穿心蓮內酯超聲提取工藝研究

趙詠梅,齊建紅,黃 童

(西安文理學院 生物與環境工程學院，陜西 西安 710065)

穿心蓮(Andrographispaniculata(Bumf.) Nees)為爵床科穿心蓮屬一年生草本植物[1]，又叫做穿心蓮乙素，味極苦，性寒，有清熱解毒，消炎止痛之功效[2]。穿心蓮原產于印度，在我國分布廣，產量大，主要分布于廣西、 福建、安徽、四川等地[3]。從穿心蓮屬植物中分離得到的化合物主要是二萜內酯類和黃酮類[4]。實驗通過正交試驗設計采用超聲波提取法對穿心蓮中穿心蓮內酯成分的提取工藝進行了優化研究，為穿心蓮的進一步開發利用提供了科學的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器設備

1.1.1 植物材料 穿心蓮全草由西安鴻生生物技術有限公司提供，穿心蓮內酯標準品含量為95%，購于西安市藥檢所。

1.1.2 實驗儀器 SPD-10Avp高效液相色譜儀(日本島津公司)、KQ-100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、FLB-500A型萬能高速粉碎機(上海菲力博食品機械有限公司)、SENCO R系列旋轉蒸發器(上海申生科技有限公司)、SHB-ⅢA循環水式真空泵(西安禾普生物科技有限公司)等。

1.2 實驗方法

1.2.1 正交實驗設計 選取乙醇濃度(A)、接料量(B)、超聲時間(C)三個因素按照L9(34)正交表進行試驗進行正交試驗，確定穿心蓮內酯的最佳提取工藝(見表1)。

表1 因素與水平

1.2.2 穿心蓮內酯的超聲提取 稱取一定量的穿心蓮藥材粉碎，于60目過篩。稱取穿心蓮粉末20g于燒杯中，按照正交實驗條件加入相應濃度的一定倍量的乙醇,用保鮮膜封口放入超聲清洗器中進行超聲提取，趁熱將提取液真空抽濾，將濾液放入恒溫水浴鍋中微熱，然后秤取5 g活性炭粉末加入濾液中；用磁力攪拌器對濾液進行攪拌1 h；攪拌結束后再過濾一次，留濾液。將濾液濃縮，濃縮后的粘稠液倒入稱好重量的塑料盤內在恒溫水浴鍋上蒸發一定程度后，于50℃微波干燥儀中進行微波干燥10 min左右，既得穿心蓮內酯粗品。

1.2.3 穿心蓮內酯含量檢測 主要有:

(1)色譜條件：檢測穿心蓮內脂含量的色譜條件為Diamons.l C18色譜柱, 流動相：甲醇∶水=52∶48，流速：1.0 mL·min-1，檢測波長：225 nm，柱溫：室溫，進樣量：20 μL。

(2)標品溶液的配制：稱取穿心蓮內酯標品7.9 mg于50 mL容量瓶中，加入色譜甲醇超聲溶3 min，待溶液冷卻后定容，再用移液管取2 mL溶液至10 mL容量瓶中，加入流動相(甲醇∶水=52∶45)稀釋定容，搖勻后備用。

(3)樣品含量的檢測： 稱取1.2.2項下的樣品10 mg于50 mL容量瓶中，并用適量色譜甲醇超聲溶解3 min左右，待溶液冷卻后定容。用移液管吸取1 mL溶液至10 mL容量瓶中，再用52%甲醇流動相稀釋定容。按上述色譜條件進行測定。

樣品含量=(樣品峰面積×標品濃度)/(標品峰面積×樣品濃度)×標品含量×100%

收率= 提取物質量/藥材質量

回收率=(提取得到的樣品量×樣品含量)/(藥材用量×藥材含量)×100%

2 結果與分析

2.1 HPLC檢測結果

以濃度(C)為橫坐標，峰面積(A)為縱坐標，繪制標標準曲線，色譜圖見圖1，圖2。

圖1 穿心蓮內酯標品色譜

圖2 穿心蓮標品色譜

圖1顯示，穿心蓮內酯標品在前十分鐘內出現的雜質峰很少，峰也較低，在11 min左右時出現主峰，峰高為34 676.54，峰面積為1 027 406.375。

圖2顯示，穿心蓮樣品雜質峰較多但都比較小，并且在11 min左右出現了主峰，峰高6 694.750，峰面積為2 028 480 297。樣品中主峰相對于標品中的主峰比較低。

2.2 正交實驗優選穿心蓮內酯提取工藝

表2 L9(34)正交試驗設計結果

從表2正交數據分析可知，影響穿心蓮內酯提取效果因素的主次順序為：乙醇濃度>超聲時間>接料量。實驗的最優組合水平組合為A3B1C1，即乙醇濃度為90%，溶劑體積為藥材的8倍量，超聲提取時間為10 min，穿心蓮內酯的含量為23.7%。得出乙醇濃度的影響最為顯著，依次超聲時間和接料量。

3 討論

穿心蓮內酯是存在于中草藥植物穿心蓮中的一種應用非常廣泛的酯類化合物。現有的藥理學研究已經證實穿心蓮內酯具有抗病毒、抗菌、抗腫瘤作用和免疫作用等作用。在我國，穿心蓮內酯在醫學方面的應用十分廣泛，在動物醫學方面的臨床實驗發現其在動物體內吸收快、藥效長且生物利用度非常高[5,6]。更重要的是，目前并未發現其在動物體內有明顯的毒副作用，這些優點與其他藥物相比有更好的治療效果。 實驗采用超聲提取法對穿心蓮中穿心蓮內酯進行了提取工藝優化研究，結果表明，影響穿心蓮中穿心蓮內酯的最佳提取工藝因素為乙醇濃度>超聲時間>接料量。實驗的最優組合水平組合為A3B1C1，即乙醇濃度為90%，溶劑體積為藥材的8倍量，超聲提取時間為10 min，穿心蓮內酯的含量為23.7%。通過優化提取工藝研究，為穿心蓮的進一步開發利用提供了科學的理論依據。