安神補心片的薄層色譜鑒別

劉 莉，李婷婷，王 欣，孔衛東

（四川省成都市食品藥品檢驗研究院，四川 成都 610045）

安神補心片處方來源于國家標準［1］，由丹參、石菖蒲、五味子（蒸）、首烏藤、墨旱蓮、合歡皮、菟絲子、女貞子、地黃、珍珠母10味中藥組方，臨床用于陰血不足、虛火內擾所致的心悸失眠，頭暈耳鳴。安神補心片現有的質量標準較低，特別是薄層色譜鑒別僅涉及五味子、首烏藤、女貞子，且女貞子鑒別項中使用齊墩果酸作為指標成分，存在較大爭議。本研究中以安神補心片為研究對象，對原標準中的五味子、首烏藤的薄層色譜鑒別進行了完善，新增了石菖蒲、菟絲子的薄層色譜鑒別，特別對其中女貞子薄層色譜鑒別存在的問題進行了改進，完善了安神補心片的質量標準。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

4型薄層色譜自動點樣儀、薄層色譜成像及文件系統（瑞士卡瑪公司）；AEG220型電子天平（感量為0.1mg，日本島津公司）；SK250H型超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）；HH-4型數顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；K-350型半自動凱氏定氮儀（瑞士Buchi公司）。

1.2 試藥

石菖蒲對照藥材（批號為121098-201105），菟絲子對照藥材（批號為121232-201102），首烏藤對照藥材（批號為120939-201507），五味子對照藥材（批號為120922-201309），女貞子對照藥材（批號為111926-201203），特女貞苷對照品（批號為 111926-201203，含量為96.4%），五味子甲素標準品（批號為111764-201714，含量為99.3%），大黃素甲醚（批號為110758-201616，含量為 99.0% ），β -細辛醚對照品（批號為112018-201601，含量為96.8%），均由中國食品藥品檢定研究院提供；安神補心片（Ⅰ，糖衣片，太極集團四川綿陽制藥有限公司，批號為1806001；Ⅱ，薄膜衣片，太極集團四川綿陽制藥有限公司，批號為1710004，1803001；Ⅲ，薄膜衣片，吉林百姓堂藥業有限公司，批號為20161101；Ⅳ，薄膜衣片，比智高藥業有限公司，批號為20170501；Ⅴ，薄膜衣片，太極集團重慶桐君閣制藥廠有限公司，批號為18080001，18090001）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 五味子

取樣品10片，除去包衣，研細，取2 g，精密稱定，加三氯甲烷20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材0.5 g，加三氯甲烷20 mL，同法制成對照藥材溶液。再取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（2015年版《中國藥典（四部）》通則0502）試驗，吸取上述溶液各5～10μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯 -甲酸（15∶5∶1，V/V/V）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，溫度為15℃，相對濕度為50%，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點。詳見圖1 A。

2.2 首烏藤

取樣品10片，除去包衣，研細，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加無水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取首烏藤對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃素甲醚對照品適量，制成甲醇的飽和溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（2015年版《中國藥典（四部）》通則 0502）試驗，吸取上述溶液各5～10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯 -甲酸（15∶5∶1，V/V/V）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，溫度為15℃，相對濕度為50%，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光主斑點。詳見圖1 B。

圖1 五味子及首烏藤薄層色譜圖

2.3 石菖蒲

取樣品30片，研細，置蒸餾管中，加水約30 mL，搖勻，水蒸氣蒸餾，收集餾出液約50 mL置錐形瓶（預先裝入水5 mL）中，蒸餾管中殘渣備用，餾出液用石油醚（60～90℃）振搖，提取2次，每次50 mL，合并提取液，殘渣揮至近干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材1 g，加乙酸乙酯5 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。再取β-細辛醚對照品適量，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg溶液，作為對照品溶液。參照安神補心片中除石菖蒲外，取其他9味藥材組方比例和工藝制備缺石菖蒲陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得缺石菖蒲陰性對照品溶液。照薄層色譜法（2015年版《中國藥典（四部）》通則0502）試驗，吸取上述溶液各10～20 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4 ∶1，V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酸溶液，溫度為15℃，相對濕度為50%，稍干后立即置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光主斑點，陰性對照無干擾。詳見圖2 A。

2.4 菟絲子

取石菖蒲鑒別項下殘渣，離心，取上清液，用石油醚（30～60℃）50 mL，振搖提取，棄去石油醚液，水液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30 mL，水液備用，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液。另取菟絲子對照藥材1 g，加水50 mL煎煮 30 min，放冷，濾過，自“濾液用石油醚（30～60℃）50 mL”起，同法制成對照藥材溶液。參照安神補心片中除菟絲子外，取其他9味藥材組方比例和工藝制備缺菟絲子陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得缺菟絲子陰性對照品溶液。照薄層色譜法（2015年版《中國藥典（四部）》通則0502）試驗，吸取上述2種溶液各5～10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-無水甲酸-水（20∶2∶3，V/V/V）為展開劑，溫度為15℃，相對濕度為50%，展開，取出，晾干，噴以5%亞硝酸鈉60%的乙醇溶液，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。詳見圖2 B。

圖2 石菖蒲、菟絲子及女貞子薄層色譜圖

2.5 女貞子

取菟絲子鑒別項下水液，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次50 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取女貞子對照藥材1 g，加水50 mL，煎煮30 min，濾過，濾液用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次50 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取特女貞苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。參照安神補心片中除女貞子外，其他9味藥材組方比例和工藝制備缺女貞子陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得缺女貞子陰性對照品溶液。照薄層色譜法（2015 年版《中國藥典（四部）》通則 0502）試驗，吸取上述溶液各1～5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷 -甲醇 -水（13∶7∶2，V/V/V）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰，溫度為15℃，相對濕度為50%，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光主斑點，陰性對照無干擾。詳見圖2 C。

3 討論

薄層色譜法一直為藥品質量標準控制最簡單、科學且有效的檢測手段，由于其操作方便，檢測手段多樣化，在中藥材和中成藥的定性分析中應用十分廣泛。使用關鍵點在于對樣品的前處理，展開劑、顯色劑及薄層色譜板載體的選擇，故在方法學研究中需根據具體藥品制劑中藥材的使用情況，對方法進行適當地調整或改進，如調整薄層色譜展開劑系統、顯示劑的更換或選擇適合的薄層色譜載體使薄層鑒別更清晰，陰性對照無干擾，其色譜圖的重復性好［2-3］。

五味子的薄層色譜鑒別為原標準已有項目，本研究中，對原標準方法進行了驗證，但硅膠G板碘蒸氣中顯色效果不佳，斑點不清晰。參照2015年版《中國藥典》五味子藥材項下有關內容［4-6］，將薄層板由硅膠G板更換為硅膠GF254板，顯色方式由碘蒸氣顯色更換為紫外光燈（254 nm）下檢視，效果較理想，并增加了五味子對照藥材作為參考，能更好地鑒定安神補心片中的五味子，其色譜圖更加清晰、明確。

首烏藤的薄層色譜鑒別為原標準已有項目，本研究結果顯示，原展開劑展開斑點分離度不夠好，后將展開劑修訂為石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1，V/V//V）的上層溶液［4］265，883，［5-6］，可達到較好分離。同時考慮了大黃素甲醚為首烏藤的主要化學成分，故增加了大黃素甲醚對照品作為評定依據，可更明確地鑒別樣品中首烏藤主斑點。

石菖蒲的薄層色譜鑒別為新增訂內容。參考2015年版《中國藥典（一部）》石菖蒲藥材及成方制劑安神補心丸及安神補心顆粒項下石菖蒲的薄層色譜鑒別及相關文獻［4］91，882-883，［6-7］，經優化，建立了石菖蒲的薄層鑒別方法。此方法專屬性強，斑點清晰，分離效果好，穩定性及重復性均良好，陰性對照無干擾，可用于安神補心片中石菖蒲的定性鑒別。

菟絲子的薄層色譜鑒別為新增訂內容。參考2015年版《中國藥典（一部）》菟絲子藥材及成方制劑安神補心丸及安神補心顆粒項下菟絲子的薄層色譜鑒別及相關文獻［4］883，309，［7］，經優化，制訂了菟絲子的薄層鑒別方法。此方法針對性強，斑點清晰，分離效果好，穩定性及重復性均良好，陰性對照無干擾，可用于安神補心片中菟絲子的定性鑒別。

女貞子的薄層色譜鑒別為原標準收載項目，本研究結果顯示，按原標準規定方法檢驗，無法檢測出齊墩果酸斑點。故參考2015年版《中國藥典（一部）》女貞子藥材及有關文獻［4］45，［8-10］，經優化，重新建立了女貞子的薄層鑒別方法，選擇了女貞子所特有的成分特女貞苷作為參考對照品，可更明確地鑒別出樣品女貞子主斑點。此方法針對性強，斑點清晰，分離效果好，穩定性及重復性均良好，陰性對照無干擾，可用于安神補心片中女貞子的定性鑒別。

本研究中地黃、合歡皮的薄層色譜定性鑒別參考了《中國藥典》及相關文獻，經反復試驗，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上，主斑點不對應，或陰性對照有干擾。效果均不理想，仍需進一步研究。

綜上所述，在安神補心片現行質量標準的基礎上，完善了五味子、首烏藤薄層色譜鑒別，改進了女貞子薄層色譜鑒別，增加了石菖蒲、菟絲子的薄層色譜鑒別，建立的方法簡單易行、高效快捷、有效可控，為完善和提升安神補心片的質量標準提供了依據，也為辨別偽劣藥品提供了參考。