二甲雙胍治療Ⅱ型糖尿病大鼠的代謝組學研究

曾曉會, 卓俊城,3, 謝凱楓,3,李鈺婷,3, 占心佾,3, 陳玉興, 甘海寧, 黃雪君, 黃丹娥

(1. 廣東省中醫藥工程技術研究院，廣東 廣州 510095; 2. 廣東省中醫藥研究開發重點實驗室，廣東 廣州 510095；3. 廣州中醫藥大學第五臨床醫學院，廣東 廣州 510405)

2型糖尿病(type 2 diabetic melitus，T2DM)是一種經典的糖脂代謝性紊亂疾病，主要病因為胰島素相對缺乏，或者胰島素敏感性下降引起的胰島素抵抗，癥狀表現為胰島素代償、高血糖以及高血脂，長期發展將衍生危害性極大的并發癥，如糖尿病腎病、眼病及殘足，嚴重影響患者生活質量[1]。據世界衛生組織預計，在2035年，全球罹患T2DM的人數將達到5.3億[2]。

目前認為，脂質代謝的紊亂是T2DM發病機制的重要誘因，故臨床上采取的治療策略是降糖與調脂并重。研究發現，脂肪酸、磷脂和膽汁酸代謝的異常能促進胰島素抵抗進程，從而進一步惡化T2DM，但關于這部分的作用機制尚未明確[3-4]。二甲雙胍是治療T2DM的一線藥物，臨床使用已超過50多年。目前認為，它的藥理作用機制主要是通過促進糖酵解和脂肪酸氧化，以及抑制糖異生途徑和脂肪酸合成，從而改善胰島素抵抗，治療T2DM[5]。雖然二甲雙胍調節脂質代謝的作用機制目前有所進展，但研究者們認為還未充分認識二甲雙胍在脂質代謝中扮演的角色，所以還需要對其藥理作用進一步研究和發現[6]。

代謝組學是運用高通量儀器，對機體內分子質量小于1 000的代謝物質進行定性定量分析，旨在尋找與生理病理存在規律的特異性分子標志物，適用于研究代謝性疾病的發病機制及治療藥物的作用機制。已有多篇文獻運用代謝組學手段研究T2DM的發病機制，并且取得了一定的進展[7-8]。故本實驗欲采用非靶向代謝組學手段，研究二甲雙胍對T2DM大鼠血清中脂質代謝物質的影響，并通過潛在的生物標志物，預測并用分子生物學手段驗證二甲雙胍可能作用的代謝通路，為二甲雙胍創新開發提供理論依據。

1 材料

1.1 實驗動物健康♂Wistar大鼠，體質量(180～220) g，購自廣東省醫學實驗動物中心，實驗動物生產許可證號：SCXK(粵)2013-0002，實驗動物質量合格證號：GDPITCM160805。動物飼養在廣東省中醫藥工程技術研究院SPF級動物實驗室，設施使用許可證號：SYXK(粵)2010-0059。

1.2 藥物與試劑鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)，純度>98%，Biosharp公司；鹽酸二甲雙胍片(批號：AAN6706，每片0.5 g)，購自中美上海施貴寶制藥有限公司；膽固醇(total cholesterol，TC)試劑盒(批號20180415)、甘油三酯(triglyceride，TG)試劑盒(批號20180415)、游離脂肪酸(free fatty acids，FFA)試劑盒(批號20180415)、葡萄糖(glucose，GLU)試劑盒(批號20180415)，均購自南京建成生物工程研究所；HPLC級乙腈(美國默克公司)；HPLC級甲酸(美國Acros)；AB Sciex 5600 Triple TOF校正液(美國AB Science公司)。

1.3 儀器AB Sciex 5600 Triple TOF液質聯用儀(UPLC/ESI-T-TOF/MS，美國AB Science公司)；Acquity BEH C18色譜柱(美國Waters)；IQTM5型熒光定量PCR儀(美國Bio-Rad公司)；SmartSpec plus 核酸蛋白測定儀(美國Bio-Rad公司)Velocity 14R高速冷凍離心機(澳大利亞Dynamic)；超純水儀Milli-Q(美國MILLIPORE)；Varioskan Flash型全波長多功能酶標儀(美國Thermo公司)；LBY-N7500AHemsr全自動血流變檢測儀(北京普利生儀器有限公司)；5450型小型高速離心機(德國Eppendorf公司)；BSA2245型電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司)；YD-L6型智能型生物組織包埋機(浙江省金華市益迪醫療設備廠)。

2 方法

2.1 T2DM大鼠模型的制備高脂高糖大鼠飼料(high fat and high sugar diet，HFSD)的配比為：20%果糖、12%豬油、5%脫脂奶粉、2%雞蛋黃和61%普通飼料。大鼠在恒溫(24±2)℃、光照周期12 h/12 h環境中分籠飼養，適應性飼養1周。用HFSD喂養Wistar大鼠連續4周后，肌肉注射35 mg·kg-1STZ，72 h后測定空腹血糖，空腹血糖連續3 d≥11.1 mmol·L-1，判斷為T2DM。

2.2 分組及給藥隨機選取10只Wistar大鼠作為正常對照組，將剩余20只大鼠造模后，根據血糖值，隨機分成模型組和二甲雙胍組，每組10只。二甲雙胍組大鼠灌胃給予二甲雙胍180 mg·kg-1，按照給藥體積10 mL·kg-1與去離子水每天現配現用；正常組和模型組每天灌胃給予等量去離子水，連續給藥8周后結束實驗。

2.3 樣品采集實驗結束后，10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈取血，分別置于EDTA抗凝管及普通采血管中；將肝臟和胰腺各取部分，置于10%甲醛溶液中保存，其余部分于-80 ℃儲存。

2.4 代謝組學樣品制備將凍存血清從-80 ℃冰箱取出，在室溫緩慢解凍，向300 μL血清加入900 μL乙腈，2 000 r·min-1渦旋混勻2 min，4 ℃、15 000 r·min-1離心15 min，然后取上清液，轉移至2.0 mL進樣瓶內。

2.5 液質聯用分析檢測條件

2.5.1液相條件 Acquity BEH C18分析柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，流動A相為0.1%甲酸水溶液；流動B相為乙腈，通過梯度方式洗脫樣品，具體梯度組成：0～2.0 min，98% A；2.0～4.0 min，98%-75% A；4.0～10.0 min，75%-50% A；10.0～12.0 min，50%-35% A；12.0～22.0 min，35%-15% A；22.0～30.0 min，15%-0% A；30.0～32.0 min，0% A。流速為0.4 mL·min-1，柱溫為30 ℃，進樣量為2 μL。

2.5.2MS條件 實驗選用ESI源，在正、負離子兩種模式下檢測分析，均采用高分辨和動態背景扣除模式，并分別設置為1級(TOF MS)和2級(Product Ion)檢測參數。TOF MS參數設為采集范圍100～2 000 Da；采集時間30 min；掃描時間0.08 s；脫溶劑氣流速度為50 mL·min-1；霧化氣流速度為50 mL·min-1；氣簾氣流速為35 mL·min-1；脫溶劑氣溫度為500 ℃；去簇電壓為+80/-100 V；離子噴霧電壓為+5 500/-4 500 V；碰撞能±10 V；排除同位素4 Da；質譜漂移范圍50 mDa。Product Ion參數設為采集范圍50～1 000 Da；采集時間31 min；掃描時間0.1 s；脫溶劑氣流速為50 mL·min-1；霧化氣流速為50 mL·min-1；氣簾氣流速為35 mL·min-1；脫溶劑氣溫度為500 ℃；去簇電壓為+80/-100 V；離子噴霧電壓為+5 500/-4 500 V；碰撞能為±40 V；碰撞能分散度為15；離子束寬度25；離子釋放延遲70；排除同位素4 Da；質譜漂移范圍在50 mDa。

2.6 qPCR檢測大鼠肝臟基因mRNA的表達各組大鼠取同一位置肝臟100 mg，液氮下研磨，然后加入1 mL TRIzol試劑，混勻后轉移到至離心管中，室溫放置5 min。4 ℃、12 000 r·min-1離心10 min。取出上清液，轉入新的離心管中，加入200 μL氯仿，混勻，4 ℃、12 000 r·min-1離心10 min。上清液轉移到新的離心管，加入等體積異丙醇，-20 ℃冰箱靜置過夜。次日，4 ℃、12 000 r·min-1離心10 min。棄上清，沉淀用75%乙醇洗滌兩次后，室溫下干燥。最后用200 μL滅菌超純水溶解沉淀，并用核酸蛋白測定儀測定OD260/OD280比值，算出RNA的濃度和純度[9]。加入上述提取的總RNA，用RevertAidTMFirst Strand cDNA合成試劑盒進行反轉錄，合成cDNA。取1 μL cDNA、12.5 μL MaximaTM SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2×)、1 μmol·L-1正向引物和1 μmol·L-1反向引物，配成25 μL的反應體系。cDNA使用特定引物加熱變性，混合后加入至PCR儀進行擴增。第1步94 ℃ 5 min；第2步95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 50 s，45個循環；第3步72 ℃ 7 min。引物由生工生物工程(上海)有限公司合成，引物序列見Tab 1。

2.7 病理組織切片將肝臟以及胰腺除去器官周圍的脂肪及結締組織，生理鹽水沖洗后，用10%甲醛固定組織，隨后依次使用乙醇濃度梯度法脫水，將脫水后的組織浸入二甲苯，待組織呈透明狀時，停止二甲苯浸泡。隨后，將組織進行包埋、切片和烘干。經二甲苯脫蠟后，用乙醇梯度法洗去二甲苯。之后進行蘇木精-伊紅染色，用乙醇脫水，二甲苯透明，最后用中性樹脂封片，并觀察。

3 結果

3.1 生化指標結果如Fig 1所示，與對照組相比，模型組的體質量和胰腺指數明顯下降(P<0.05)，肝臟指數明顯上升(P<0.01)；二甲雙胍組的體質量和胰腺指數均明顯回升(P<0.05)，且肝臟指數明顯降低(P<0.01)。從糖脂生化指標的結果可明顯看出，與對照組相比，OGTT在模型組中明顯受損，模型組中的胰島素含量明顯降低，TC、TG、FFA和GLU均明顯升高(P<0.01)，表明模型大鼠已呈現明顯的胰島素抵抗癥狀，糖脂已明顯紊亂；而二甲雙胍能明顯改善OGTT，升高胰島素水平，降低TG、FFA和GLU水平(P<0.05)。Tab 2結果顯示，在模型大鼠中，低切、中切、高切和血液黏度均明顯升高(P<0.01)，呈現血瘀的癥狀，而二甲雙胍均能明顯降低這4個血液流變學指標(P<0.05)。

Tab 1 Primer sequences

G6Pase：glucose-6-phosphatase; GS：glucogen synthase; HK：hexokinase; PDHC：pyruvate dehydrogenase complex; LDHalpha：lactate dehydrogenase alpha; ACC：acetyl coenzyme A carboxylase; CPT1：carnitine acyltransferase 1; FAS：fatty acid synthase; HMGCR：methyl-glutamyl coenzyme A; HL：hepatic total esterase; LDLR：LDL receptor; LPL：lipoprotein esterase; PCSK9：proprotein convertase subtilisin/kexin type 9；SREBF1：steroid response element binding factor 1; SREBF2：steroid response element binding factor 2; FXR：fanisoloid X receptor; FGFR4：fibroblast growth factor receptor 4; CYP7A1：cholesterol 7alpha-hydroxylase; CYP8B1：cytochrome P450 family 8 subfamily B member 1; CTPα：cyphadine triphoste alpha; DGAT：diglyceride acyltransferase.

Fig 1 Effect of metformin on serum biochemical indicators in T2DM

A：Body weight; B：Liver coefficient; C：Pancreas coefficient; D：Blood sugar; E：OGTT; F：Insulin; G：Total cholesterol; H：Total triglycerides; I：Free fatty acids.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group.

Tab 2 Effect of metformin on hemorheological indicators in T2DM

**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group

3.2 PCA結果分析本實驗中，先采用非監督的PCA分析方法識別不同組別之間的主成分，相似的樣本會聚在一起，有差異的樣本則會分布于不同的區域，通過每一個樣品在空間中的分布可以清晰地了解代謝變化的趨勢。從PCA score圖中可明顯看出(Fig 2A、2B)，在正、負離子模式下，模型組與正常組之間分離良好，說明代謝譜可以有效辨別疾病與正常大鼠之間的差異；且二甲雙胍組與模型組之間分離良好，無交叉重疊的現象，說明二甲雙胍對T2DM大鼠的代謝物質具有一定的影響。離子加載圖(inion loading)則能直觀地看出是否存在潛在的分子標志物，離綠色聚集區距離越遠的離子，對差異的貢獻度就越高。由Fig 2C、2D可分析出，在正、負離子模式下，均存在潛在的分子標志物。

3.3 PLS-DA結果分析采用PLS-DA對代謝譜差異進行了最大限度的分析。結果顯示，正離子模式：R2X=0.914，R2Y=0.981，Q2 (cum) =0.934；負離子模式：R2X=0.589，R2Y (cum)=0.989，Q2 (cum) =0.908；以上各組的PLS-DA圖中Q2Y(cum)、R2Y(cum)的值均接近于1，并且R2Y(cum) 與Q 2Y(cum)之間的差值小于0.3，表明該模型具有良好的擬合度和預測能力。由Fig 3A、3B可以清晰地看出，模型組與對照組之間離散程度良好，表明該兩組間的代謝物質有明顯的改變，其T2DM大鼠內源性代謝物質的變化可區別于正常組大鼠。在正、負離子模式下，二甲雙胍組與正常組、模型組之間均分離良好；在PLS-DA Score的三維模式下(Fig 3C、3D)，可直觀地看出，二甲雙胍組與正常組、模型組之間并沒有空間上的疊合，結果說明二甲雙胍對T2DM大鼠的代謝物質有明顯的影響。

Fig 2 PCA results of serum metabonomics and ion loading maps of T2DM rats

A, B：Two-dimensional PCA diagrams in positive and negative ion modes; C, D：Ion loading diagrams in positive and negative ion modes respectively.

Fig 3 PLS-DA results of serum metabonomics in T2DM rats

A, B：PLS-DA two-dimensional maps in positive and negative ion mode; C, D：PLS-DA three-dimensional maps in positive and negative ion mode respectively.

3.4 潛在的生物標志物的分析根據在PCA和PLS-DA分析中的顯著性指標，在t檢驗和變異重要性(VIP)>1的標準下，篩選出具有顯著性差異的化合物。結果在各組中找到了17個具有明顯差異的化合物(Tab 3)。然后，根據所得到的分子式進行數據庫檢索，鑒定出其差異性代謝產物，并將其大致歸類為：磷脂類[溶血磷脂類：LPCs, 磷酯膽堿類：PCs和PGP (18 ∶1)], 磷脂降解產物 (磷脂酸乙醇胺：CNE), β氧化產物 (3-羥基己二酸：HAA，乙烯酰甘氨酸：VAG，二十四碳六烯酸：THA), 膽酸 (膽酸：CA; 去鵝氧膽酸：CDCA，去豬氧膽酸：IDCA), 三酰甘油水解產物[單酰甘油，MG (22 ∶4)], 糖代謝產物 (葡萄糖-6-磷酸：G6P), 膽固醇合成產物 (醛固酮：ADO)，花生四烯酸產物 (三羥基縮水甘油三酯酸：11,12,15-THETA)。發現其主要涉及的代謝通路有脂肪酸代謝、膽酸代謝、膽固醇代謝、糖代謝以及磷脂代謝等重要代謝途徑。

此外，通過聚類和熱圖分析(Fig 4)，可以直觀地看出內源性代謝物在各組間差異的行為表現。其中發現，二甲雙胍能上調的差異性生物標志物有MG(22 ∶4)、THETA、CNE、CA、CDCA、IDCA和THA；下調的差異性生物標志物有G6P、LPCs、PCs、PGP(18 ∶1)、HAA、VAG和ADO；并且經生物標志物含量測定及對比，差異具有統計學意義。

The response values of metabolites in model group and metformin group were calibrated with those in blank control group, ↑ indicating an increase in the level, ↓ indicating a decrease in the level.*P<0.05,**P<0.01vsnormal group,#P<0.05,##P<0.01vsmodel group.

Normal group (Control 01～Control 10), model group (Model 01～Model 10), metformin group (Met01～Met10).

3.5 qPCR結果分析Tab 4結果顯示，與正常組相比，模型組中G6Pase、LDHα和GS的基因表達均明顯上調(P<0.01)，PDHC的基因表達明顯下調(P<0.05)；二甲雙胍則能明顯下調這3個基因的表達(P<0.05)，上調PDHC的表達水平。同時，模型組與二甲雙胍組之間HK的基因表達差異無顯著性 (P>0.05)。與FFA合成代謝相關的SREBF1、FAS、ACC、CTP1和LPL的基因，在模型組中的表達均較正常對照組明顯上調(P<0.05)，而二甲雙胍明顯下調SREBF1、FAS、ACC、CTP1和LPL的表達(P<0.05)；HL表達在各組間差異無統計學意義(P>0.05)。與正常對照組相比，與膽固醇合成有關的SREBF2、HMGCR、LDLR、PCSK9在模型組中的基因表達明顯上調(P<0.05)，而二甲雙胍能明顯下調SREBF2在模型中的表達(P<0.05)，對HMGCR、LDLR、PCSK9的表達無明顯影響(P>0.05)。與正常對照組相比，模型組CYP7A1和CYP8B1基因表達均明顯上調(P<0.05)，而二甲雙胍明顯下調CYP7A1和CYP8B1的基因表達水平(P<0.05)。在模型組中，FXR和FGFR4的基因表達與正常對照組之間差異無統計學意義(P>0.05)，但二甲雙胍能明顯上調FXR和FGFR4的基因表達(P<0.05)。此外，與正常對照組相比，模型組DGAT和CTPα基因表達均明顯上調(P<0.01)，而二甲雙胍能明顯下調DGAT和CTPα基因表達(P<0.05)。在模型組中，TNF-α和IL-6基因表達均明顯升高(P<0.01)，二甲雙胍能明顯降低這兩個炎癥基因的表達水平(P<0.01)。

3.6 病理結果分析肝臟和胰腺組織的病理結果見Fig 5，正常組中的肝細胞呈類圓形，胰腺細胞呈卵圓形，邊界清晰且細胞核完整；與對照組相比，模型組肝細胞與胰腺細胞均出現排列紊亂，形狀不規則，并伴隨細胞邊界模糊和細胞核的萎縮，呈現彌漫性脂肪樣變；與模型組對比，在二甲雙胍治療組中，肝組織細胞與胰腺細胞的結構與邊界均較為清晰整齊，脂肪空泡大小和數量均有不同程度的減少，與模型組相比病理程度有所減輕。說明二甲雙胍能夠減輕脂肪變性對肝組織和胰腺細胞造成的損傷。

MetabolismControlModelMetforminG6Pase1.00±0.395.03±1.00**3.17±0.70#GS1.00±0.173.31±0.68**1.55±0.35##HK1.00±0.180.64±0.13*0.55±0.18PDHC1.00±0.285.68±1.00*1.91±1.02##LDHα1.00±0.291.40±0.64**0.66±0.48##SREBF11.00±0.346.18±1.10**1.80±1.27##FAS1.00±0.171.46±0.51**0.53±0.28##ACC1.00±0.250.75±0.31*3.35±1.15##CPT11.00±0.2010.15±4.06*2.65±0.86#LPL1.00±0.190.52±0.17**1.44±0.33##HL1.00±0.471.54±0.401.40±0.56SREBF21.00±0.162.09±0.44**0.80±0.46##HMGCR1.00±0.252.53±1.19*2.35±1.45LDLR1.00±0.161.98±0.26**1.93±0.52PCSK91.00±0.231.72±0.85*1.73±0.59FXR1.00±0.200.75±0.331.41±0.62#FGFR41.00±0.250.44±0.141.15±0.22##CYP7A11.00±0.333.48±0.93**1.09±1.07#CYP8B11.00±0.565.10±1.98*0.87±0.51#DGAT1.00±0.322.81±0.89**1.33±0.75#CTPα0.97±0.202.20±0.61**1.47±0.42#

The response values of metabolites in model group and metformin group were calibrated with blank control group.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group,#P<0.05,##P<0.01vsmodel group.

Fig 5 HE staining of liver and pancreas(×200)

4 討論

脂質代謝紊亂是T2DM的重要發病基礎，二甲雙胍作為治療T2DM的一線藥物，近幾年來不斷地被發現具有調節脂質紊亂的作用，但機制尚未完全明確。故本實驗采用非靶向代謝組學的手段，研究二甲雙胍對T2DM中脂質代謝的作用機制，為完善和發現其新的作用通路。

二甲雙胍降血糖的作用主要是通過腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)能量代謝通路來完成，其中包括對糖異生和糖原合成途徑的抑制作用，促進PDHC依賴的有氧糖酵解，以上的藥理作用已被廣泛證明[6]。本實驗發現，二甲雙胍對脂質代謝有明顯影響，主要包括脂肪酸、膽汁酸和磷脂代謝。

二甲雙胍對脂肪酸代謝的影響，主要包括對SREBF1、ACC、FAS和CPT1的表達調控，這3個基因的上調將會導致T2DM患者體內FFA水平升高，隨后刺激線粒體內膜上CPT1的活性，增強對FFA轉運的效率，從而為機體提供大量的ATP，這也是T2DM患者的主要供能方式[10-11]。然而，二甲雙胍干預后，MG(22 ∶4)水平升高，TG水平降低，LPL的活性增強，同時，SREBF1、ACC、FAS和CTP1的表達均明顯下調，說明二甲雙胍能增強對TG的水解作用，并抑制FFA的內源性合成以及氧化。雖然TG向MG的轉化過程會釋放FFA，但FFA在機體內的總量是降低的，進一步說明FA的內源性合成是導致機體積聚大量FFA的主要原因。此外，肝臟和胰腺的HE染色結果證明，二甲雙胍抗炎作用的機制可能與抑制其內源性合成及氧化分解有關。

二甲雙胍對膽汁酸代謝的影響，則包括了對FXR/FGFR4/CYP7A1的調節。CA、CDCA和IDCA是一類能增強對膽固醇的溶解性，以及促進TG水解的膽汁酸[12]。其中，CDCA與FXR的親和力最強，通過與該核受體的結合，激活FGFR4，從而實現對膽汁酸的負反饋調節[13]。然而，高表達的CYP7A1和CYP8B1，以及低水平的CA、CDCA和IDCA，揭示了機體對膽汁酸的負反饋調節失去了控制；二甲雙胍干預后，FXR和FGFR4表達上調，同時，CYP7A1和CYP8B1表達下調，體內膽固醇向CDCA的轉化增強[14]，增強了溶解膽固醇和水解TG的作用。這一結果表明，二甲雙胍可能通過激活FXR和FGFR4，實現對CYP7A1和CYP8B1的抑制，調節膽汁酸的合成。與此同時，二甲雙胍干預后，T2DM大鼠體內DAGT和CTPα的表達明顯下調，MG (22 ∶4)水平升高，磷脂類代謝產物水平降低，表明了由二酰甘油胞苷5磷酸二鈉介導的磷脂合成途徑受到了限制[15]。

另外，本實驗發現，二甲雙胍還能夠改善血液循環。ADO為腎素-血管緊張素，能夠調節循環血容量；THETA為內皮血管舒張因子，能使平滑肌舒張，降低血液黏稠度和血壓。中醫理論認為，T2DM病機特點為陰虛，燥熱及血瘀，而血瘀則被認為與脂質紊亂和炎癥相關[16-17]。二甲雙胍能明顯降低ADO，升高THETA的含量，從而改善T2DM血液循環，降低血液黏稠度。此外，THETA主要由磷脂通過15-脂氧酶介導的途徑合成[18]，二甲雙胍能明顯提高這一代謝產物在體內的含量，間接表明二甲雙胍能降低體內磷酯類代謝產物的含量。

綜上所述，通過代謝組學手段，本實驗發現大鼠血清中有17種潛在的生物標志物。經過qPCR驗證，發現二甲雙胍除了能通過AMPK能量代謝途徑調節糖代謝，還能通過FXR/FGF4R調節膽汁酸代謝，介導SRBEF1/ACC/FAS/CPT1途徑調節脂肪酸合成及氧化，以及通過CTPα/DAGT途徑抑制磷脂合成。此外，二甲雙胍還能通過調節ADO和THETA的水平，改善T2DM血瘀的癥狀。

(致謝：本實驗在廣東省中醫藥工程技術研究院中藥藥理研究室和廣東省中醫藥研究開發重點實驗室開展，衷心感謝各位老師和同學的幫助與支持。)