黑龍江省部分稻田螢藺種群對吡嘧磺隆的抗藥性分析

劉亞光 魏超月 張正南 朱金文 吳繪鵬

摘要：【目的】明確黑龍江省部分稻田螢藺（Scirpus juncoides Roxb.）對吡嘧磺隆的抗藥性水平及抗性機制，為水稻田螢藺的綜合治理提供理論依據。【方法】以采自黑龍江省的23個螢藺種群為試驗材料，利用整株盆栽法測定其對吡嘧磺隆的抗藥性水平。選取代表性抗性種群（SC-1和SC-8）和敏感種群（SC-23），于螢藺抽莖期剪取花莖后，以不同濃度（0.1、10.0、100.0、1000.0和10000.0 nmol/L）的吡嘧磺隆溶液對其進行離體乙酰乳酸合成酶（ALS）檢測;抽莖期噴施250 g/ha吡嘧磺隆對螢藺進行莖葉處理，施藥后第0、1、3、5、7和9 d剪取花莖，分別用于活體ALS活性和谷胱甘肽—硫—轉移酶（GSTs）活性測定。【結果】整株盆栽法測定結果表明，供試22個種群中有7個種群對吡嘧磺隆產生了抗性，占供試種群的31.8%。離體條件下，抗性種群SC-1和SC-8體內ALS對吡嘧磺隆的敏感性明顯降低，抗性指數分別為69.81和23.83;活體條件下，抗性種群SC-1和SC-8的ALS相對活性受到抑制后均能恢復至正常水平，敏感種群SC-23則不能恢復，3個種群試驗結束時（第9 d）的相對活性別為0.92、0.72和0.45;抗性種群SC-1和SC-8的GSTs相對活性自施用吡嘧磺隆后第1 d起均顯著高于敏感種群SC-23（P<0.05），且二者分別于施藥后第3和第1 d升至最高值，分別為2.36和1.94，敏感種群SC-23的GSTs相對活性于施藥后第1 d升至最高值，為1.49。【結論】黑龍江省部分地區(qū)稻田螢藺已對吡嘧磺隆產生了低到中等水平抗性?？剐晕炋A種群的ALS對吡嘧磺隆敏感性下降和GSTs代謝作用增強可能與其抗性有關。

關鍵詞： 螢藺;吡嘧磺隆;抗藥性;乙酰乳酸合成酶（ALS）;谷胱甘肽—硫—轉移酶（GSTs）;黑龍江省

中圖分類號： S451? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）03-0570-08

0 引言

【研究意義】螢藺（Scirpus juncoides Roxb.）隸屬于莎草科（Cyperaceae）多年生草本雜草，是我國北方稻田主要惡性雜草之一（羅寶君，2016）。近年來，螢藺在黑龍江省水稻田內的發(fā)生和危害日趨嚴重，部分稻田螢藺密度高達300株/m2，該雜草可在短時間內對水稻造成郁蔽而導致嚴重減產。磺酰脲類除草劑主要通過抑制支鏈氨基酸（纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸）的生物合成而起除草作用，乙酰乳酸合成酶（Acetolactate synthase，ALS）是其唯一作用靶標（張朝賢等，2009）。吡嘧磺隆屬磺酰脲類除草劑，在黑龍江省水稻田應用已有20余年的歷史，但近年來黑龍江省部分水稻產區(qū)吡嘧磺隆對螢藺的防效出現嚴重下降趨勢（張玉池等，2018）。因此，對黑龍江省水稻產區(qū)螢藺進行抗性測定，探討其產生抗性的機理機制，對當地稻田螢藺的綜合防治具有重要意義。【前人研究進展】由于磺酰脲類除草劑具有生物活性高、選擇性強、殺草譜廣、對哺乳動物安全等優(yōu)點，在全球范圍內已得到廣泛使用，但因其作用位點單一且長期使用，雜草對其抗性發(fā)展迅速。陳麗麗等（2013）采用盆栽法莖葉處理方式測定了黑龍江省5個地區(qū)水稻田野慈姑對吡嘧磺隆的敏感性，結果表明，常規(guī)施藥量30 g/ha對各種群已無效，各種群對吡嘧磺隆的半數有效劑量（ED50）是20世紀90年代初期黑龍江省水稻田吡嘧磺隆常規(guī)田間施藥量10～15 g/ha的10.7～48.4倍。劉亞光等（2015）采用盆栽法土壤處理方式測定了黑龍江省不同地區(qū)稻田螢藺對吡嘧磺隆的抗藥性，結果表明，五常市和哈爾濱市種群對吡嘧磺隆已產生低水平抗性，牡丹江市螢藺種群對吡嘧磺隆產生了中等水平抗性，其他地區(qū)螢藺對吡嘧磺隆仍處于敏感階段，但未闡述抗性產生原因。李丹等（2017）采用盆栽法莖葉處理方式檢測了從山東、湖北和江蘇省稻田采集的28個鱧腸（Eclipta prostrata）種群對吡嘧磺隆的敏感性，發(fā)現除江蘇省種群具有較高水平抗性外，其他地區(qū)鱧腸種群對吡嘧磺隆均為敏感種群。Fu等（2017）報道我國東北地區(qū)稻田三葉鬼針草（Bidens pilosa L.）對芐嘧磺隆產生了中到高等水平抗性。吳翠霞等（2018）采用盆栽法莖葉處理方式測定了山東省小麥田薺菜（Capsella bursa-pastoris）對苯磺隆的抗性水平，結果表明，山東省小麥田薺菜已普遍對苯磺隆產生抗性，其中濱州市薺菜抗性倍數最高可達6863.80。國內外研究表明，雜草對除草劑的抗性機理主要包括靶標抗性和非靶標抗性（張朝賢等，2009;張云月等，2013）。靶標抗性涉及兩個方面，一是雜草ALS基因突變引起的除草劑敏感性下降。Uchino等（2010）、Sada等（2012，2013）采用PCR擴增了抗、感螢藺生物型的ALS基因，發(fā)現抗性螢藺生物型ALS基因第197位脯氨酸分別突變?yōu)榻z氨酸、組氨酸和亮氨酸，第574位色氨酸突變?yōu)榱涟彼幔?76位天冬氨酸突變?yōu)楣劝彼?，同時證實靶標酶位點突變與抗性螢藺生物型ALS敏感性降低有關;郎紅等（2015）認為抗性慈姑（Sagittaria trifolia L.）ALS第324位錯義突變可能破壞了蛋白質的二級結構或增加了二級結構的螺旋、折疊及卷曲的形成概率，從而降低了ALS對吡嘧磺隆的親和力;李平生等（2015）分別測定了芐嘧磺隆對遼寧省4個水稻產區(qū)野慈姑種群離體葉片ALS活性的影響，發(fā)現抗、感野慈姑種群對芐嘧磺隆ALS活性的抑制中濃度（IC50）差異較明顯，認為抗藥性野慈姑種群的ALS對芐嘧磺隆敏感性下降可能是其產生抗性的原因之一。二是靶標酶的過量表達。彭學崗等（2009）發(fā)現經苯磺隆處理后2 d，抗性生物型豬殃殃（Galium aparine）活體條件下的ALS活性為對照的4.1倍，認為ALS過量表達可能是其產生抗藥性的原因之一。雜草對除草劑的非靶標抗性主要是由雜草對除草劑解毒代謝能力的增強而引起。谷胱甘肽—硫—轉移酶（GSTs）是催化谷胱甘肽與多種親電疏水底物結合的多功能酶家族，也是植物對除草劑進行代謝解毒的關鍵酶系，其可催化還原型谷胱甘肽（GSH）與除草劑發(fā)生軛合作用而起到解毒作用（Powles and Yu，2015）。畢亞玲等（2013）通過測定山東省抗、感薺菜生物型GSTs活性發(fā)現，經苯磺隆處理后對照組抗、感薺菜生物型10 d內GSTs活力積累和分別為19.53和20.91 U;藥劑處理組抗、感薺菜生物型GSTs活力均在第4 d達最高值，分別為同期對照的1.72和1.37倍，認為GSTs對苯磺隆代謝能力的差異可能與薺菜對苯磺隆的抗性有關。Bai等（2018）研究發(fā)現，施用苯磺隆后抗、感牛繁縷（Myosoton aquaticum L.）的GSTs活性均在48 h達最高值，抗性牛繁縷的GSTs活性整體明顯高于敏感牛繁縷，認為GSTs對苯磺隆代謝作用的增強可能是牛繁縷對苯磺隆產生抗性的原因之一?！颈狙芯壳腥朦c】目前，雖已有黑龍江省部分地區(qū)螢藺對吡嘧磺隆產生抗藥性的研究報道，但黑龍江省其他地區(qū)螢藺對吡嘧磺隆是否也產生了抗藥性、抗性水平及抗性機制等尚未見詳細報道?！緮M解決的關鍵問題】通過測定黑龍江省不同地區(qū)螢藺種群對吡嘧磺隆的抗性水平和離體條件下螢藺的ALS活性抑制率及施藥后ALS和GSTs的相對酶活性變化，旨在明確黑龍江省螢藺對吡嘧磺隆的抗性水平和抗性機制，為指導農民科學用藥、延長吡嘧磺隆的使用壽命及抗藥性螢藺的綜合治理提供理論依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試植物：2016年9—10月在黑龍江省采集螢藺種子，根據采集地點將其命名為23個種群（表1），其中SC-23采自從未用過除草劑的非耕地。供試除草劑：10%吡嘧磺?。≒yrazosulfuron-ethyl）可濕性粉劑（日本化學工業(yè)株式會社）。主要試劑：NaOH和K2HPO4（均為分析純，500 g，天津市恒興化學試劑制造有限公司）;KNO3（分析純，500 g，天津市四通化工廠）;KH2PO4（分析純，500 g，天津市東麗區(qū)天大化學試劑廠）;肌酸（生物試劑，25 g，上海晶純試劑有限公司）;甲萘酚（分析純，25 g，中國五聯化工廠）;95%乙醇（分析純，500 mL，天津市富宇精細化工有限公司）;（NH4）2SO4（分析純，500 g，萊陽化工實驗廠）;考馬斯亮藍G250（高級純，5 g）、丙酮酸鈉（99.00%～100.02%，25 g）、TPP（BR≥98%，10 g）、FAD（BR≥94%，20 mg）和牛血清蛋白（第5組分，BR≥98%，10 g）均為Summus生物科技有限公司產品;MgCl2（分析純，500 g，天津市耀華化學試劑有限責公司）。主要儀器：人工氣候箱RXZ（寧波江南儀器廠）;3WPSH-500D型生測噴霧塔（農業(yè)農村部南京農業(yè)機械化研究所）;微量移液器（Gilson公司）;臺式高速冷凍離心機（5430R，Eppendorf公司）;電熱恒溫水浴鍋HWS-28（上海一恒科學儀器有限公司）;雙光束紫外可見分光光度計TU-1901（北京普析通用儀器有限責任公司）。

1. 2 供試植物培養(yǎng)

將不同種群螢藺種子放入5 ℃儲藏柜中層積處理28 d后，用2000 mg/L乙烯利浸種2 d，25 ℃光照培養(yǎng)箱內催芽1 d。采用整株盆栽法，將未施用過除草劑的土壤風干過篩后裝入塑料盆直徑18 cm，高38 cm），每盆播種10粒催眠萌發(fā)后剛露白的螢藺種子，種植深度2 cm，覆蓋1 cm過篩風干土，播種后1 d用噴壺澆水并保持3 cm左右水層。試驗在室外進行，正常水分管理。

1. 3 測定項目及方法

1. 3. 1 不同螢藺種群對吡嘧磺隆的抗性水平測定 根據預試驗確定的吡嘧磺隆劑量（6.5、12.5、25.0、100.0和400.0 g.a.i/ha），于播種后1 d，分別用注射器定量抽取5 mL藥液均勻分散滴入盆中（盆中水層呈渾濁狀態(tài)），以滴清水為對照（CK），3次重復。藥后21 d剪取螢藺地上部分，稱量鮮重。

雜草鮮重抑制率（%）=（空白對照雜草鮮重-處理雜草鮮重）/空白對照雜草鮮重×100。以雜草鮮重抑制率機率值（y）和劑量對數值（x）求得毒力回歸方程（y=bx+a）及ED50，進而計算供試雜草種群的抗性指數（Resistance index，IR），IR=[抗藥性種群的ED50（IC50）]/[敏感種群的ED50（IC50）]?？剐运脚卸藴剩好舾蟹N群（1≤IR<5），低抗種群（5≤IR<10），中抗種群（10≤IR<50），高抗種群（IR≥50）（高興祥等，2014）。選取中抗種群中抗性水平差異最明顯的2個種群及敏感種群作為1.3.2～1.3.4的供試材料。

1. 3. 2 離體條件下螢藺ALS活性測定 待螢藺長至抽莖期（花莖達15～20 cm），剪取1 g花莖，以不同濃度（0.1、10.0、100.0、1000.0和10000.0 nmol/L）吡嘧磺隆溶液處理花莖，清水為對照（CK），3次重復。參照范志金等（2003）的方法測定螢藺離體ALS活性，考馬斯亮藍G-250法測定可溶性蛋白含量。以酶活性抑制率機率值（y）和除草劑濃度對數值（x）建立毒力回歸方程（y=bx+a），求得IC50，抗性指數計算及標準參照1.3.1。酶活抑制率（%）=（A525CK-A525）/A525CK×100，其中，A525和A525CK分別表示藥劑處理及清水處理下螢藺種群的酶活性，1.3.3～1.3.4同。

1. 3. 3 活體條件下螢藺ALS活性測定 待螢藺長至抽莖期，用10%吡嘧磺隆可濕性粉劑250 g/ha莖葉噴霧，清水為對照（CK），3次重復，分別于施藥后第1、3、5、7和9 d剪取適量花莖，參照隋標峰等（2007）的方法測定螢藺活體ALS活性。ALS相對活性=A525/A525CK。

1. 3. 4 螢藺體內GSTs活性測定 施藥時期和施藥方式同1.3.3。分別于施藥后第0、1、3、5、7和9 d剪取適量花莖，參照Pamela和David（1996）方法測定螢藺的GSTs活性。GSTs相對活性=A340/A340CK。

1. 4 統(tǒng)計分析

利用DPS v7.05進行數據處理，Duncan’s新復極差法進行差異顯著性檢驗，Excel 2007進行統(tǒng)計和制圖。

2 結果與分析

2. 1 不同螢藺種群對吡嘧磺隆抗性水平測定結果

23個螢藺種群對吡嘧磺隆的整株抗藥性水平見表2，其中SC-23采自從未使用過吡嘧磺隆的非耕地，ED50為15.22 g.a.i/ha，對吡嘧磺隆最敏感，因此確定該螢藺種群為敏感種群。由表2可知，22個種群中有7個種群（SC-1、SC-3、SC-5、SC-6、SC-4、SC-8和SC-11）對吡嘧磺隆產生了抗性，占31.8%，其中SC-1和SC-3對吡嘧磺隆的抗藥性水平最高，抗性指數分別為23.71和16.49，ED50分別為360.97和251.00 g.a.i/ha，SC-11對吡嘧磺隆處于低水平抗性，抗性指數為6.35;有15個種群為敏感種群，占68.2%，抗性指數為2.02～3.69。

根據表2結果，從中選取中抗種群中抗性水平差異最明顯的2個種群（SC-1和SC-8）和敏感種群（SC-23）進行后續(xù)試驗。

2. 2 離體條件下螢藺ALS活性測定結果

隨著吡嘧磺隆濃度的提高，抗性和敏感螢藺種群ALS活性抑制率均呈持續(xù)上升趨勢。當吡嘧磺隆濃度為0.1 nmol/L時，抗性種群SC-1和SC-8的ALS活性抑制率最低，分別為9.81%和12.75%，二者均于10000.0 nmol/L時升至最高值，分別為56.15%和63.80%;除0.1 nmol/L處理外，其余濃度處理下SC-1的ALS活性抑制率顯著低于SC-8（P<0.05，下同），且兩個抗性種群的ALS活性抑制率均顯著低于敏感種群SC-23;敏感種群SC-23的ALS活性抑制率表現與兩個抗性種群相似，在0.1 nmol/L處理下ALS活性抑制率最低（10.46%），于10000.0 nmol/L升至最高值（80.00%）?？梢姡S著吡嘧磺隆濃度的提高，抗、感螢藺種群的ALS活性受抑制程度均呈不斷加強趨勢，以SC-23受抑制程度最高，SC-8次之，SC-1最低。吡嘧磺隆濃度與ALS活性抑制效果的關系見表3。由表3可知，SC-1的IC50最高，為10131.67 nmol/L，顯著高于SC-8（3458.35 nmol/L），二者均顯著高于SC-23（145.14 nmol/L）;離體法測得的螢藺ALS抗性指數以SC-1最高（69.81），且顯著高于SC-8（23.83），與整株盆栽法測得的抗性趨勢一致?？梢?，螢藺體內ALS對吡嘧磺隆敏感性下降是其產生抗性的主要原因之一。

2. 3 活體條件下螢藺ALS相對活性測定結果

施用吡嘧磺隆后，抗性種群SC-1和SC-8的ALS活性整體上呈先下降再上升的變化趨勢。SC-1的ALS相對活性的最低值和最高值分別出現在施藥后第3和第9 d，為0.60和0.92，且整個試驗過程中其ALS相對活性均顯著高于敏感種群SC-23;SC-8的ALS相對活性的最低值和最高值分別出現在施藥后第3和第7 d，為0.49和0.73，至試驗結束時（第9 d）為0.72，在整個試驗過程中其ALS相對活性均顯著高于SC-23，但顯著低于SC-1;敏感種群SC-23的ALS相對活性整體呈下降趨勢，最低值和最高值分別出現在施藥后第3和第1 d，為0.42和0.53，且直至試驗結束，其ALS相對活性僅為0.45，ALS相對活性不能恢復。可見，不同種群螢藺的ALS相對活性均受到吡嘧磺隆一定程度的抑制，且敏感種群受抑制程度明顯高于抗性種群;抗性種群間因抗性水平不同受抑制程度也存在差異，隨著時間延長，抗性水平越高，其ALS相對活性恢復能力越強。

2. 4 螢藺GSTs相對活性測定結果

吡嘧磺隆對抗、感種群螢藺的GSTs相對活性測定結果。施用吡嘧磺隆后，抗、感種群螢藺的GSTs相對活性整體呈先上升后下降的變化趨勢?？剐苑N群SC-1和SC-8的GSTs相對活性分別于施藥后第3和第1 d升至最高值，為2.36和1.94，之后逐漸下降，至試驗結束（第9 d）時分別為1.85和1.33，二者的GSTs相對活性從施藥后第1 d起顯著高于敏感種群SC-23，且SC-8的GSTs相對活性從施藥后第3 d起顯著低于SC-1;敏感種群SC-23的GSTs相對活性于施藥后第1 d升至最高值，為1.49，至試驗結束時為1.25?？梢?，施用吡嘧磺隆后，抗性種群的GSTs相對活性明顯高于敏感種群，與整株盆栽法測得的抗性趨勢一致。

3 討論

本研究結果表明，22個螢藺種群中有7個抗藥性種群，占31.8%，說明吡嘧磺隆已在黑龍江省多地存在抗性風險;同時發(fā)現不同采集點抗藥性螢藺種群的抗性水平差異明顯，可能與不同地區(qū)用藥歷史、施藥水平、生態(tài)環(huán)境等因素導致的高強度除草劑選擇壓力有關。根據整株盆栽法測定結果，在黑龍江省部分地區(qū)使用吡嘧磺隆防除螢藺存在一定的抗性風險，建議哈爾濱市依蘭縣德裕鄉(xiāng)和迎蘭鄉(xiāng)、哈爾市阿城區(qū)和平山鎮(zhèn)等已對吡嘧磺隆產生抗性的地區(qū)避免單一使用吡嘧磺隆，科學輪換使用不同作用機制的除草劑，以延緩抗藥性雜草的產生。

離體條件下ALS對吡嘧磺隆的敏感程度一方面可反映ALS與抗藥性的關系，另一方面能從酶水平確定螢藺對吡嘧磺隆的抗藥性水平（付丹妮等，2018）。本研究中，抗性種群SC-1和SC-8的ALS活性抑制率整體上低于敏感種群SC-23，說明敏感種群螢藺的ALS對吡嘧磺隆仍保持高度敏感，抗性種群敏感性明顯降低，與Yasushi（2003）研究抗唑吡嘧磺隆螢藺的結果相似。本研究中，抗性種群SC-1和SC-8的IC50分別為敏感種群SC-23的69.81和23.83倍，顯著高于SC-23，進一步說明抗性種群螢藺的ALS對吡嘧磺隆敏感性下降可能是其產生抗藥性的重要原因之一，與吳明根等（2007）研究抗吡嘧磺隆雨久花、吳小虎等（2011）研究抗苯磺隆麥家公離體條件下的ALS抗性機理結果相似?；铙w條件下，噴施250 g/ha吡嘧磺隆后，敏感種群螢藺的ALS相對活性整體呈下降趨勢，試驗結束時（施藥后第9 d）僅為0.45，說明ALS相對活性受到強烈抑制后不能恢復，可能是造成其對吡嘧磺隆敏感的原因。隋標峰等（2007）研究發(fā)現敏感性低的澤漆（Euphorbia helioscopia L.）活體ALS活性最高可達對照的2.90倍，認為較高的ALS活性能引起靶標酶水平過量表達，進而提高澤漆對苯磺隆的耐藥性。本研究中，抗性種群螢藺的ALS相對活性始終顯著高于敏感種群，且抗性種群螢藺的ALS相對活性均呈先下降再上升的變化趨勢，試驗結束時ALS相對活性分別恢復至同期對照的92%和72%，與隋標峰等（2007）的研究結果存在差異，結合離體ALS活性測定結果推測，可能不是由于靶標酶的過量表達，而是由于抗性種群螢藺的ALS對吡嘧磺隆敏感性下降，導致ALS相對活性受抑制程度較輕，隨著時間延長，吡嘧磺隆不斷被代謝，ALS相對活性又趨于恢復正常水平，與畢亞玲等（2013）研究抗苯磺隆薺菜活體ALS抗性機理的結果基本一致。此外，本研究發(fā)現，抗性和敏感種群螢藺ALS活性均在吡嘧磺隆處理后第3 d降至最低，與崔海蘭（2009）報道抗苯磺隆播娘蒿的活體ALS活性變化規(guī)律相似，可能與吡嘧磺隆本身是內吸傳導型除草劑而引起的最佳藥效發(fā)揮時間有關。

GSTs在抵御除草劑等外源物質損傷和抗逆性等方面扮演著重要角色，雜草體內的GST活性直接影響其對除草劑的解毒代謝能力（Riechers et al.，2010;Ma et al.，2013）。有研究表明，對不同生物或非生物脅迫GSTs可被特異性誘導，具有明確的特異性和表達模式（郭玉蓮等，2008）。本研究發(fā)現，從施用吡嘧磺隆后第1 d起，抗性和敏感種群螢藺的GSTs相對活性相比同期對照始終保持較高水平，且抗性種群螢藺的GSTs相對活性顯著高于敏感種群，說明抗性種群較敏感種群具有更高的誘導GSTs活性能力，GSTs對吡嘧磺隆解毒代謝能力的差異可能是螢藺對吡嘧磺隆產生抗藥性的部分原因，與彭學崗等（2009）研究抗苯磺隆豬殃殃、劉偉堂（2015）研究抗苯磺隆牛繁縷代謝抗性機理的結論相似。除草劑作為一種非生物逆境，與低溫、干旱、重金屬和鹽等其他逆境一樣會加劇植物的氧化脅迫（陳麗娜等，2010）。通常認為，GSTs通過清除脂類氫過氧化物和H2O2、催化毒性有機氫過氧化物的還原反應，在植物氧化應激反應中具有關鍵作用。本研究中，在吡嘧磺隆脅迫下，抗性和敏感種群螢藺的GSTs相對活性均呈先上升再下降的變化趨勢，其原因可能是螢藺通過增加GSTs活性而阻止脂質過氧化的鏈式反應，保護植物細胞膜免受氧化應激。

本研究通過整株盆栽法測定黑龍江省23個螢藺種群對吡嘧磺隆的抗性水平，進一步明確了黑龍江省部分地區(qū)稻田螢藺對吡嘧磺隆的抗性水平;通過測定抗、感螢藺種群的ALS和GSTs相對活性變化，初步明確黑龍江省稻田螢藺對吡嘧磺隆的抗藥性原因。近年來，螢藺對吡嘧磺隆的抗性程度和防除難度不斷提升，今后應加強對其抗性水平和蔓延趨勢的監(jiān)測;同時，雜草對除草劑產生抗性的機理十分復雜，有關螢藺對吡嘧磺隆產生抗性的分子機理仍需進一步探究。

4 結論

黑龍江省部分地區(qū)稻田螢藺已對吡嘧磺隆產生了低到中等水平抗性。抗性螢藺種群的ALS對吡嘧磺隆敏感性下降和GSTs代謝作用增強可能與其抗性有關。

參考文獻：

畢亞玲，劉君良，王兆振，卜東欣，郭文磊，王金信. 2013. 麥田抗性生物型薺菜對苯磺隆的抗性機制研究[J]. 農藥學學報，15（2）：171-177. [Bi Y L，Liu J L，Wang Z Z，Bu D X，Guo W L，Wang J X. 2013. Mechanism of resistance to tribenuron-methyl in a resistant? biotype of Capsella bursa-pastoris from wheat fields[J]. Chinese Journal of Pesticide Science，15（2）：171-177.]

陳麗麗，何付麗，范丹丹，張明波，李灼，郭曉慧，趙長山. 2013. 黑龍江省野慈姑對吡嘧磺隆的敏感性測定[J]. 植物保護，39（6）：120-123. [Chen L L，He F L，Fan D D，Zhang M B，Li Z，Guo X H，Zhao C S. 2013. Sensitivity tests of Sagittaria trifolia from Heilongjiang Province to pyrazosulfuron-ethyl[J]. Plant Protection，39（6）：120-123.]

陳麗娜，唐明燈，艾紹英，李盟軍，曾招兵，王艷紅. 2010. Pb脅迫條件下3種葉菜的生長和生理響應及其抗性差異[J]. 植物資源與環(huán)境學報，19（4）：78-83. [Chen L N，Tang M D，Ai S Y，Li M J，Zeng Z B，Wang Y H. 2010. Growth and physiological responses and variance of Pb resistance of three leaf vegetables under Pb stress[J]. Journal of Plant Resources and Environment，19（4）：78-83.]

崔海蘭. 2009. 播娘蒿（Descurainia sophia）對苯磺隆的抗藥性研究[D]. 北京：中國農業(yè)科學院. [Cui H L. 2009. The resistance of flix weed（Descurainia sophia） to tribenuron-methyl[D]. Beijing：Chinese Academy of Agricultural Sciences.]

范志金，錢傳范，于維強，陳俊鵬，李正名，王玲. 2003. 氯磺隆和苯磺隆對玉米乙酰乳酸合成酶抑制作用的研究[J]. 中國農業(yè)科學，36（2）：173-178. [Fan Z J，Qian C F，Yu W Q，Chen J P，Li Z M，Wang L. 2003. Study on enzymatic inhibition of acetolactate synthase from maize（Zea mays L.） by chlorsulfuron and tribenuron-methyl[J]. Scien-tia Agricultura Sinica，36（2）：173-178.]

付丹妮，趙鉑錘，陳彥，孫中華，紀明山. 2018. 東北稻田野慈姑對芐嘧磺隆抗藥性研究[J]. 中國植保導刊，（1）：17-23. [Fu D N，Zhao B C，Chen Y，Sun Z H，Ji M S. 2018. Resistance of Sagittaria trifolia L. to bensulfuron-methyl in paddy fields in northeast China[J]. China Plant Protection，（1）：17-23.]

高興祥，李美，高宗軍，房鋒，張悅麗，齊軍山. 2014. 山東省小麥田播娘蒿對苯磺隆的抗性測定[J]. 植物保護學報，41（3）：373-378. [Gao X X，Li M，Gao Z J，Fang F，Zhang Y L，Qi J S. 2014. Determination of flixweed（Descurainia sophia） resistance to tribenuron-methyl in Shandong Province[J]. Journal of Plant Protection，41（3）：373-378.]

郭玉蓮，陶波，鄭鐵軍，李寶英，翟喜海，潘亞清. 2008. 植物谷胱甘肽S-轉移酶（GSTS）及除草劑解毒劑的誘導作用[J]. 東北農業(yè)大學學報，39（7）：136-139. [Guo Y L，Tao B，Zheng T J，Li B Y，Zhai X H，Pan Y Q. 2008. Inducement action of plant GSTS and herbicides antidotes[J].Journal of Northeast Agricultural University，39（7）：136-139.]

郎紅，吳明根，李儉，吳松權. 2015. 延邊慈姑抗磺酰脲類除草劑的分子機制[J]. 吉林農業(yè)大學學報，37（3）：296-300.[Lang H，Wu M G，Li J，Wu S Q. 2015. Molecular me-chanism of herbicide resistant to sulfonylurea of Sagittaria sagittifolia in Yanbian[J]. Journal of Jilin Agricultural University，37（3）：296-300.]

李丹，李香菊，于惠林，崔海蘭. 2017. 我國部分地區(qū)水稻田鱧腸對吡嘧磺隆的抗性測定[J]. 植物保護，43（2）：196-201. [Li D，Li X J，Yu H L，Cui H L. 2017. Detection of resistance of Eclipta prostrata L. to pyrazosulfuron-ethyl in some provinces of China[J]. Plant Protection，43（2）：196-201.]

李平生，魏松紅，紀明山，東琴，王海寧. 2015. 遼寧省稻田野慈姑對芐嘧磺隆的抗藥性[J]. 植物保護學報，42（4）：663-668. [Li P S，Wei S H，Ji M S，Dong Q，Wang H N. 2015. The resistance of Sagittaria trifolia populations in rice fields from Liaoning Province to bensulfuron-methyl[J]. Acta Phytophylacica Sinica，42（4）：663-668.]

劉偉堂. 2015. 小麥田牛繁縷（Myosoton aquaticum L. Moench）對苯磺隆的抗性研究[D]. 泰安：山東農業(yè)大學. [Liu W T. 2015. Study on the resistance to tribenuron-methyl in water chickweed（Myosoton aquaticum L. Moench） in wheat fields[D]. Tai’an：Shandong Agricultural University.]

劉亞光，李敏，李威，朱金文，劉藍坤，師慧. 2015. 黑龍江省螢藺對芐嘧磺隆和吡嘧磺隆抗性測定[J]. 東北農業(yè)大學學報，46（10）：29-36. [Liu Y G，Li M，Li W，Zhu J W，Liu L K，Shi H. 2015. Resistance identification of Scirpus juncoides Roxb to bensulfuronmethyl and pyrazosulfuron-ethyl in Heilongjiang Province[J]. Journal of Northeast Agricultural University，46（10）：29-36.]

羅寶君. 2016. 黑龍江省西部地區(qū)水稻田惡性雜草的防除技術[J]. 農藥，55（9）： 692-695. [Luo B J. 2016. Study on malignant weed control technology in rice field of western regions of Heilongjiang Province[J]. Pesticides，55（9）： 692-695.]

彭學崗，王金信，劉君良，楊紀輝. 2009. 麥田抗性生物型豬殃殃對苯磺隆的抗性機制[J]. 農藥學學報，11（2）：191-196. [Peng X G，Wang J X，Liu J L，Yang J H. 2009. Mechanism of resistance to tribenuron-methyl in a resistant biotype of Galium aparine[J].Chinese Journal of Pesticide Science，11（2）：191-196.]

隋標峰，王金信，彭學崗，丁君，劉迎. 2007. 麥田不同雜草對苯磺隆敏感性差異的分子機制[J]. 植物保護學報，34（2）：204-208. [Sui B F，Wang J X，Peng X G，Ding J，Liu Y. 2007. Molecular basis of sensitivity difference in wheat weeds to tribenuron-methyl[J]. Journal of Plant Protection，34（2）：204-208.]

吳翠霞，馬士仲，馬沖，路興濤，王金信. 2018. 山東省小麥田薺菜對苯磺隆的抗性測定[J]. 植物保護，44（1）：170-173. [Wu C X，Ma S Z，Ma C，Lu X T，Wang J X. 2018.Resistant detection of Capsella bursa-pastoris to tribenuron-methyl in Shandong Province[J]. Plant Protection，44（1）：170-173.]

吳明根，曹鳳秋，劉亮. 2007. 磺酰脲類除草劑對抗、感性雨久花乙酰乳酸合成酶活性的影響[J]. 植物保護學報，34（5）：545-548. [Wu M G，Cao F Q，Liu L. 2007. Effect of sulfonylurea herbicides on the acetolactate synthases activity between resistant and susceptive biotypes of Monochoria korsakowii[J]. Journal of Plant Protection，34（5）：545-548.]

吳小虎，王金信，劉偉堂，郭鶴久，崔夕英，陳業(yè)兵. 2011. 山東省部分市縣麥田雜草麥家公Lithospermum arvense對苯磺隆的抗藥性[J]. 農藥學學報，13（6）：597-602.[Wu X H，Wang J X，Liu W T，Guo H J，Cui X Y，Chen Y B. 2011. Resistance of Lithospermum arvense to tribenuron-methyl in winter wheat fields in part of Shandong Pro-vince[J]. Chinese Journal of Pesticide Science，13（6）：597-602.]

張朝賢，倪漢文，魏守輝，黃紅娟，劉延，崔海蘭，隋標峰，張猛，郭峰. 2009. 雜草抗藥性研究進展[J]. 中國農業(yè)科學，42（4）：1274-1289. [Zhang C X，Ni H W，Wei S H，Huang H J，Liu Y，Cui H L，Sui B F，Zhang M，Guo F. 2009.? Current advances in research on herbicide resistance[J]. Scientia Agricultura Sinica，42（4）：1274-1289.]

張玉池，劉琪，相世剛，強勝，宋小玲. 2018. 稻田雜草對草甘膦和草銨膦的敏感性差異[J]. 江蘇農業(yè)學報，34（6）：1260-1266. [Zhang Y C，Liu Q，Xiang S G，Qiang S，Song X L. 2018. Sensitivity difference of weeds in rice field to glyphosate and glufosinate[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，34（6）：1260-1266.]

張云月，盧宗志，李洪鑫，崔海蘭. 2013. 雜草對乙酰乳酸合成酶抑制劑類除草劑抗藥性的研究進展[J]. 雜草學報，31（2）：1-5. [Zhang Y Y，Lu Z Z，Li H X，Cui H L. 2013. Research progress on weed resistance to acetolactate synthase inhibitors[J]. Weed Science，31（2）：1-5.]

Bai S，Liu W T，Wang H Z，Zhao N，Jia S，Zou N，Guo W L，Wang J X. 2018. Enhanced herbicide metabolism and metabolic resistance genes identified in tribenuron-methyl resistant Myosoton aquaticum L.[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，66（37）：9850-9857.

Fu D N，Shafi J，Zhao B C，Li X W，Zhu H，Wei S H，Ji M S. 2017. Bensulfuron-methyl resistant Sagittaria trifolia L.multiple resistance，cross-resistance and molecular basis of resistance to acetolactate synthase-inhibiting herbicides[J]. Archives of Biological Sciences，69（4）：649-658.

Ma R，Kaundun S S，Tranel P J，Riggins C W，McGinness D L，Hager A G，Hawkes T，Mc E，Riechers D E. 2013. Distinct detoxification mechanisms confer resistance to mesotrione and atrazine in a population of waterhemp[J]. Plant Physiology，163（1）：363-377.

Pamela J H，David D. 1996. Glutathione transferase activities and herbicide selection in maize and associated weed species[J]. Pesticide Science，46：267-275.

Powles S B，Yu Q. 2010. Evolution in action： Plants resistant to herbicides[J]. Annual Review of Plant Biology，61（1）：317-347.

Riechers D E，Kreuz K，Zhang Q. 2010. Detoxification without intoxication： Herbicide safeners activate plant defense gene expression[J]. Plant Physiology，153（1）：3-13.

Sada Y，Ikeda H，Yamato S，Kizawa S. 2013. Characterization of sulfonylurea-resistant Schoenoplectus juncoides having a target-site Asp（376）Glu mutation in the acetolactate synthase[J]. Pesticide Biochemistry & Physiology，107（1）：106-111.

Sada Y，Kizawa S，Ikeda H. 2012. Varied occurrence of diverse sulfonylurea-resistant biotypes of Schoenoplectus juncoides[Roxb.] Palla in Japan，as classified by an acetolactate synthase gene mutation[J]. Weed Biology & Management，12（4）：168-176.

Uchino A，Ogata S，Kohara H，Yoshida S，Yoshioka T，Watanabe H. 2010. Molecular basis of diverse responses to ace-tolactate synthase-inhibiting herbicides in sulfonylurea-resistant biotypes of Schoenoplectus juncoides[J]. Weed Bio-logy & Management，7（2）：89-96.

Yasushi Tanaka. 2003. Properties of acetolactate synthase from sulfonylurea-resistant Scirpus juncoides Roxb. var. ohwianus T. Koyama[J]. Pesticide Biochemistry & Physiology，77（3）：147-153.

（責任編輯 麻小燕）