑。腦心通膠囊具有心臟保護(hù)作用，楊岳等[16]等研究發(fā)現(xiàn)，腦心通膠囊可增強(qiáng)CXCR4蛋白表達(dá)促進(jìn)心臟干細(xì)胞遷移，治療缺血性心臟病。腦心通膠囊可增加心肌毛細(xì)血管密度，抑制心肌梗死小鼠心肌纖維化;通過(guò)調(diào)控VEGF/eNOS信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)，促進(jìn)血管新生，改善心肌梗死小鼠的心肌損傷[17]。本研究中，低/高劑量觀察組和對(duì)照組左心室形態(tài)及左心收縮功能較模型組有明顯的改善，心肌細(xì)胞肥大及纖維化程度減輕，表明腦心通可有效減輕大鼠左心室重構(gòu)，具有較好的心肌保護(hù)作用。PPARs可促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化，抑制炎性反應(yīng)遞質(zhì)生成，調(diào)節(jié)機(jī)體的糖平衡，改變心肌細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的水平，從而減輕心室重構(gòu)，對(duì)心血管具有保護(hù)作用;PPARα通過(guò)調(diào)節(jié)脂肪和能量代謝為心臟提供能量，PPARα激動(dòng)劑可逆轉(zhuǎn)AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大，PPARγ可調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分化、能量代謝，PPARγ激動(dòng)劑可抑制心肌肥厚并改善左心室功能，對(duì)心肌缺血/再灌注具有保護(hù)作用[18]。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，對(duì)照組及低/高劑量組大鼠心肌組織中PPARα、PPARγ蛋白含量明顯升高。提示腦心通可能是上調(diào)PPARα、PPARγ蛋白表達(dá)發(fā)揮其心肌保護(hù)作用的。

綜上所述，腦心通可劑量依賴性降低SHR大鼠血壓，減輕大鼠左心室重構(gòu)，其機(jī)制可能與上調(diào)PPARα、PPARγ蛋白表達(dá)相關(guān)。

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（2019-09-27收稿?責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）