商洛連翹中連翹苷和連翹酯苷A含量比較研究

趙志新,趙月梅

(商洛學院 生物醫藥與食品工程學院，陜西 商洛 726000)

作為木犀科連翹屬植物，連翹(Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl)主產于陜西、河南和山西等省份，主要以果實入藥，常用于清熱解毒，消腫散結等病之治療[1]。商洛地處秦嶺腹地，其獨特的氣候、土壤等條件適宜于連翹的生長，同時連翹被商洛市政府列為重點發展的“五大商藥”之一[2]。目前主要通過測定連翹苷及連翹酯苷A的含量對其藥效成分進行評價，這也是2015版藥典所采用的標準。連翹苷為連翹的干燥果實和葉中的提取物，是較早分離出來的主要活性成分，易溶于甲醇、乙醇等有機溶劑；連翹酯苷A主要來自于連翹干燥的果實與葉子中，它可溶于水、乙醇、甲醇，但難溶于乙醚，氯仿[3]。

長期以來，連翹藥材來源主要以野生資源為主，采收混亂，是造成連翹品質不穩定的重要因素[4]。因此筆者采集不同月份商洛地區種植的連翹葉和果實，通過高效液相色譜法(HPLC)檢測連翹苷和連翹酯苷A的含量，以期對不同生長期及不同藥用部位連翹藥材品質進行評價，為確定商洛連翹合理采收期提供借鑒，同時也有利于對連翹及其相關藥品進行質量控制。

1 材料與方法

1.1 供試材料

以我校商洛張村種植基地的連翹為實驗材料，分別于2017年8月3日、9月3日和10月3日采集連翹果實和葉子，帶至實驗室105℃殺青30 min，然后80℃烘干至恒重，粉碎后過40目篩，密封瓶保存備用[5]。

1.2 儀器與試劑

液相色譜儀為日本島津公司生產的LC-20A，液相用溶劑過濾器為ap-99015；連翹苷標準品及連翹酯苷A標準品為上海金穗生物科技有限公司生產，甲醇、乙醇為分析純(A.R.)。

1.3 試驗方法

1.3.1 連翹苷色譜條件與標準曲線制作 色譜條件：填充劑為C18色譜柱；流動相為乙腈-水(體積比為25∶75)；色譜檢測波長277 nm；理論塔板數不低于3000(以連翹苷峰計算)。對照品溶液的制備：取連翹苷標準品，加甲醇制成0.2 mg·mL-1溶液。

供試品溶液的制備：分別稱取不同月份的連翹果實及葉子的樣品粉末0.1 g，加入甲醇1.5 mL，過夜。將浸漬過夜的樣品溶液，使用250 W，40 kHz超聲器處理30 min，室溫冷卻，若有損失，用甲醇補足，搖勻過濾，精確量取過濾后的溶液0.5 mL，放入烘箱，將溶液蒸至近干，加在中性氧化鋁柱(100～120目)上，然后使用70%乙醇進行冼脫，將洗脫液濃縮至干，后用50%甲醇溶解，轉移至5 mL容量瓶中，搖勻過濾，取過濾后的溶液，即為連翹苷供試品溶液。

標準曲線：使用3、5、10、20、40和50 μL的對照品溶液，按上述色譜條件，檢測連翹苷峰值。以進樣量X(μg)對峰面積Y進行回歸，得連翹苷回歸方程為Y=571499X-6008.3，R2= 0.9993。回歸方程顯示，上樣溶液在0.30～4.50 μg有良好的線性關系。

1.3.2 連翹酯苷A色譜條件與標準曲線制作 色譜條件：填充劑為C18色譜柱；流動相為乙腈-0.4%冰醋酸(體積比為15∶85)；色譜檢測波長為330 nm；理論塔板數不低于5000(以連翹苷峰計算)。對照品溶液的制備：取連翹酯苷A對照品，精密稱量，后加甲醇制成0.1 mg·mL-1溶液。

供試品溶液的制備：分別稱取不同月份的連翹果實及葉子樣品粉末0.1 g，加入70%甲醇3 mL，密塞，使用250 W，40 kHz超聲器處理30 min，室溫冷卻，再稱定重量，若有損失，用70%甲醇補足。搖勻過濾，即得連翹酯苷A供試品溶液。

標準曲線：使用3、5、10、20、40、和50 μL的對照品溶液，按上述色譜條件，檢測翹酯苷A峰值。以進樣量X(μg)對峰面積Y進行回歸，得連翹酯苷A回歸方程為Y=581726X-732634，R2=0.9998。回歸方程顯示，上樣溶液在0.50～4.00 μg具有良好的線性關系。

2 結果與分析

2.1 不同部位連翹苷和連翹酯苷A動態變化研究

從圖1可以看出，連翹葉中連翹苷的含量從8月到10月份逐漸增加，從1.22%增加到1.47%再到1.59%；而在果實中，連翹苷的含量變化不大，從0.27%增到0.36%再回落到0.33%。同時可以明顯看到，從8到10月份中，連翹葉中的連翹苷含量(平均值1.43%)顯著高于果實中(平均值0.32%)。

圖1 葉和果實中連翹苷的動態變化

圖2為連翹酯苷A的動態變化趨勢，可以看出在8-10月份中，葉中連翹酯苷A的含量穩步增加，從3.73%到4.26%再到4.85%；在連翹果實中，連翹酯苷A的含量從8月份的3.71%增加到9月份的4.13%，然后10月份稍微下降到4.08%。同時可以看到，從8到10月份中，連翹葉中的連翹酯苷A含量(平均值4.18%)稍微高于果實中(平均值3.97%)，二者差別不是很大，特別是在8月份的時候。

圖2 葉和果實中連翹酯苷A的動態變化

2.2 同一部位連翹苷和連翹酯苷A比例動態變化研究

設定連翹苷含量為1，用對應月份同一部位連翹酯苷A含量相對于連翹苷的比例作圖，分別獲得連翹葉中連翹苷和連翹酯苷A比例動態變化(圖3)，以及連翹果實中連翹苷和連翹酯苷A比例動態變化(圖4)。從連翹葉中可以明顯看出(圖3)，從8到10月份，連翹酯苷A比例相對穩定，為3倍左右；而在連翹果實中(圖4)，連翹酯苷A比例有所下降，從8月份的13.74倍下降到10月份的12.36，但下降幅度不明顯。

圖3 連翹葉中連翹苷和連翹酯苷A比例動態變化

圖4 連翹果實中連翹苷和連翹酯苷A比例動態變化

3 討論

研究采用高效液相色譜法，測定商洛地區種植的不同月份的連翹果實和葉中連翹苷和連翹脂苷A的含量。結果顯示，從8到10月期間，連翹苷和連翹酯苷A在葉中的積累逐步增加，而這二者在連翹果實中含量則變化不大，這與李衛健[4]、王進明[6]等人結果相一致。這樣的結果可能是9月份以后果實逐漸老化，有效成分積累趨于穩定，而此時葉子還在生長，有效成分積累并未停止，故建議商洛地區所種植連翹采收期應在9月份以后，這是有效成分積累穩定，也有利于藥材的質量控制。連翹葉中連翹苷的含量數倍于果實中，故也應考慮連翹葉作為入藥部位的可能性。

同時研究表明，連翹屬植物葉子與果實的成分比較相似，同時連翹葉中的其他有藥效物質，包括木質素、咖啡酰糖苷等的含量比連翹果實中高[7]，因此對于連翹葉資源的必將是較好的植物資源利用方向，同時對于連翹葉取代連翹果實入藥也是一個值得研究的問題。

筆者研究了連翹同一器官(葉或果實)中連翹苷和連翹酯苷A比例的動態變化，顯示連翹酯苷A含量是連翹苷含量的數倍，特別是在連翹果實中，連翹酯苷A是連翹苷的13倍左右。由于中藥藥效是多種有效成分之間相互作用的結果，考慮到藥材中不同有效成分之間的量及其比例會影響藥材藥效的好壞[4]，所以對連翹有效成分含量及各成分間比例的研究，也應是連翹質量控制的指標。而傳統中醫使用連翹果實而不是葉入藥，可能跟連翹酯苷A與連翹苷的比例有關系，同時相關的問題值得深入研究。