鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的中試放大試驗與體外釋放特性研究

趙榮軍，蘇詩娜，陳祝霞，蘇朝芬，劉英，梁超峰

(1.江蘇省泰興市人民醫院藥學科，江蘇泰興 225400； 2.廣州市藥物一致性評價技術聯盟，廣東 廣州 510663； 3.廣州科瑯醫療科技有限公司，廣東 廣州510530； 4.廣州市番禺區中心醫院，廣東 廣州511400； 5.廣州醫藥工業研究院廣州市藥物制劑新型釋藥技術重點實驗室，廣東 廣州510240； 6.中山大學新華學院，廣東 廣州510520； 7.廣東嶺南職業技術學院，廣東 廣州510663； 8.廣東藥科大學附屬第一醫院，廣東 廣州510080)

鹽酸文拉法辛(venlafaxine hydrochloride)作為第三代抗抑郁藥，在臨床上被廣泛應用于治療各種類型抑郁癥、強迫癥、精神分裂癥、社交恐懼癥、創后應激障礙等疾病，具有起效快、不良反應少、耐受劑量范圍更大，對重性抑郁癥患者有更高的臨床治愈率的優點[1]。鹽酸文拉法辛緩釋膠囊由惠氏公司首先研發并于1997年10月首獲美國FDA批準上市，商品名為“怡諾思”(EFFEXOR XR)，是全球第一個上市的5-羥色胺-去甲腎上腺素再攝取抑制劑，實現了一天一次給藥且能更快地改善癥狀，得到臨床廣泛認可[2]。

本研究在前期研究[3]和其他文獻[4]的基礎上，對鹽酸文拉法辛緩釋膠囊產業化的關鍵，即中試放大環節(特別是對關鍵工藝—緩釋層流化床包衣的關鍵參數的控制)和產品在不同釋放條件(介質、方法、轉速)的釋藥特性進行研究，為建立緩釋制劑的產業化過程質量評價與控制、研發及中試平臺打下基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

流化床[可行性試驗型：Midi-Glatt；小試型：GPCG-1；預中試型：GPCG-5，德國Glatt GmbH；中試型：FLZB-30，創志(上海)有限公司]；Agilent HPLC 1100高效液相色譜儀(安捷倫科技公司)；UV-2450型紫外可見分光光度計(日本島津公司)；ADFC8E自動溶出取樣系統(天津市天大天發科技有限公司)。

1.2 藥品與試劑

鹽酸文拉法辛緩釋膠囊(批號：1112014，規格：75 mg/粒，愛爾蘭惠氏藥廠)；鹽酸文拉法辛對照品(批號：20111114，質量分數：99.74%，湖北巨順宏生物化工有限公司)；MCC PH101(批號：C1206065，湖州展望藥業有限公司)；HPMC E5(批號：PD371004)、HPMC E6(批號：PD340380A)、乙基纖維素 EC 10CP(批號：PD303969)均由上?？房蛋录夹g有限公司提供；滑石粉(批號：0904011A，桂林桂廣滑石開發有限公司)。

2 方法與結果

2.1 鹽酸文拉法辛的測定方法

見本課題組的前期研究[3]。

2.2 釋放度測定方法

2.2.1 色譜條件[5]色譜柱：Agilent C8(150 mm × 4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-緩沖液(體積比3∶7)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：274 nm；柱溫：30 ℃。

2.2.2 方法學考察 按2015年版《中國藥典》(四部)通則9101相關要求進行方法學考察。結果顯示：鹽酸文拉法辛質量濃度(ρ)對峰面積(A)的回歸方程為A= 2.513 5ρ+1.700 5(r2=1.000 0，n=6)，線性范圍為2～120 μg/mL；平均回收率為99.9%(RSD=1.42%，n=15)；取鹽酸文拉法辛緩釋膠囊6粒，置37 ℃、900 mL脫氣純化水的溶出杯中，采用《中國藥典》2015年版四部0931第二法[6]，以脫氣純化水作為釋放介質，轉速為100 r/min，在釋放24 h時抽取5 mL，濾過，在室溫放置不同的時間(0、2、4、6、8、12、24 h)分別測定吸收度，結果顯示過濾后樣品的文拉法辛質量分數在24 h內基本保持不變。

2.2.3 釋放度測定方法 采用《中國藥典》2015年版四部0931第二法[6]，采用ADFC8E自動溶出取樣系統，取鹽酸文拉法辛緩釋膠囊12粒，置37 ℃、900 mL的脫氣純化水中，分別于1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、20、24 h定時取濾液5 mL，濾過，HPLC法測定釋放度；另精密稱取鹽酸文拉法辛對照品適量，加介質(取相同規格的空膠囊殼，加脫氣純化水900 mL，置37 ℃水浴使溶解，濾過)適量使溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含文拉法辛70 μg的溶液，計算釋放度。

2.3 緩釋(小丸)膠囊的制備

2.3.1 制備工藝[3]稱取鹽酸文拉法辛75 g，MCC 111 g，HPMC 1.88 g，過80目篩，混合均勻，加入純水，采用快速攪拌制粒機制成濕度適宜的軟材。將軟材加入擠壓機中，經0.8 mm篩孔篩板，以35 r/min的螺桿轉速擠出成條狀；再將其置于圓化機內，以滾圓速度1 000 r/min滾化9 min，制得含藥濕丸；置于60 ℃鼓風干燥箱內4.5 h，取出，篩分得含藥丸芯。稱取1.88 g HPMC和281 g體積分數75%乙醇配制的溶液作為隔離衣層；37.1 g乙基纖維素、0.375 g滑石粉和493 g體積分數75%乙醇配制的溶液作為緩釋衣層；含藥丸芯投入流化床包衣機(Wurster裝置)，調節包衣參數包隔離衣、緩釋衣，制成緩釋小丸，檢驗、裝膠囊。

2.3.2 緩釋衣層小試、中試放大研究 根據在可行性試驗型流化床Midi-Glatt上的實驗結果，采用流化床批量遞增(可行性試驗型Midi-Glatt→小試型GPCG-1→預中試型GPCG-5→中試型FLZB-30)設計，檢測產品質量分數、收率、效率、釋放度和釋放曲線，考察、優化中試放大工藝，結果見表1、表2?？梢?，調整好各參數，特別是控制包衣區溫度、隔圈內風速、霧化液滴大小，在小試、中試放大過程中盡量相近后，可以將小試工藝順利放大到中試，所得產品均符合質量標準，且中試產品的釋放度與較小制備規模樣品的相似(相似因子f2>50)。

表1 各型流化床參數及實驗結果Table 1 Various fluidized bed parameters and experimental results

表2 鹽酸文拉法辛緩釋膠囊各型流化床制品的釋放度Table 2 Release of various fluidized bed products of venlafaxine hydrochloride sustained-release capsules

2.4 影響釋放度的因素考察

2.4.1 不同釋放方法對藥物釋放的影響[7]采用《中國藥典》2015年版四部0931第一法、第二法進行釋放度試驗[6]，轉速為100 r/min，分別于1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、20、24 h定時取濾液5 mL，HPLC法測定釋放度，考察不同方法對釋放度的影響，結果見圖1。可見，2種方法均對鹽酸文拉法辛膠囊釋放度幾乎沒有影響。

籃法漿法051015202530100806040200t/h釋放度/%

圖1不同釋放方法對藥物釋放的影響

Figure1The effect of different dissolution methods on drug release

2.4.2 不同轉速對藥物釋放的影響 采用《中國藥典》2015年版四部0931第二法[6]進行釋放度試驗，轉速分別為100、75、50 r/min，考察不同轉速對釋放度的影響，結果見圖2?？梢?，3種轉速下鹽酸文拉法辛膠囊的釋放曲線接近相同。

50r/min75r/min100r/min051015202530t/h100806040200釋放度/%

圖2不同轉速對藥物釋放的影響

Figure2The effect of different rotational speeds on drug release

2.4.3 不同介質對藥物釋放的影響 采用《中國藥典》2015年版四部0931第二法[6]進行釋放度試驗。配制人工胃液(pH1.2)、人工腸液(pH6.8)、pH4.5緩沖溶液和脫氣純化水分別作為藥物釋放介質，考察鹽酸文拉法辛膠囊在上述4種介質下的釋放度情況[8-9]，結果見圖3?？梢姡}酸文拉法辛膠囊在4種pH釋放介質下的釋放度曲線相似度高，4種pH釋放介質對鹽酸文拉法辛膠囊釋放度均基本沒有影響。

pH4.5pH1.2pH6.8水051015202530t/h100806040200釋放度/%

圖3不同遞質對藥物釋放的影響

Figure3The effect of different release medium on drug release

2.4.4 體外釋藥機理的研究 取本品，按照《中國藥典》2015年版四部0931第二法[6]，以水為釋放介質，體積為900 mL，轉速為100 r/min，依法操作，經1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、20、24 h，各取溶液5 mL，濾過，取續濾液作為供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣檢測，計算不同時間的釋放度，結果見圖4。

051015202530t/h100806040200釋放度/%

圖4鹽酸文拉法辛緩釋膠囊釋放曲線

Figure4Release curve of Venlafaxine Hydrochloride Sustained-Release Capsules

為了更直觀描述鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的體外釋藥機理，根據上述釋放度測定的結果，分別用不同的釋放模型(零級方程、一級方程、Higuchi方程、Ritger-Peppas方程、Weibull方程)進行線性擬合，結果見表3。可見，鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的體外釋藥符合一級釋放模型，前期快速釋藥，后期緩慢釋藥。

表3 不同釋藥模型的擬合方程和相關度

Table3The fitting equation and correlation degree of different drug release models

擬合模型擬合方程r零級釋放Q=0.035 7t+0.249 10.890 3一級釋放ln(1-Q)=-0.051 9t - 0.026 10.995 0HiguchiQ = 0.232t1/2+0.071 40.958 8Ritger-PeppaslnQ=1.699 4lnt - 3.603 50.906 1Weibullln ln11-Q=1.960 6lnt - 3.660.935 2

3 討論

中試是實驗室小試與大生產的橋梁，是在模擬工業化生產的條件下驗證實驗室工藝可行性所進行的工藝研究，流化床包衣的中試是緩釋丸劑研發鏈條中最關鍵一環，原因是中試的流化床在噴槍結構原理等方面與小試的不同，但與工業化生產的一致。無論是何種流化床，進口的或是國產的，關鍵是控制包衣區溫度、隔圈內風速、霧化液滴大小在小試、中試、生產放大過程中一致或盡量接近，再調整好其他參數，就可以將小試工藝順利放大到中試，并使產品質量在生產規模放大過程中保持一致，為進一步大生產奠定基礎。

本研究分別考察人工胃液(pH1.2)、人工腸液(pH 6.8)、pH 4.5緩沖溶液和脫氣純化水4種釋放介質，結果顯示鹽酸文拉法辛緩釋膠囊在4種釋放介質中的釋放度曲線相似度高，4種釋放介質對鹽酸文拉法辛膠囊釋放度基本沒有影響。相比之下，純化水簡單易得，可以考慮用純化水代替人工胃液和人工腸液進行釋放度測試。

鹽酸文拉法辛膠囊在3種轉速(100、75、50 r/min)下的釋放曲線接近相同，說明藥物在身體機能強壯或虛弱者體內均能按要求釋放和被吸收，而較低轉速(如50 r/min)使藥物釋放較緩慢且更有區分力，因此，用50 r/min轉速來測試釋放度，更能準確地反映鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的釋藥性能和差異。

鹽酸文拉法辛膠囊與釋放介質接觸后，膠囊殼逐漸溶解破裂，其內部含藥小丸暴露于釋放介質中，釋放過程中含藥小丸自始至終維持球形且體積和外表沒有變化，由此估計含藥小丸釋放的主要過程為介質從藥劑表面的浸入、藥物溶解、經孔道擴散及釋出。Higuchi方程及一級動力學方程均能較好地描述緩釋膠囊的體外釋放曲線，藥物釋放量也與時間的平方根成直線關系，符合水不溶性骨架藥物的釋藥特征，提示本制劑處方工藝制備的丸芯和控釋膜控制藥物釋放是通過孔徑很細且錯綜復雜的孔道進行。