我國二斑葉螨抗藥性現狀及抗性基因突變頻率檢測

徐丹丹 何艷艷 張友軍 謝文 吳青君 王少麗

目的與意義： 二斑葉螨（Tetranychus urticae Koch.）是一種世界性的重要農業害螨，其寄主范圍非常廣泛，可為害包括蔬菜、瓜類、果樹、花卉、棉花、玉米等超過1 000種寄主植物。化學防治是二斑葉螨綜合治理的重要措施，但生產上常存在施藥隨意、不科學選藥等問題，導致二斑葉螨對多種化學藥劑均產生抗藥性。靶標抗性是害蟲抗藥性產生的重要抗性機制之一，研究已經證實靶標基因發生點突變可以導致葉螨產生抗藥性。因此，篩選對二斑葉螨田間種群的高效低毒殺螨劑、對田間種群進行抗性相關基因的突變檢測等，可為二斑葉螨的化學防控提供選藥依據，也可明確我國二斑葉螨種群對不同化學藥劑產生抗藥性的分子基礎。

材料與方法： 首先通過瓊脂浸葉法測定殺蟲殺螨劑對二斑葉螨室內敏感種群的毒力，建立二斑葉螨雌成螨對11種化學藥劑的敏感基線，隨后監測了采集自哈爾濱、北京密云、北京順義、北京昌平、北京海淀、浙江寧波和海南吉陽等7個二斑葉螨田間種群對11種殺蟲殺螨劑的抗藥性水平。藥劑對二斑葉螨的毒力測定所得原始數據采用Polo Plus 2.0軟件進行分析。抗性倍數=田間種群的LC50值/室內敏感種群的LC50值。抗性基因的突變頻率則采用等位基因特異性PCR技術（PCR amplification of specific allele， PASA）、酶切擴增多態性序標記技術（Cleaved amplified polymorphic sequence，CAPS）以及PCR產物直接測序等分子檢測技術進行檢測獲得，并計算不同基因的點突變頻率。

結果與分析：生物測定結果表明，乙唑螨腈、丁氟螨酯、阿維菌素、腈吡螨酯和溴蟲腈對二斑葉螨室內敏感種群雌成螨的毒力較高（LC50<1 mg·L-1），其次為聯苯肼酯、乙基多殺菌素和丙溴磷（LC50處于10～100 mg·L-1），聯苯菊酯和噠螨靈的LC50約為1 000 mg·L-1，而螺螨酯對雌成螨無效。對7個不同二斑葉螨田間種群進行測定，發現不同地區二斑葉螨種群抗藥性不同，同一種群不同藥劑之間抗藥性也不同。與敏感種群相比，所有測試田間種群對阿維菌素均表現為高抗到極高抗性水平，抗性倍數為316.67～1 809.51倍。對于新型殺螨劑，所有7個田間種群對乙唑螨腈和乙基多殺菌素均表現為敏感度下降或敏感水平，而對腈吡螨酯表現為中等水平抗性，抗性倍數為10.15～26.07倍;對聯苯肼酯的抗性倍數在0.58～10.19倍之間，其中北京密云種群對聯苯肼酯表現中等抗性水平（10.19倍）;北京順義和昌平種群對蟲螨腈為敏感狀態，而北京密云種群則表現為極高抗性水平，另外4個種群的抗性倍數在6.14～18.97倍之間。除北京順義和海南吉陽2種群外，其余二斑葉螨田間種群對丁氟螨酯表現為中等或高水平抗性，抗性倍數為11.91～72.62倍。測試二斑葉螨對傳統殺螨劑噠螨靈、聯苯菊酯和丙溴磷的抗性倍數低于5倍，但LC50值很高;而螺螨酯屬于殺卵劑，對二斑葉螨雌成螨基本無效，LC50均>5 000 mg·L-1。通過多種分子檢測技術檢測了不同二斑葉螨種群中GluCls（與阿維菌素抗性相關）、VGSC（菊酯類殺蟲劑相關）、Ace（有機磷殺蟲劑抗性相關）和Cytb（聯苯肼酯抗性相關）基因上點突變的突變頻率。在二斑葉螨敏感種群中，未檢測到G314D和G326E點突變，7個田間種群中G314D和G326E的突變頻率處于28.33%～63.64%和0%～95%，其中北京海淀種群中G326E位點的突變頻率最高，達95%。二斑葉螨室內敏感種群中，G119S和A201S位點的突變頻率分別為50%和0%，田間種群該兩位點的突變頻率為33.33%～56.67%和5.00%～43.33%，其中G119S突變頻率在北京海淀種群中最高，而A201S突變頻率在北京昌平種群中最高。在所有種群中，均未檢測到L1024位點的突變;室內敏感種群中A1215D位點突變頻率為25%，田間種群A1215D的突變頻率為76.67%（海南吉陽）～98.33%（北京順義、北京昌平、北京海淀和黑龍江哈爾濱）;F1538I位點在敏感種群中突變頻率為81.67%，而浙江寧波種群中該突變位點突變頻率最低（25%），而在海南吉陽種群中該位點突變頻率高達100%。在所有測試種群中，未檢測到Cytb基因的任何突變。

結 論： 所有測試二斑葉螨田間種群對阿維菌素均表現高抗或極高抗性水平，說明我國二斑葉螨種群已普遍對阿維菌素產生高抗性，應暫停阿維菌素對二斑葉螨的防控;對聯苯菊酯、噠螨靈等傳統殺蟲劑雖然抗性倍數很低，但其LC50值較高，也不適合用于二斑葉螨的化學防治;大部分測試種群對乙唑螨腈、腈吡螨酯、聯苯肼酯、乙基多殺菌素、蟲螨腈等新型殺螨劑表現為敏感、低抗或中抗水平，表明這些殺螨劑可作為防治田間二斑葉螨的候選藥劑，建議輪換使用。二斑葉螨測試種群中G314D位點的突變頻率最高為95%，該位點的突變頻率與其對阿維菌素的抗性水平呈正相關，而G326E位點在二斑葉螨對阿維菌素抗藥性發展中的貢獻比較復雜;A1215D和F1538I兩位點的高突變頻率，也解釋了葉螨田間種群對聯苯菊酯具有很高的LC50值的原因，兩突變位點對聯苯菊酯高抗性發展和形成均有一定的貢獻;G119S和A201S這2個突變在田間種群中呈現不同的突變頻率。由此揭示了我國二斑葉螨田間種群對化學藥劑抗性發展的分子基礎。

中國農業科學院蔬菜花卉研究所 北京 100081

Pesticide Biochemistry and Physiology，2018，150： 89-96.

（原文1圖3表，46條參考文獻）