廣東沿海地區(qū)凡納濱對(duì)蝦EHP、VPAHPND和SHIV感染情況調(diào)查與分析

孫衛(wèi)芳 黃小帥 胡曉娟 文國(guó)樑 曹煜成 張建設(shè)

摘要：【目的】掌握廣東沿海對(duì)蝦主養(yǎng)區(qū)蝦肝腸胞蟲（EHP）、急性肝胰腺壞死病致病性副溶血弧菌（VPAHPND）和蝦血細(xì)胞虹彩病毒（SHIV）3種病原的流行趨勢(shì)及特點(diǎn)，為廣東省對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的病害防控提供參考依據(jù)?！痉椒ā拷⑨槍?duì)EHP、VPAHPND和SHIV的PCR檢測(cè)方法，在廣東茂名和汕尾兩地區(qū)采集凡納濱對(duì)蝦樣品檢測(cè)EHP、VPAHPND和SHIV 3種病原，并針對(duì)生長(zhǎng)緩慢或個(gè)體規(guī)格差異明顯的部分養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行病原感染情況調(diào)查?！窘Y(jié)果】廣東茂名地區(qū)凡納濱對(duì)蝦幼蝦的EHP、VPAHPND和SHIV攜帶率分別為20.24%、2.38%和9.52%，汕尾地區(qū)凡納濱對(duì)蝦幼蝦的EHP、VPAHPND和SHIV攜帶率分別為26.98%、4.76%和42.86%。根據(jù)養(yǎng)殖模式劃分，土塘養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦幼蝦以攜帶EHP為主，攜帶率高達(dá)40.48%;高位池養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦幼蝦主要感染SHIV，攜帶率為29.27%;工廠化池塘中，凡納濱對(duì)蝦幼蝦的EHP和SHIV攜帶率較高，分別為21.88%和23.44%。池塘水、水源水、蝦苗及豐年蟲等養(yǎng)殖要素均能檢出病原，其中池塘水和水源水中EHP和SHIV的檢出率較高。對(duì)個(gè)體規(guī)格差異明顯的患病凡納濱對(duì)蝦群體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大、小規(guī)格樣品的EHP感染率分別為30.00%和80.00%;在表現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢的患病凡納濱對(duì)蝦群體中，大、小規(guī)格幼蝦樣品的EHP攜帶率分別為95.00%和100.00%。【結(jié)論】廣東沿海地區(qū)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦的EHP和SHIV攜帶率較高、流行趨勢(shì)明顯，而VPAHPND檢出率較低、流行趨勢(shì)不明顯。養(yǎng)殖水體是EHP、VPAHPND和SHIV的重要傳播媒介，生物餌料也是養(yǎng)殖過程中病原傳播的源頭。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦的病原流行特點(diǎn)，尤其針對(duì)EHP和SHIV高攜帶率的現(xiàn)象，從病原、宿主和環(huán)境三方面同時(shí)著手進(jìn)行防控，采取綜合防控措施減少病害發(fā)生。

關(guān)鍵詞： 凡納濱對(duì)蝦;蝦肝腸胞蟲（EHP）;AHPND致病性副溶血弧菌（VPAHPND）;虹彩病毒（SHIV）;攜帶率

中圖分類號(hào)： S945.46? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2019）10-2343-07

Detection and analysis of Enterocytozoon hepatopenaei（EHP）， Vibrio parahaemolyticus acute hepatopancreatic necrosis disease（VPAHPND） and shrimp hemocyte iridescent virus（SHIV） from Litopenaeus vannamei in coastal areas of Guangdong Province

SUN Wei-fang1，2， HUANG Xiao-shuai2， HU Xiao-juan2， WEN Guo-liang1，2*，

CAO Yu-cheng2*， ZHANG Jian-she1

（1Zhejiang Ocean University/National Engineering Research Center for Facilitated Marine Aquaculture， Zhoushan， Zhejiang? 316022， China; 2South China Sea Fisheries Research Institute， Chinese Academy Fishery Sciences/Guangdong Provincial Key Laboratory of Fishery Ecology and Environment/Key Laboratory for Exploitation & Utilization of Marine Fisheries Resource in South China Sea，Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Guangzhou? 510300， China）

Abstract：【Objective】The aims of the study were to detect and analyze the infections of Enterocytozoon hepatopenaei（EHP）， Vibrio parahaemolyticus acute hepatopancreatic necrosis disease（VPAHPND） and shrimp hemocyte iridescent virus（SHIV） from Litopenaeus vannamei in coastal areas of Guangdong Province and to provide data reference for prevention and control for diseases in shrimp aquaculture in Guangdong. 【Method】The PCR amplification methods were established to estimate the distribution of EHP， VPAHPND and SHIV. The samples from L. vannameiculture areas in Maoming and Shanwei， Guangdong were collected for EHP， VPAHPND and SHIV infection investigation. Pathogen infection was investigated on L. vannamei with slow growth or obvious individual body size difference. 【Result】The positive ratios of EHP， VPAHPND and SHIV of juvenile L. vannameiin Maoming were 20.24%， 2.38% and 9.52%， respectively，while that were 26.98%， 4.76% and 42.86% for EHP， VPAHPND and SHIV in Shanwei， respectively. Different aquaculture modes had varying pathogen distributions. EHP was the main pathogen in earthen pond， with a positive ratio of 40.48%. While SHIV was the main pathogen in pond above sea level， with a positive ratio of 29.27%. In industrial aquaculture pond， both EHP and SHIV showed high levels of positive ratio， which were 21.88% and 23.44%， respectively. Inaddition， aquaculture elements， such as pond water， source water， post-larvae and Artemia， could carry the pathogen. Furthermore， both the pond and source water showed high positive ratios of EHP and SHIV. In the L. vannamei population showing irregular size， EHP positive ratios were 30.00% and 80.00% in big size group and small size group， respectively. For L. vannamei population with stagnation problem， both big size and small size group showed high levels of EHP positive ratios（95.00% and 100%， respectively）. 【Conclusion】In coastal areas of Guangdong，both EHP and SHIV show high positive ratios in L. vannamei， which indicates high risk of disease outbreaks. While the positive ratio of VPAHPND is relatively low. Aquaculture water may serve as the important vehicle for pathogen transmission for EHP， VPAHPND and SHIV.In addition， live baits are also potential vehicle for pathogen transmission in aquaculture pond. Therefore， the breeding of L. vannamei should be based on the prevalence of pathogens in the aquaculture， especially for the high positive ratios of EHP and SHIV.A comprehensive strategy involving pathogen， host and environment should be used for disease prevention and control.

Key words： Litopenaeus vannamei; Enterocytozoon hepatopenaei（EHP）; Vibrio parahaemolyticus acute hepatopancreatic necrosis disease（VPAHPND）; Shrimp hemocyte iridescent virus（SHIV）; positive ratios

0 引言

【研究意義】凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）又稱南美白對(duì)蝦，原產(chǎn)于中南美洲太平洋沿岸水域，因具有抗逆性強(qiáng)、易養(yǎng)殖及生長(zhǎng)快等特點(diǎn)，自1988年引入我國(guó)后迅速遍及全國(guó)，現(xiàn)已成為我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖的主導(dǎo)品種之一（王興強(qiáng)等，2004）。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境惡化及養(yǎng)殖模式不規(guī)范等問題日益突出，導(dǎo)致其病害頻發(fā)，給我國(guó)的對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大損失（王麗花等，2012;文國(guó)樑等，2015;Qiu et al.，2017）。因此，迫切需要對(duì)主產(chǎn)區(qū)養(yǎng)殖對(duì)蝦進(jìn)行病原檢測(cè)，并監(jiān)控病原流行趨勢(shì)，以確保對(duì)蝦病害得到有效防控及促進(jìn)對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】當(dāng)前，我國(guó)養(yǎng)殖對(duì)蝦病原感染呈多樣化，多種病原體（病毒、細(xì)菌及其他微生物等）均能誘發(fā)疾?。ㄍ鹣?，2013;張小明等，2017;曹煜成等，2018）。自20世紀(jì)90年代對(duì)蝦白斑綜合征病毒?。╓hite spot syndrome，WSS）在亞洲暴發(fā)以來，給全球的對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失，全球養(yǎng)殖對(duì)蝦產(chǎn)量因此大幅削減近50%（曹煜成等，2014）。近年來，隨著對(duì)蝦生物防控技術(shù)的推廣應(yīng)用使對(duì)蝦白斑綜合征得到有效控制，但蝦肝腸胞蟲（Enterocytozoon hepatopenaei，EHP）、急性肝胰腺壞死（Acute hepatopancreatic necrosis disease，AHPND）、蝦血細(xì)胞虹彩病毒（Shrimp hemocyte iridescent virus，SHIV）等多種病害的暴發(fā)給當(dāng)前對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)帶來新的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)（董小林等，2018;蔣葛等，2019）。其中，EHP是2009年在泰國(guó)生長(zhǎng)緩慢的養(yǎng)殖斑節(jié)對(duì)蝦中首次發(fā)現(xiàn)并命名，其主要寄生在肝胰腺組織，是導(dǎo)致對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢的重要因素之一（Prasertsri et al.，2009;Amornrat et al.，2013）。AHPND于2010年起在越南、馬來西亞及我國(guó)南方對(duì)蝦養(yǎng)殖地區(qū)出現(xiàn)，其病原菌主要為AHPND致病性副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus AHPND，VPAHPND），能引起養(yǎng)殖對(duì)蝦大批量死亡（唐小千等，2016;Aranguren et al.，2017;賈丹等，2018）。Qiu等（2017）從凡納濱對(duì)蝦中分離出一種新型虹彩病毒，命名為SHIV，并證實(shí)該病毒能引發(fā)對(duì)蝦肝胰腺萎縮、褪色，以及空腸和空胃等現(xiàn)象，繼而導(dǎo)致對(duì)蝦死亡（Xu et al.，2016）?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】據(jù)養(yǎng)殖戶反映及相關(guān)檢測(cè)報(bào)道顯示，EHP、VPAHPND和SHIV在我國(guó)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦中已呈流行趨勢(shì)（施慧等，2017;陳曉玲等，2018;鄭曉葉等，2018），但至今鮮見針對(duì)這3種病原進(jìn)行系統(tǒng)調(diào)查分析的研究報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問題】在廣東茂名和汕尾兩地采集凡納濱對(duì)蝦樣品檢測(cè)EHP、VPAHPND和SHIV，并針對(duì)生長(zhǎng)緩慢或個(gè)體規(guī)格差異明顯的部分養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行病原感染情況調(diào)查，旨在掌握廣東沿海對(duì)蝦主養(yǎng)區(qū)這3種病原的流行趨勢(shì)及特點(diǎn)，為廣東省對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的病害防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

2017—2018年從廣東省茂名市和汕尾市對(duì)蝦養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)的土塘、高位池及工廠化養(yǎng)殖池塘采集凡納濱對(duì)蝦幼蝦樣品進(jìn)行特定病原感染情況調(diào)查，同時(shí)收集蝦苗、池塘水、水源水和豐年蟲餌料等養(yǎng)殖要素進(jìn)行病原檢測(cè)，了解病原的傳播特點(diǎn)。此外，于2018年6月采樣檢測(cè)汕尾市陸豐德泰豐養(yǎng)殖場(chǎng)工廠化養(yǎng)殖車間表現(xiàn)滯長(zhǎng)（生長(zhǎng)緩慢）的患病幼蝦（養(yǎng)殖周期41 d）;于2018年8月采樣檢測(cè)茂名市廣東冠利海洋生物有限責(zé)任公司工廠化養(yǎng)殖車間個(gè)體規(guī)格差異明顯的患病幼蝦（養(yǎng)殖周期25 d）。幼蝦、蝦苗和豐年蟲樣品經(jīng)冷凍后低溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，-20 ℃保存?zhèn)溆?池塘水和水源水經(jīng)低溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室后于4 ℃短期保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2 DNA提取

1. 2. 1 基因組DNA提取 幼蝦、蝦苗和豐年蟲樣品參照E.Z.N.A. Tissue DNA Kit（OOMEGA Bio Tek）試劑盒說明提取基因組DNA。其中，幼蝦樣品經(jīng)解剖后剪取約30 mg肝胰腺組織，蝦苗樣品取整個(gè)蝦體，豐年蟲稱取約30 mg樣品。各樣品分別進(jìn)行研磨及后續(xù)試驗(yàn)。采用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA完整性，以NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)（NanoDrop Technologies）測(cè)定DNA濃度，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2. 2 水樣DNA提取 池塘水和水源水樣品經(jīng)0.2 μm濾膜（Millipore）過濾，取過濾膜參照E.Z.N.A. Water DNA Kit試劑盒說明提取水體DNA。采用NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA濃度， -80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 3 生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)量

隨機(jī)采集廣東汕尾和茂名工廠化池塘中出現(xiàn)生長(zhǎng)相關(guān)問題的凡納濱對(duì)蝦幼蝦樣品，用電子天平（精確到0.01 g）測(cè)量蝦體質(zhì)量，測(cè)量時(shí)吸干蝦體表面水分。每個(gè)池塘的凡納濱對(duì)蝦樣品依據(jù)體質(zhì)量大小選取最大的20尾和最小的20尾，分別組成大規(guī)格組和小規(guī)格組。每組個(gè)體的基因組DNA參照1.2.1的方法進(jìn)行提取。

1. 4 病原檢測(cè)

1. 4. 1 病原DNA片段擴(kuò)增引物 根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，分別設(shè)計(jì)病原EHP、VPAHPND和SHIV的DNA片段擴(kuò)增引物對(duì)EHP-F/EHP-R、VPAHPND-F/VPAHPND-R和SHIV-F/SHIV-R，引物序列詳見表1。

1. 4. 2 標(biāo)準(zhǔn)品DNA制備 利用pEASY?-T1 Clo-ning Kit（Transgen）將目的產(chǎn)物連接至大腸桿菌Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞（TransGen公司），利用藍(lán)白斑篩選并挑取陽(yáng)性克隆送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。驗(yàn)證后的陽(yáng)性菌落經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)，用質(zhì)粒提取試劑盒[生工生物工程（上海）股份有限公司]提取質(zhì)粒DNA，以NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA濃度，經(jīng)拷貝數(shù)換算后稀釋至1×106拷貝/μL作為標(biāo)準(zhǔn)品DNA，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 4. 3 PCR擴(kuò)增 分別以EHP、VPAHPND和SHIV 3種病原檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性的樣品DNA為模板，用上述設(shè)計(jì)的引物對(duì)進(jìn)行常規(guī)PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系15.0 μL：基因組DNA模板（100 ng/μL）1.0 μL，Premix TaqTM Mix（TaKaRa公司）7.5 μL，上、下游引物（10 μmol/L）各0.5 μL，ddH2O 5.5 μL。擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性3 min;95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 35 s，進(jìn)行32個(gè)循環(huán);72 ℃延伸6 min。4 ℃保存擴(kuò)增產(chǎn)物。分別以各病原的標(biāo)準(zhǔn)品DNA和無(wú)菌水作為陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，采用1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，并選取部分陽(yáng)性樣品擴(kuò)增產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。

2 結(jié)果與分析

2. 1 EHP、VPAHPND和SHIV的PCR檢測(cè)結(jié)果

EHP、VPAHPND和SHIV的PCR檢測(cè)結(jié)果如圖1所示。陽(yáng)性對(duì)照以制備的標(biāo)準(zhǔn)品DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3種病原分別擴(kuò)增得到185、700和457 bp的陽(yáng)性克隆片段，而以無(wú)菌水為模板的陰性對(duì)照未獲得對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增條帶。在部分檢測(cè)樣品中，出現(xiàn)與陽(yáng)性對(duì)照克隆片段大小一致的陽(yáng)性條帶，表明此樣品攜帶該特定病原。將陽(yáng)性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序，得到的產(chǎn)物序列和對(duì)應(yīng)的病原序列一致。

2. 2 不同地區(qū)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦的病原感染情況

2017—2018年，從茂名收集凡納濱對(duì)蝦幼蝦樣品共84份，從汕尾收集凡納濱對(duì)蝦幼蝦樣品63份，其病原檢測(cè)結(jié)果如表2所示。茂名地區(qū)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦幼蝦的EHP、VPAHPND和SHIV陽(yáng)性數(shù)分別為17、2和8份，對(duì)應(yīng)的攜帶率分別為20.24%、2.38%和9.52%;汕尾地區(qū)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦幼蝦的EHP、VPAHPND和SHIV陽(yáng)性數(shù)分別為17、3和27份，對(duì)應(yīng)的攜帶率分別為26.98%、4.76%和42.86%。

2. 3 不同養(yǎng)殖模式下凡納濱對(duì)蝦的病原感染情況

根據(jù)養(yǎng)殖模式劃分，共收集土塘養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦幼蝦樣品42份、高位池養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦幼蝦樣品41份和工廠化池塘養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦幼蝦樣品64份。由表3可知，土塘幼蝦樣品以攜帶EHP為主，攜帶率為40.48%，其次為SHIV（攜帶率為19.05%），幼蝦感染VPAHPND的比例較低，僅4.76%。相比之下，高位池養(yǎng)殖對(duì)蝦感染EHP的比例較低，為7.32%，且未發(fā)現(xiàn)VPAHPND陽(yáng)性幼蝦樣品。在工廠化池塘中，對(duì)蝦的EHP和SHIV攜帶率接近，分別為21.88%和23.44%，VPAHPND的攜帶率較低，為4.69%。

2. 4 各養(yǎng)殖要素的病原攜帶情況

由表4可看出，從池塘水、水源水、蝦苗及豐年蟲等養(yǎng)殖要素中均能檢出病原。蝦苗的病原檢出率最低，僅檢測(cè)到VPAHPND（攜帶率為2.83%）。池塘水和水源水中EHP和SHIV檢出率較高，EHP攜帶率分別為47.83%和36.00%，SHIV攜帶率分別為30.43%和44.00%，且水源水的SHIV陽(yáng)性樣品均來自汕尾地區(qū);但VPAHPND攜帶率較低，池塘水和水源水的對(duì)應(yīng)攜帶率分別為4.35%和4.00%。豐年蟲樣品僅收集2份進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，2份樣品均攜帶EHP和VPAHPND，但未檢出SHIV。

2. 5 出現(xiàn)生長(zhǎng)相關(guān)問題養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦的病原檢測(cè)結(jié)果

采自茂名工廠化車間的凡納濱對(duì)蝦幼蝦表現(xiàn)為個(gè)體規(guī)格差異明顯，大、小規(guī)格幼蝦樣品的平均體重分別為1.34±0.34和0.30±0.06 g/尾，其病原檢測(cè)結(jié)果（表5）顯示，大、小規(guī)格幼蝦樣品中EHP攜帶率分別為30.00%和80.00%，SHIV攜帶率均為5.00%，但不攜帶VPAHPND。采自汕尾地區(qū)工廠化車間的凡納濱對(duì)蝦幼蝦表現(xiàn)為生長(zhǎng)緩慢，大、小規(guī)格幼蝦樣品中EHP攜帶率分別為95.00%和100.00%，大規(guī)格幼蝦樣品中攜帶VPAHPND和SHIV的陽(yáng)性樣品分別有1和2份，而小規(guī)格幼蝦樣品均不攜帶VPAHPND和SHIV。

3 討論

3. 1 廣東沿海地區(qū)凡納濱對(duì)蝦EHP、VPAHPND和SHIV的流行特點(diǎn)

本研究對(duì)2017—2018年廣東沿海地區(qū)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦及部分養(yǎng)殖要素感染EHP、VPAHPND和SHIV的情況進(jìn)行調(diào)查分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以茂名和汕尾為代表的養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)均發(fā)現(xiàn)有EHP、VPAHPND和SHIV分布，但流行程度因地區(qū)及養(yǎng)殖模式差異而有所不同?？傮w而言，兩個(gè)地區(qū)及不同養(yǎng)殖模式下EHP和SHIV的攜帶率較高、流行趨勢(shì)明顯，而VPAHPND的檢出率較低、流行趨勢(shì)不明顯。汕尾地區(qū)3種病原的陽(yáng)性樣本檢出率高于茂名地區(qū)，尤其是養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦SHIV攜帶率表現(xiàn)為汕尾地區(qū)遠(yuǎn)高于茂名地區(qū);不同養(yǎng)殖模式下，高位池養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦SHIV攜帶率最高，但EHP和VPAHPND的攜帶率低于土塘和工廠化池塘養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦。本研究采集到的茂名地區(qū)凡納濱對(duì)蝦幼蝦樣本主要來源于土塘和工廠化池塘，而汕尾地區(qū)凡納濱對(duì)蝦幼蝦樣本主要來源于高位池和工廠化池塘，可能是影響兩地區(qū)養(yǎng)殖對(duì)蝦病原攜帶情況差異的主要因素。從養(yǎng)殖要素的病原檢測(cè)結(jié)果來看，水源水中的SHIV攜帶率達(dá)44.00%，且檢出的11份陽(yáng)性樣品均來自汕尾地區(qū)水源水，故推測(cè)汕尾地區(qū)及高位池模式下凡納濱對(duì)蝦幼蝦流行感染SHIV與養(yǎng)殖水源水的SHIV污染存在關(guān)聯(lián)。

3. 2 病原EHP、VPAHPND和SHIV的傳播因素分析

養(yǎng)殖水體是EHP、VPAHPND和SHIV的主要傳播媒介，養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦EHP和SHIV的高攜帶率與水樣中2種病原的高攜帶率可能存在關(guān)聯(lián)。在蝦苗樣品中，3種病原的檢測(cè)結(jié)果顯示僅有1份VPAHPND陽(yáng)性樣品，但并不能完全排除蝦苗不攜帶EHP和SHIV。由于單重PCR病原檢測(cè)的靈敏度介于組織鏡檢方法與巢式PCR、LAMP等檢測(cè)方法之間，當(dāng)樣品中病原核酸含量低于1000拷貝/mL時(shí)，病原不易被檢出（劉珍等，2016）。豐年蟲是水產(chǎn)養(yǎng)殖中常見的餌料生物，因其能攜帶病原，也是水產(chǎn)病害發(fā)生的重要傳播媒介（鄧燈等，2004）。本研究在豐年蟲中檢測(cè)到EHP和VPAHPND，表明生物餌料可能是養(yǎng)殖過程多種病原的傳播媒介。

3. 3 養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦出現(xiàn)生長(zhǎng)相關(guān)問題的致病因素分析

EHP感染易引起對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢，為探究養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)出現(xiàn)個(gè)體規(guī)格差異及生長(zhǎng)緩慢等問題的致病因素，本研究分別對(duì)茂名和汕尾地區(qū)患病凡納濱對(duì)蝦的EHP、VPAHPND和SHIV攜帶情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，在茂名地區(qū)個(gè)體規(guī)格差異明顯的養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦中，小規(guī)格對(duì)蝦的EHP攜帶率（80.00%）遠(yuǎn)高于大規(guī)格對(duì)蝦（30.00%）;在汕尾地區(qū)生長(zhǎng)緩慢的養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦中，大、小規(guī)格對(duì)蝦的EHP攜帶率接近100.00%。表明養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦感染EHP可能是導(dǎo)致對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢及個(gè)體規(guī)格差異的重要因素，與Biju等（2016）、施慧等（2017）的研究結(jié)果一致。在大、小規(guī)格凡納濱對(duì)蝦中，VPAHPND和SHIV攜帶率均較低或未檢出，且未發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦出現(xiàn)VPAHPND、SHIV感染與EHP感染的顯著相關(guān)性，但Aranguren等（2017）研究發(fā)現(xiàn)凡納濱對(duì)蝦感染EHP后易暴發(fā)AHPND，因此今后有必要針對(duì)不同病原的共感染情況進(jìn)行深入調(diào)查分析。

3. 4 廣東沿海地區(qū)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦病原感染的防控措施

本研究結(jié)果表明，EHP和SHIV在廣東沿海地區(qū)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦中流行趨勢(shì)明顯，或有暴發(fā)大規(guī)模疫病的可能。SHIV能引發(fā)患病對(duì)蝦的高死亡率（Xu et al.，2016），EHP雖不導(dǎo)致對(duì)蝦死亡，但能致使對(duì)蝦出現(xiàn)明顯的生長(zhǎng)變緩現(xiàn)象（Biju et al.，2016），二者暴發(fā)流行均會(huì)嚴(yán)重影響對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前引發(fā)EHP和SHIV感染的原因尚不明確，且應(yīng)對(duì)病害發(fā)生尚無(wú)有效的治療方法。因此，針對(duì)EHP和SHIV高攜帶率的現(xiàn)象，應(yīng)從病原、宿主和環(huán)境三方面同時(shí)著手進(jìn)行防控（耿小雪等，2016;王善龍等，2016）。此外，在養(yǎng)殖過程中應(yīng)積極開展病原監(jiān)測(cè)工作，掌握病原感染的分布特點(diǎn)及發(fā)生規(guī)律，采取綜合防控措施減少病害發(fā)生，確保凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

4 結(jié)論

廣東沿海地區(qū)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦EHP和SHIV攜帶率較高、流行趨勢(shì)明顯，而VPAHPND檢出率較低、流行趨勢(shì)不明顯。養(yǎng)殖水體是EHP、VPAHPND和SHIV的重要傳播媒介，生物餌料也是養(yǎng)殖過程中病原傳播的源頭。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦的病原流行特點(diǎn)，尤其針對(duì)EHP和SHIV高攜帶率的現(xiàn)象，從病原、宿主和環(huán)境三方面同時(shí)著手進(jìn)行防控，采取綜合防控措施減少病害發(fā)生。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）