刺梨原汁酒總糖的含量測定

楊春艷 葉玉華 鄒蘭

刺梨原汁酒是貴州得天獨厚的野生刺梨資源優勢，選用優質刺梨鮮果經過原料→破碎（壓榨）→發酵→分離→貯存（澄清處理）→原汁酒。刺梨具有豐富的營養成分，是藥食同源的品種之一，由其開發而得的刺梨原汁酒基本保持了原有的營養價值，而總糖含量決定了發酵程度的好壞和成品酒的品質，建立刺梨原汁酒總糖的測定方法為評價酒的品質和改進工藝關健點提供了一定的實驗依據。

儀器和試劑

TU-1901紫外分光光度計（北京普析）；賽多利斯AUY220電子天平（萬分之一）；CPA2250電子天平（十萬分之一）；TAISITE數顯電熱恒溫水浴鍋；KQ- 300VDE型雙頻數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

刺梨原汁酒6批；D-無水葡萄糖對照品（中國食品藥品檢定研究院 批號：110833-201205），其它試劑均為分析純；實驗室用水為二級純化水。

方法

刺梨原汁酒總糖的提取。精密吸取刺梨原汁酒0.5ml至250ml容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得。

最大吸收波長的確定。精密稱取18.80mg的D-無水葡萄糖對照品溶液置于100ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再精密吸取20ml至100ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密吸取1.0ml對照溶液按照蒽酮-硫酸試劑顯色方法顯色，將葡萄糖標準溶液于500～750nm范圍掃描，確定在625nm處有最大吸收。

標準曲線的制備。精密稱取D-無水葡萄糖18.80mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻 ，再精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，制得0.0376mg/ml的D-無水葡萄糖標準貯備液。精密量取葡萄糖對照品溶液0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，于25 mL比色管中，加水定容至10ml。精密加入蒽酮-硫酸溶液（精密取蒽酮0.21g，加濃硫酸溶液100ml使溶解，搖勻）5ml，搖勻，置水浴中加熱15分鐘，取出，放入冰浴中冷卻至室溫，測定得到回歸方程。

結果

最大吸收波長。葡萄糖標準溶液經蒽酮-硫酸顯色后用TU- 1901型紫外可見分光光度計在500～750nm范圍掃描。掃描結果表明：葡萄糖標準溶液均在625nm處有最大吸收，確定該波長為測定波長。

標準曲線的繪制。以D-無水葡萄糖溶液濃度為橫坐標，吸收度為縱坐標繪制標準曲，并得出回歸方程y=5.773x+0.008，R2=0.997，線性范圍為0.00752- 0.0376mg/ml，其中，y為吸收度，x為D-無水葡萄糖濃度。

精密度實驗。精密吸取樣品試液1份，按2.1的方法制得供試品溶液，各1.0ml置25ml比色管中，按蒽酮-硫酸法制備，測試6次，相對標準偏差RSD=0.61%，結果表明精密度良好。結果見表1。

穩定性實驗。精密吸取樣品溶液0.5mL，按蒽酮-硫酸法制備，每隔20min 測定一次吸收度，連續2h 考察其穩定性，計算RSD值=0.32 %，實驗結果表明，供試品溶液在2h 內穩定。結果見表2。

重復性實驗。精密稱取同一批樣品6 份，按2.1的方法制得供試品溶液，精密吸取0.5ml，置10ml比色管中，按蒽酮-硫酸法制備，分別測定其吸收度，計算RSD 值（ n = 6） 為0. 97%，表明該方法重復性好。結果見表3。

加樣回收實驗。取同一份樣品6份，每份精密量取1.0ml，分別加入3ml濃度為0.0376mg/ml的葡萄糖標準品，按照蒽酮-硫酸法處理后測定吸收值，計算回收率平均值為97.4%，本方法準確度良好。結果見表4。

總糖測定。精確稱取6批刺梨原汁酒樣品，各0.5ml，按照2.1的方法制備總糖，精密吸取樣品溶液1.0ml置25ml比色管中，按蒽酮-硫酸法制備，分別測定其吸收度，根據回歸方程，計算樣品總糖含量，結果如下表：

討論

蒽酮-硫酸法測定總糖含量， 是利用總糖在濃硫酸作用下水解生成單糖， 并迅速脫水生成羥甲基糠醛， 羥甲基糠醛與蒽酮綜合成藍色化合物， 比色該化合物顏色的深淺來計算總糖濃度的高低。該方法具有穩定、快速、簡便、重復性好等特點，可作為刺梨原汁酒總糖的測定方法。

基金項目：貴州省黔西南州科技項目，課題任務書編號：2016- 1- 22。