糖化血紅蛋白檢測方法研究與實踐

劉付湘

[摘要] 科學技術的發展帶來了糖化血紅蛋白（HbA1c）檢測方法的變革，且隨著科技的發展不斷改進。糖尿病人數的增多，引起醫藥學家對糖化血紅蛋白檢測方法的關注度逐漸提高，糖尿病血糖較高會致使葡萄糖和血紅蛋白結合，造成糖化血紅蛋白功能失常，故檢測糖化血紅蛋白具有重要的意義，使其成為了當代醫學界最重要的科學研究之一。目前，檢測糖化血紅蛋白已經成為糖尿病監控的標準診斷方法，現今經常應用在醫學上的檢測糖化血紅蛋白接近40種。該文將從檢測糖化血紅蛋白的方法及實踐情況等方面入手、分析與總結，為相關科研及醫務工作人員提供詳實、可靠的參考資料。因此，該課題的研究具有重要的實際意義。

[關鍵詞] 糖尿病;糖化血紅蛋白;檢測;研究

[中圖分類號] R446.1;R587.1 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1672-4062（2019）08（a）-0194-03

[Abstract] The development of science and technology has brought about a revolution in the detection method of glycated hemoglobin （HbA1c）， and it has been continuously improved with the development of science and technology. The increase of diabetes has caused the medical scientists to pay more attention to the detection method of glycosylated hemoglobin. The higher blood glucose of diabetes will cause the combination of glucose and hemoglobin， causing dysfunction of glycated hemoglobin， so detecting glycosylated hemoglobin has important significance. It has become one of the most important scientific studies in the contemporary medical world. At present， the detection of glycated hemoglobin has become the standard diagnostic method for diabetes monitoring， and is nowadays often used in medical detection of nearly 40 glycated hemoglobin. This article will start with， analyze and summarize the methods and practices of detecting glycated hemoglobin， and provide detailed and reliable reference materials for relevant scientific research and medical staff. Therefore， the research of this topic has important practical significance.

[Key words] Diabetes; Glycated hemoglobin; Detection; Research

隨著社會生活水平的提高，得糖尿病相關疾病的人數越來越多，糖尿病不分性別逐漸年輕化，成為影響人類身體健康的一大威脅。糖尿病目前屬于難以治愈的疾病之一，還沒有研制出可以治療痊愈的藥品、試劑，況且糖尿病可能在治療藥物催化作用下演化出其它多種并發癥，但可以通過糖化血紅蛋白檢測對糖尿病患者身體狀況進行了解與制定特定方案進行治療，糖化血紅蛋白檢測就尤為重要，其已成為了一項較為重要的醫療研究領域，且不斷取得新成果用來醫治患者造福人類。

科學技術的發展帶來了糖化血紅蛋白檢測方法的變革，且隨著科技的發展不斷改進。糖尿病人數的增多，引起醫藥學家對糖化血紅蛋白檢測方法的關注度逐漸提高，糖尿病血糖較高會致使葡萄糖和血紅蛋白結合[1]，造成糖化血紅蛋白功能失常，故檢測糖化血紅蛋白具有重要的意義，使其成為了當代醫學界最重要的科學研究之一。

該文開展了檢測糖化血紅蛋白方法研究與實踐。目前，檢測糖化血紅蛋白已經成為糖尿病監控的標準診斷方法，現今經常應用在醫學上的檢測糖化血紅蛋白接近40種，按照機理大致可以分為兩大類：①根據GHb與非GHb電荷差異，主要有離子交換法、電泳法及電聚焦法等;②根據GHb的結構特征，主要有親和色譜方法、離子捕獲方法及免疫方法等。該文將從檢測糖化血紅蛋白的方法及實踐情況等方面入手、分析與總結，為相關科研及醫務工作人員提供詳實、可靠的參考資料。因此，該課題的研究具有重要的實際及應用價值。

1 ?糖化血紅蛋白檢測的意義

正常情況下，體內包括的HbA、HbF、HbA2三者均可以稱為血紅蛋白，但成年人體內主要是HbA。對血紅蛋白進行分離時，可以提取出3種糖類成分：HbA1a、HbA1b、HbA1c，這三者一起統稱為糖化血紅蛋白。

糖化血紅蛋白是人體內紅細胞中血紅蛋白與人體內的葡萄糖經非酶促糖化緩慢轉化而來的，糖化血紅蛋白是比較穩定的，其周期與血紅蛋白細胞生命周期基本一致，周期長達3個月左右，此過程可以視作是不可逆的[2]。糖化血紅蛋白在人體內合成與紅細胞中葡萄糖濃度是相關的，當紅細胞中葡萄糖濃度比較高時，人體內轉化而來的糖化血紅蛋白含量也就比較高。

糖化血紅蛋白與人體內的血糖成正比例關系，是血紅蛋白與血糖結合的產物。血糖檢測的結果可能會受到進食食物、生活方式、醫藥品等外界因素的干擾，而糖化血紅蛋白的檢測結果受外界短期因素影響較小，檢測的結果體現了檢測時前2～3個月內的血糖情況，是評價血糖控制效果的標準。因此，糖化血紅蛋白檢測的意義[3]：①可體現血糖控制的效果;②糖化血紅蛋白相對血糖檢測比較穩定;③真實體現血糖近2～3月的平均水平;④受血紅蛋白水平影響較小。

2 ?糖化血紅蛋白檢測方法

目前，糖化血紅蛋白含量測定方法較多，常用的糖化血紅蛋白含量測定接近40種，每種方法均各有優缺點，典型的幾種方法如下。

2.1 ?離子層析法

離子層析法具有檢測精密度高、方便簡單、且可以重復測試，多種檢測方法中其精密度、準確性是最好的[4]，故此方法被廣泛應用。其檢測原理是基于血紅蛋白纈氨酸糖化后電荷的差異性，酸性液體可使糖化血紅蛋白（ GHb）及HbA顯陽性，且二者被酸性溶液中平衡過的樹脂吸附率不同，GHb吸附率低但H bA吸附率高，利用二者通過陽離子交換層吸附率不同實現檢測。

2.2 ?親和層析

親和層析法的機理是基于生物高分子可與唯一的配基進行結合，且過程是可逆的，在應用過程中雜質不被吸附，可以使得雜質得到剝離出去，然后將希望獲取的高分子重新釋放出來，可以得到較高純度的高分子物質。

2.3 ?手工微柱法

手式微柱法容易受外界因素的影響：人工洗脫不全、人工洗脫過度及部分血紅蛋白如HbF過度增多等， 都會對檢測結果造成影響，導致出現偏差。此類儀器以歐洲國家較為先進，比如DREW SCIENTIFIC公司生產的糖化血紅蛋白儀就是采用微柱法，自動化程度較高，可以進行自動篩選，不僅能夠檢測糖化血紅蛋白，還可測定血紅蛋白S（HbS）與血紅蛋白C（ HbC ）是否存在，保證了檢測結果的可靠性與準確性。另外，手工微柱法成本較低，適合于在要求檢測精度不是特別高的醫院進行普及。

2.4 ?酶法

醫學中利用酶法進行血紅蛋白的檢測，原理是果糖基纈氨酸氧化酶的反應特性，它可以與糖基化的纈氨酸或其小肽反應，產生H2O2;進一步采用辣根過氧化物酶與H2O2 的反應顯色。此方法可以在不進行總血紅蛋白測定的情況下直接通過測定HbA1c的百分比，而不需另外檢測總血紅蛋白，后面通過氧化還原反應、分解，實現測定目的。此方法對糖化血紅蛋白進行測定，整個檢測過程具有方便、精度高、簡單、抗干擾能力強、重復性好等優點，還方法適合應用于血紅蛋白測定自動化化驗與檢測儀器的制造。

2.5 ?比色法

比色分析法主要有：①氰化高鐵血紅蛋白法：該法被推薦為國際標準參考方法，具有操作便捷、速度效率高、準確度高及穩定性好的優點，但此法應用了氰化鉀（KCN），屬于劇毒物質，操作異常的情況下可能會產生其它危害;②氧合血紅蛋白測定法：此方法具有安全性高的優點，但是存在難以將高鐵血紅蛋白轉變成氧合血紅蛋白、外界要素影響大等缺點。

2.6 ?電化學分析法

電化學分析檢測法：具有速度快、自動化程度高及穩定性好等優點。此類方法主要有：①裸銀電極，采催化劑來對蛋白質氧化還原中心進行激活，促進血紅蛋白在電極表面直接轉移電子;②染料修飾玻碳電極：具有效果好、發展快及最受研究者關注的方法之一，在應用過程中大多利用三電極工作體系，無論從穩定性上還是從使用壽命上都是比較好的，是較為理想的血紅蛋白檢測方法。

3 ?糖化血紅蛋白檢測實踐應用

離子層析法，此方法被美國曾經應用于DCCT的研究，也是公認的檢測HbA1c的標準[4]。應用此類檢測方法制造儀器的公司較多：如TOSOH公司研制的糖化血紅蛋白分析儀，被應用于糖尿病疾病控制與試驗研究，其最先進的糖化血紅蛋白分析儀，操作簡單、效率速度高、維護容易，且測的GHb數據精準度較高;另外運用離子交換HPLC方法的儀器有日本愛科來HA-8160、Bio-Rad等。但當HbF>15%，利用日本森村AIc2.2Pius進行糖化血紅蛋白的檢測，HbAIc檢測值會比實際低點[5]。

親和層析法，此類方法研制的糖化血紅蛋白分析儀也較多，如英國DREW SC IENT IFIC公司研制的快速床邊糖化血紅蛋白儀，其是利用硼酸親和層析法，可在4 min時間內實現對糖化血紅蛋白的檢測，可通過醫生提供實時的檢測結果，幫助醫生給患者在第一時間進行診療及制定科學的醫治方案，對一些急診特別合適，特別對于嬰幼兒及老年患者更是具有優勢。

手工微柱法，此類儀器以歐洲國家較為先進，比如DREW SCIENTIFIC公司[6]生產的糖化血紅蛋白儀就是采用微柱法，自動化程度較高，可以進行自動篩選，不僅能夠檢測糖化血紅蛋白外，還可測定血紅蛋白S（HbS）與血紅蛋白C（HbC）是否存在，保證了檢測結果的可靠性與準確性[7]。目前，國內采用的手工微柱法，由于技術上及操作人員素質上的差距，且因易受外部干擾因素干擾，誤差較大，還需要持續改進。

酶法，利用酶法制造的糖化血紅蛋白檢測試劑盒市面上也較多，已研制出了具有快速、大批量、經濟等特點的檢測試劑[8]，有利于在各大醫院進行大規模臨床推廣與應用。

比色法及電化學分析法也有的醫院應用，但因它們操作繁瑣且穩定性不太好，應用情況并不太理想，在此就不詳細敘述。

4 ?結論

該文將從檢測糖化血紅蛋白的方法及實踐情況等方面入手、分析與總結，為相關科研及醫務工作人員提供可靠信息。血紅蛋白作為人體內較為重要的物質，其濃度從各個方面影響人體的健康，其指標反應了人體多方面的狀態特征，故血紅蛋白含量的準確檢測是一項非常重要的工作。目前，糖化血紅蛋白含量測定方法較多，每種方法均各有優缺點。

該文基于血紅蛋白檢測方法與實踐應用，從多方面進行分析、思考與總結，為科研工作者及醫院相關工作人員提供詳實、可靠的參考資料，提出了部分科學的建議。因此，該課題的研究具有重要的實際意義。

[參考文獻]

[1] ?黃宗利，甘志榮，蘭萬，等.糖化血紅蛋白的檢測方法[J].分析化學進展，2017（7）：163-170.

[2] ?蔡瑜，溫和.糖化血紅蛋白檢測方法研究進展[J].國際檢驗醫學雜志，2012（1）：194-196.

[3] ?黃穎，樊希承.糖化血紅蛋白幾種常見檢測方[J].臨床和實驗醫學雜志，2009（2）：126-127.

[4] ?劉德軍，彭旭東，王偉夫.糖化血紅蛋白檢測方法與標準化[J].中國臨床保健雜志，2014（12）：664-666.

[5] ?黃奔.糖化血紅蛋白檢測與臨床應用新進展[J].臨床檢驗雜志，2018（1）：168-170.

[6] ?吳菲. 糖化血紅蛋白檢測的影響因素[J].世界最新醫學信息文摘，2016（8）：162-164.

[7] ?邊衛，王成. 糖化血紅蛋白用于篩查糖尿病的意義分析[J].中國社區醫師，2019（2）：132-135.

[8] ?劉仲棟，李麗艷. 糖化血紅蛋白在糖尿病中的臨床應用價值[J].醫學理論與實踐，2018（7）：2086-2088.

（收稿日期：2019-05-08）