2017-2018年貴州省畢節(jié)市羊小反芻獸疫診斷及血清學(xué)監(jiān)測調(diào)查

張平 賀志昊 宋德榮 周大榮 彭華

摘要：為切實(shí)掌握畢節(jié)市羊小反芻獸疫疫情發(fā)展趨勢，增強(qiáng)小反芻獸疫情預(yù)警預(yù)報(bào)能力，研究對2017-2018年畢節(jié)地區(qū)部分發(fā)病羊場的小反芻獸疫羊只進(jìn)行臨床及實(shí)驗(yàn)室診斷，同時(shí)對縣區(qū)利用春、秋兩季集中監(jiān)測及專項(xiàng)監(jiān)測對羊小反芻獸疫免疫抗體進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)室利用熒光定量PCR方法檢測更為準(zhǔn)確。2017-2018年畢節(jié)市小反芻獸疫免疫抗體陽性率平均達(dá)80%以上，總體處于較高水平，各縣區(qū)免疫抗體水平略有差異。研究調(diào)查為畢節(jié)市科學(xué)、有效防范小反芻獸疫病疫情發(fā)展趨勢提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：小反芻獸疫;抗體水平;監(jiān)測評估

中圖分類號：S858.26

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.24.001

0引言

小反芻獸疫（PestedesPetitsRuminants，PPR）是一種急性或者亞急性的接觸性傳染病，潛伏期為3～6d，最長可長21d，山羊發(fā)病時(shí)癥狀較綿羊嚴(yán)重。該病是由于感染小反芻獸疫病毒（PestedesPetitsRuminantsVirus，PPRV）而導(dǎo)致發(fā)病率和死亡率都較高。病羊主要是發(fā)熱、水樣腹瀉、黑痢，口鼻有粘性、膿性分泌物，口腔黏膜潰瘍、壞死，消瘦。小反芻獸疫首次在我國西藏發(fā)生。目前畢節(jié)已有該疫情發(fā)生，對畢節(jié)市畜牧業(yè)發(fā)展造成極其嚴(yán)重的影響。

小反芻獸疫常用的檢測方法是酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和熒光定量RT-PCR方法。研究通過2017-2018年，對畢節(jié)市9個(gè)縣（區(qū)）開展小反芻獸疫血清學(xué)與實(shí)驗(yàn)室診斷檢測。監(jiān)測結(jié)果為掌握畢節(jié)羊群小反芻獸疫免疫接種效果和感染情況，制定小反芻獸疫的防控決策提供科學(xué)依據(jù)。

1材料

1.1疫苗與診斷試劑

新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的小反芻獸疫（Nigeria75/1株）弱毒活疫苗，為政府招標(biāo)采購疫苗[1]。小反芻獸疫競爭ELISA檢測試劑盒、小反芻獸疫熒光RT-PCR檢測試劑盒，均購自中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心[2]。

1.2樣品采集與保存

2017-2018年，在畢節(jié)全市范圍內(nèi)，重點(diǎn)對規(guī)模養(yǎng)殖場、活畜交易市場和發(fā)生過小反芻獸疫疫情的區(qū)域采集羊血液、鼻拭子和部分病料樣品。

1.3主要器材

酶標(biāo)儀（美國伯樂BIO-RADiMark）、洗板機(jī)（美國伯樂BIO-RAD1575）、熒光PCR擴(kuò)增儀（美國伯樂BIO-7500）等。

2方法

2.1臨床癥狀觀察

研究對2017-2018年畢節(jié)市各縣區(qū)發(fā)生的6起小反芻獸疫疫情病例進(jìn)行現(xiàn)場解剖及臨床診斷。

2.2實(shí)驗(yàn)室RT-PCR檢測

提取病死羊組織臟器或羊鼻腔拭子的RNA，利用熒光定量RT-PCR方法進(jìn)行病毒核酸檢測[3]。試驗(yàn)結(jié)果成立條件為，陰性對照無Ct值，同時(shí)無特定擴(kuò)增曲線，陽性對照Ct值≤30并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線[4]。待檢樣品Ct值≤30，且出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線判為PPRV陽性;待檢樣品30<Ct<37并出現(xiàn)特定擴(kuò)增曲線判為可疑，需要重新復(fù)檢，再擴(kuò)增后進(jìn)行檢測結(jié)果判定，如仍為可疑，則可判定為陽性;被檢樣品Ct值≥37時(shí)，判定為陰性[5-7]。

2.3血清學(xué)監(jiān)測

調(diào)查研究利用畢節(jié)市春秋防集中監(jiān)測及專項(xiàng)監(jiān)測，對畢節(jié)2017-2018年4300份羊血清進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測。其中商品代養(yǎng)殖場2563份血清、散養(yǎng)戶1737份血清。

3結(jié)果與分析

3.1臨床癥狀

畢節(jié)發(fā)生的小反芻獸疫病例均出現(xiàn)精神倦怠，站立不穩(wěn)，眼結(jié)膜發(fā)炎并附著有黃色粘稠物，腸系膜出血，水樣腹瀉，部分出現(xiàn)紅色糞便臨床癥狀。見圖1。

3.2實(shí)驗(yàn)室RT-PCR檢測結(jié)果

2017-2018年采集鼻拭子和組織，應(yīng)用RT-PCR檢測PPRV病原。病原學(xué)監(jiān)測樣品總數(shù)量為6份，陽性數(shù)3份，陽性率為50%，見圖2。

3.3抗體監(jiān)測結(jié)果

2017-2018年連續(xù)2年對畢節(jié)市免疫小反芻獸疫羊的抗體水平進(jìn)行了監(jiān)測。38個(gè)規(guī)模場（戶）55個(gè)散養(yǎng)戶開展小反芻獸疫抗體監(jiān)測工作，檢測血清樣品4300份，免疫抗體合格樣品3746份，免疫抗體合格率87.11%。結(jié)果顯示，各年份抗體陽性率平均達(dá)到80%以上，均已經(jīng)達(dá)到國家規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)。

比較規(guī)模場和散養(yǎng)戶免疫后抗體的陽性率，發(fā)現(xiàn)各年度二者之間的差異均不顯著。其中2017年養(yǎng)殖場與散戶的免疫抗體水平低于2018年養(yǎng)殖場與散戶的免疫抗體水平近10個(gè)百分點(diǎn)，見圖3，2018年呈上升態(tài)勢。2017年散養(yǎng)戶高于規(guī)模場PPR抗體陽性率近3%，2018年畢節(jié)規(guī)模場和散養(yǎng)戶PPR抗體陽性率基本接近。

比較畢節(jié)市各個(gè)縣區(qū)的免疫抗體陽性率，發(fā)現(xiàn)2017-2018年各個(gè)縣區(qū)免疫抗體水平都在70%以上，七星關(guān)區(qū)PPR抗體水平略有下降，其中威寧縣PPR抗體水平整體高于其他縣，黔西縣PPR抗體水平相對低于其他縣區(qū)10%～26%。總體上小反芻獸疫免疫抗體水平達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。見圖4。

4討論

研究對6例送檢樣品進(jìn)行熒光定量PCR檢測，其中3例呈現(xiàn)小反芻獸疫陽性，3例呈現(xiàn)陰性。通過對2年的血清學(xué)樣品進(jìn)行監(jiān)測統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示畢節(jié)本地區(qū)2017年小反芻獸疫免疫抗體水平低于2018年，整體免疫抗體水平達(dá)到80%以上，呈現(xiàn)逐年上升趨勢，商品代養(yǎng)殖場抗體水平整體高于散戶抗體水平近10%。另外各縣區(qū)免疫抗體水平參差不齊。

5結(jié)束語

PPR在畢節(jié)地區(qū)是一種新傳入的動(dòng)物疫病，近年由于混合感染疫病的不斷出現(xiàn)，小反芻獸疫疫病已經(jīng)不能簡單的通過臨床癥狀進(jìn)行診斷，熒光定量PCR檢測是一種準(zhǔn)確、有效的診斷方法[8-9]。受于檢測設(shè)備的限制，各縣區(qū)實(shí)驗(yàn)室目前還不能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，羊只發(fā)生不明原因死亡，采樣送檢，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測，是確診小反芻獸疫最直接的方式。隨著小反芻獸疫免疫抗體水平逐年上升以及防疫人員免疫操作技能的不段加強(qiáng)，畢節(jié)地區(qū)爆發(fā)大規(guī)模的疫情的風(fēng)險(xiǎn)也隨之降低。畢節(jié)堅(jiān)持政府主導(dǎo)、社會(huì)參與、部門合作、區(qū)域協(xié)作的原則，強(qiáng)化省際間合作，對發(fā)現(xiàn)疫區(qū)運(yùn)出的羊只，在采取撲殺等措施同時(shí)，及時(shí)通報(bào)相關(guān)省（區(qū)）獸醫(yī)部門，防止動(dòng)物疫病跨區(qū)域傳播。

參考文獻(xiàn)

[1]劉永宏，趙麗，曹勝波，等.小反芻獸疫在中國的流行趨勢及應(yīng)對措施[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，36（1）：110-113.

[2]印春生，支海兵，王樂元，等.小反芻獸疫活疫苗臨床試驗(yàn)研究[J].中國獸藥雜志，2010，44（7）：1-5.

[3]周子濤.國內(nèi)小反芻獸疫流行現(xiàn)狀及防控對策[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2017（10）：246.

[4]次仁羅布，西藏阿里地區(qū)小反芻獸疫的流行情況與綜合防控[J].山東畜牧獸醫(yī)，2013（5）：44-45.

[5]周海寧，寧夏羊小反芻獸疫疫情監(jiān)測及防控研究[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2017.

[6] Diallo A. Control of peste des petits ruminants： classical andnew generation vaccines[J]. Developmental Biology，2003，114： 113-119.

[7]貴州安順和寧夏吳忠分別發(fā)生H5N1流感疫情和小反芻獸疫疫情[EB/OL].http：//www.farmer.com.cn/jjpd/xm/slyfk/2014/3/t20140310-945250.

[8]陸則基，王志亮，劉雨田，等.西藏阿里地區(qū)小反芻獸疫流行病學(xué)調(diào)查研究[J].中國動(dòng)物檢疫，2008，25（12）：4447.

[9]羅靜，何宏軒.小反芻獸疫病毒的分子生物學(xué)特性及其在全球的流行[J].河北師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2009，33（4）：543-550.