HPLC法測定注射用泮托拉唑鈉有關物質方法探討

武衡 王娜 董景麗 鄭丹

摘要：目的：對中國藥典2015版收錄的HPLC法測定注射用泮托拉唑鈉有關物質的分析方法深入探討。方法：采用賽分等液相色譜柱，戴安Ultimate3000高效液相色譜儀，VWD-3100紫外檢測器，以磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L磷酸氫二鉀溶液用磷酸調節pH值至7.0）為流動相A；色譜乙腈為流動相B，梯度洗脫，流速為1.0Ml/min，柱溫40℃；檢測波長為289nm。結果：本方法為藥典收錄方法，但實際應用中容易產生異常峰，干擾檢測結果。結論：本檢測方法專屬性強，樣品穩定，在用于注射用泮托拉唑鈉有關物質的質量控制時需要注意的問題。

關鍵詞：注射用泮托拉唑鈉；高效液相色譜法；有關物質，異常峰

前言：

注射用泮托拉唑鈉在臨床上主要用于十二指腸潰瘍、胃潰瘍、急性胃粘膜病變等急性上消化道出血，是繼奧美拉唑、蘭索拉唑之后上市的第3個質子泵抑制劑[1]。注射用泮托拉唑鈉（Pantoprazole Sodium）收載于《中國藥典》2015版（二部）[2]，采用HPLC法測定有關物質。經多次實驗該方法在適用性方面存在不足，梯度基線在主峰位置存在異常峰。但該異常峰的存在具有不確定性，且無重現性。本文旨在通過出現問題，分析問題過程的探討，給讀者提供幫助，最大限度的降低異常峰及異常峰對結果判定的影響。

1、儀器與試藥

1.1實驗儀器

戴安Ultimate3000高效液相色譜儀，包括VWD-3100紫外檢測器（賽默飛世爾科技有限公司），變色龍chromeleon色譜工作站（美國戴安公司），XS105-DU電子分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司），FE30數顯式PH計（上海梅特勒-托利多儀器有限公司），月旭和賽分Amethyst，菲羅門等液相色譜柱。

1.2藥品與試劑

藥品：注射用泮托拉唑鈉（生產單位 ： 河北愛爾海泰制藥有限公司，產品規格為每支80mg，產品批號：31170201，31170202，31170203）。

對照品及試劑：乙腈（fisher，HPLC級）。磷酸氫二鉀（GR），磷酸（AR）均由天津科密歐化學試劑有限公司提供，水為重蒸餾去離子水。

2、方法與結果

2.1 溶液的制備

有關物質 臨用新制。取本品，加溶劑 [0.01mol/L氫化鈉溶液 - 乙腈 （1 ： 1 ） ]溶解并稀釋制成每 lm l中約含0.4m g的溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置200ml量瓶中，用上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。另取泮托拉唑對照品約 8 m g ，置10ml量瓶中加0.3%過氧化氫溶液1ml使溶解，用上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為系統適用性溶液。

2.2色譜條件

2.3現象及分析

在實際檢測過程中按照藥典標準規定臨用新制，供試品及自身對照未發生異常。進溶劑后發現在主峰相對保留時間處有一個異常峰，峰面積約 100（見下圖1）。有關物質的來源有：降解物、相容性產物[3]。

2.3.1首先考慮是否為進樣針殘留，充分清洗進樣針，重新將溶劑倒入液相小瓶進樣，發現異常峰仍然存在，且大小未發生明顯變化。

2.3.2接下來認為可能是溶劑污染導致。用與之前所配制的溶劑相同的試劑重新配制溶劑，進樣發現仍然存在異常峰且大小未發生明顯變化。

2.3.3由以上兩次實驗可以得出異常峰的出現并非是進樣針殘留和溶劑所引入。因為該方法為緩沖鹽和乙腈梯度洗脫，所以考慮有可能為流動相梯度造成的異常，所以接下來，不進樣品，單單采集梯度的基線，發現在主峰位置仍然存在異常峰且大小未發生明顯變化（見下圖2），故考慮為系統本身或流動相A、B的問題。流動相B相為乙腈，更換新開瓶乙腈后，發現異常峰仍然存在，且大小未發生明顯變化，故排除流動相B的問題；更換流動相A配制所需的試劑重新配制A相，重新進樣空白，主峰位置仍有異常峰，峰面積減小，進樣溶劑峰面積減小，約為（見下圖3）。計算結果時將溶劑峰扣除以計算結果。

2.3.4按照之前的試驗表明該異常峰的引入為梯度洗脫造成的影響。由于流動相B相為乙腈，故而考慮將流動相A配置為含乙腈%1，%3，%5的溶液，破壞梯度洗脫的比例。但結果表明主峰保留時間隨乙腈加入量增加而提前，而該異常峰的保留時間也隨主峰的提前而提前，且仍出峰在相同的位置（見下圖4、圖5、圖6），對檢驗結果的判定造成影響。

由于破壞梯度程序并未解決異常峰引入的問題，所以嘗試更換色譜柱子品牌，及規格，以改變主峰及異常峰的保留時間，以避免異常峰的干擾，而試驗結果表明，無論是更換色譜柱品牌還是改變色譜柱規格，該異常峰仍然存在，且對主峰仍存在干擾。

截至目前尚不明確該異常峰是否為泮托拉唑主成分，考慮中國藥典對泮托拉唑有含量測定的方法為：，照含量測定方法直接進樣發生問題的溶劑，并進樣定位的對照品，發現溶劑樣品主峰位置并無明顯殘留。

后續檢測注射用泮托拉唑鈉31170201，31170202，31170203成品存放10天有關物質實驗時，徹底清洗管路及系統，進樣溶劑及有關對照時，主峰位置無異常峰。之后又做存放15天有關物質實驗時，進樣前徹底清洗管路及系統，進樣溶劑及有關對照時，與主峰保留時間相同處，有一峰面積約100的異常峰，計算結果時將溶劑峰扣除以計算結果。接著考察三批加速1月有關物質時，進樣前徹底清洗管路及系統，進樣溶劑及有關對照時，主峰保留時間處無異常峰。經過多次實驗考察，通過更換不同的液相色譜儀、配制不同的流動相，主峰位置異常峰的出現存在不確定性，且峰面積無重現性。

3、討論

經過多次實驗分析，所用的溶劑、流動相配制所用的試劑經過不同批號的改變之后，在主峰保留時間處，進樣空白、溶劑及有關對照不定期的出現異常峰，且峰面積大小無重復性。通過以上實驗得出結論：此異常峰歸結為檢驗方法的問題，以后再做泮托拉唑鈉有關物質時，要清洗液相儀器的流路及色譜柱，如果溶劑還是出現與主峰保留時間相同的異常峰，以扣除溶劑峰計算最終結果。此檢驗方法中存在的異常峰的出現，目前未找到真正原因，在后續檢驗工作中仍繼續調查。

參考文獻：

[1]傅宏義（Fu HY）.新型質子泵抑制劑-泮托拉唑[J]. 藥物不良反應雜質（Adeverse Drug React J），1999，1（3）：173.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[M].北京：化學工業出版社，2015：706.

[3]論壇ID：hongwei2000 DEC，2014.

作者簡介：武衡，男，河北省石家莊人，助理工程師，多年從事藥物分析工作。