山羊不同方式和劑量接種小反芻獸疫疫苗的免疫效果

嚴斯剛 李 芳 黃小武* 韋玉慶 余 波 蘇益瓊 梁麗娟 覃周嵐 羅 生 覃萬福

1.廣西壯族自治區柳州市動物疫病預防控制中心，廣西柳州 545006；2.廣西壯族自治區鹿寨縣動物疫病預防控制中心，廣西鹿寨 545600；3.廣西壯族自治區鹿寨縣平山鎮水產畜牧獸醫站，廣西鹿寨 545612；4.廣西壯族自治區鹿寨縣鹿寨鎮水產畜牧獸醫站，廣西鹿寨 545600

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）是由副黏病毒科麻疹病毒屬中的小反芻獸疫病毒引起的急性接觸傳染病，山羊最易感，臨床表現為精神沉郁、高熱、眼鼻分泌物增多、呼吸困難、壞死性口炎、腸炎和鼻炎等癥狀，死亡率高達70%～80%[1]。我國將其列為一類動物疫病。2013年11月底，PPR再次傳入我國并不斷蔓延，截至2015年8月，共有22個省（市、自治區）發生271起PPR疫情，累計3.7萬只羊發病、1.7萬只羊死亡，對養羊業造成巨大經濟損失[2]。對羊群接種疫苗是預防該病發生和流行最為有效的方法之一。筆者以不同年齡大小的山羊為試驗對象，采用不同方式和不同劑量接種小反芻獸疫弱毒疫苗，以阻斷酶聯免疫吸附方法檢測山羊抗體水平，考察不同方式和不同劑量接種PPR疫苗的免疫效果，為生產中PPR免疫程序的合理制定提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗疫苗

小反芻獸疫弱毒疫苗，新疆天康畜牧生物技術股份有限公司生產，規格為50頭份/瓶，批號為2016044-2，每頭份疫苗含有的小反芻獸疫弱毒病毒至少為1×103TCID50。按瓶簽注明頭份，用滅菌生理鹽水將疫苗稀釋至每毫升含有1頭份，充分混合均勻，冷藏保存備用，稀釋后的疫苗在3 h內用完。

1.2 診斷試劑

小反芻獸疫抗體ELISA檢測試劑盒，購自北京勤邦生物技術有限公司，批號為20170802。

1.3 血清樣品

1）不同免疫劑量試驗組。選取1.5～3月齡、未接種過小反芻獸疫疫苗、臨床檢查健康、在同一養殖場飼養的本地山羊20只，隨機分為A、B 2個組，每組10只，分別頸部皮下注射疫苗1.0 mL/只和2.0 mL/只，做好標識，在未改變原有條件下飼養。分別于接種疫苗后第28、120天采集血樣，分離血清不少于1 mL/只，-20℃以下保存備檢。

2）不同接種方式試驗組。選取2～4月齡、未接種過小反芻獸疫疫苗、臨床檢查健康、在同一養殖場飼養的本地山羊20只，隨機分為C、D 2個組，每組10只，C組皮下注射疫苗1 mL/只，B組肌肉注射疫苗1 mL/只，做好標識，在未改變原有條件下飼養。分別于接種疫苗后第28、120、180天采集血樣，分離血清不少于1 mL/只，-20℃以下保存備檢。

1.4 抗體檢測

具體操作步驟按試劑盒說明書進行。以D450nm值為判定標準。正常試驗情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。按照公式計算阻斷率（PI）：PI=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100%。根據PI進行結果判定：PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性。

2 結果與分析

2.1 不同接種劑量的免疫抗體水平

由表1和表2可知，山羊在接種小反芻獸疫弱毒疫苗后的第28天時，A、B 2組均產生了較高水平的免疫抗體，陽性率達90%，從第28天到第120天，A、B 2組的山羊免疫抗體陽性率和PI平均值呈上升態勢，PI離散度呈下降趨勢，2組間山羊免疫結果差異不明顯（P＞0.05）。

2.2 不同接種方式的免疫抗體檢測情況

由表3、表4和表5可知，山羊在接種小反芻獸疫弱毒疫苗后的第28天，無論是皮下注射還是肌肉注射均產生了較高水平的免疫抗體，陽性率均達80%。從第28天到第120天C、D 2組的山羊免疫抗體陽性率和PI平均值呈上升態勢，PI離散度呈下降趨勢，C、D 2組間免疫效果差異不明顯（P＞0.05）。第180天時，皮下注射組免疫抗體陽性率和PI平均值仍維持在較高水平，PI離散度上升了4.75個百分點；肌肉注射組免疫抗體陽性率和PI平均值呈明顯下降趨勢，陽性率下降了40個百分點，PI離散度上升了15.42個百分點，C、D 2組間免疫效果存在極顯著差異（P＜0.01）。

表1 不同接種劑量第28天免疫抗體檢測結果

表2 不同接種劑量第120天免疫抗體檢測結果

表3 不同接種方式第28天免疫抗體檢測結果

表4 不同接種方式第120天免疫抗體檢測結果

表5 不同接種方式第180天免疫抗體檢測結果

3 討論

PPR嚴重威脅我國的動物衛生安全和畜牧業發展，以疫苗接種為主的綜合技術應用是防控該病的有效措施，而免疫方案的完善是當前防控PPR的重要工作內容。我國各地防疫條件存在差異，制定適宜當地生產實際的免疫程序是保障當地羊養殖生產安全的必要措施。據統計，2018年柳州市全年山羊存欄18.96萬只，出欄25.05萬只，以小規模自繁自養本地黑山羊為主。山羊養殖成為柳州當地農民脫貧致富的重要途徑之一。因此，本研究對切實提高免疫質量以及有效預防控制疫情發生有著重要的現實意義。

不同免疫劑量試驗結構表明，皮下注射1個或2個免疫劑量疫苗均獲得良好的免疫效果，2組間免疫效果差異不明顯（P＞0.05），但后者劑量增加了1倍，這與郝玉清等[3]的研究結果基本一致。柳州地處中亞熱帶向南亞帶過渡的季風氣候帶，夏季炎熱，雖然小反芻獸疫弱毒疫苗對熱敏感，但本次試驗說明，疫苗經過省、市、縣三級冷鏈環節儲存和配送到基層后，其單位病毒含量沒有明顯下降，仍然可以刺激機體產生堅強免疫力，按照1個免疫劑量接種疫苗完全可以達到預期的免疫效力水平，無需加大劑量。

郝玉清等[3]研究報道，山羊頸部皮下注射和肌肉注射1倍量PPR疫苗后7 d和14 d分別進行檢測，2組山羊免疫后7 d的免疫抗體陽性率分別為90%、80%，免疫后14 d免疫抗體陽性率均為100%。本試驗檢測結果顯示，皮下注射和肌肉注射PPR疫苗后，在第28天和第120天這2個監測時間點的免疫抗體陽性率完全一致，分別為80%和100%，第28天和第120天時，2組間免疫效果差異不明顯（P＞0.05）；第180天時兩者免疫抗體陽性率分別為60%和100%，PI離散度分別為19.29%和31.50%，2組間免疫效果存在極顯著差異（P＜0.01）。本試驗結果說明，山羊采用皮下注射和肌肉注射2種方式接種小反芻獸疫弱毒疫苗后均能獲得一定水平的免疫效力，前者高免疫抗體水平持續期更長、免疫效果優于后者。可見，在給動物接種疫苗時，嚴格按照說明書規定的途經接種是很重要的。不同疫苗具有不同的免疫學特性，隨意改變其接種方式容易出現免疫效果差或免疫失敗現象。