耐寒豐花月季組織培養的研究

唐 銘 ，樸秀吉 ，劉 霞 ，許永華 ，王化冰 ，樸蓮玉

（1.吉林省農作物新品種引育中心；2.吉林農業大學中藥材學院，吉林長春130000）

耐寒豐花月季是現代種月季類之一[1]。耐寒、抗旱、耐高溫，適應性極強[2,3]。該品種觀賞價值高，廣泛用于城市環境綠化中，在園藝中應用價值高。該品種高度不超過60cm，扎根深度1m以上，花色不易受溫度高低影響，不變色[4]。吉林省氣候寒冷，但耐寒豐花月季可露地越冬且可粗放管理[5,6]。由于現有數量較少，期望通過組織培養方式獲得大量苗木，滿足園藝應用。

1 材料方法

1.1 試驗材料

吉林農業大學實驗基地保存耐寒豐花月季。

1.2 試劑材料

MS培養基、1/2MS培養基 (上海伊卡試劑有限公司)，2，4-D、6-BA、NAA（阿拉丁化學有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 外植體消毒選取幼嫩帶腋的芽莖段作為接種外植體，洗滌劑處理干凈后流水沖洗30min；然后將外植體放置于消毒處理后的培養皿中。在超凈工作臺上，75%的酒精浸泡30s，然后0.1%升汞溶液浸泡8min，無菌水反復沖洗10次。消毒處理后，接種到初代培養基上。

1.3.2 初代培養 將消毒處理后莖段切成2～3cm的小段，選取MS培養基為基本培養基，培養基激素組合見表1，并添加蔗糖30g/L、瓊脂 7g/L、pH 值調至 5.8，每瓶接種1塊，接種10瓶，重復4次進行初代培養。培養溫度為23℃，光照強度為2000 Lux，光照時間為12 h/d。30d后觀察不定芽誘導情況，統計萌動率并篩選出最適培養基。

表1 初代培養基的設計 （mg/L）

1.3.3 繼代培養 培養60 d后切割誘導出的芽，去除掉老化組織，接種到繼代培養基中。每瓶接種1塊，30d繼代1次。以MS培養基為基本培養基，添加0.7%的瓊脂，30 g/L的蔗糖，pH值調至5.8，添加不同激素組合，見表2。培養條件同初代培養條件相同。30d后計算增殖系數，測量芽苗平均高度，觀察芽生長情況。

植物組培增殖系數=瓶苗在一個周期內形成的有效芽數/接種芽數

表2 繼代培養基的設計 （mg/L）

1.3.4 生根培養 將健壯無根幼苗接種到生根培養基中誘導生根，生根基本培養基為2種：MS培養基、1/2MS培養基，添加0.7%的瓊脂，30g/L的蔗糖，pH值調至5.8，添加不同濃度的NAA。培養條件：溫度23℃，相對濕度60%～70%，光照2500 lx，光周期為16h光照/8h黑暗[7]。14d后觀察生根情況，30d后統計生根率。

1.4 統計方法

采用SPSS和Excel軟件對數據進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 初代培養

培養9d后腋芽開始膨大萌動并不斷生長。從表3可知，不同激素配比濃度對芽萌動影響差異明顯，前5種濃度配方均可使芽萌動，但萌動率不同且差異極顯著，培養基中有愈傷組織產生。當2,4-D濃度為0.02mg/L，6-BA濃度為2.0 mg/L、NAA濃度為0.1 mg/L時，萌動率最高，芽苗健壯，葉色深綠。

2.2 繼代培養

為了獲得更多幼苗，將芽移至繼代培養基中培養，接種8d后，芽開始不斷增殖，結果見表4。不同濃度的2,4-D，6-BA，NAA組合對芽的誘導和增殖存在一定差異。濃度較低的6-BA可以促進芽的發生，隨著濃度增加，增殖系數上升，但玻璃化程度加重[8]。當6-BA濃度達到3.0mg/L時，增殖系數最高，但玻璃化程度最重。在6種處理中，處理6增殖系數最高，但長勢差，玻璃化重；處理4雖然增殖系數不是最高，但長勢較好，玻璃化現象較少，綜上所述，處理4為繼代培養最佳培養基。

2.3 生根培養

將繼代增殖的無根幼苗接種到生根培養基，15d后根點顯現并不斷生長，30d后長成粗壯的根，獲得再生植株。根據表5可知，培養基類型對根的數目及形態控制上影響較大，在MS培養基中，根數量較少且形態細弱；在1/2MS培養基中，根數量較多且形態粗壯。不同濃度的NAA對根的數目影響較大。當NAA的濃度為0.1 mg/L時，根的平均數目較少，隨著NAA濃度增高，達到1.0 mg/L時，根的數目提高。培養條件為1/2MS+NAA1.0 mg/L時，根平均數目最多，長度最長，形態較好。由此可知，最適生根培養基為1/2MS+NAA1.0 mg/L，生根率為100%。

表3 不同培養基對芽萌動及生長的影響

表4 不同培養基對芽的增殖影響

3 討論

吉林省地區氣候寒冷、冬季氣溫極低，大多數月季品種無法越冬，園林應用受到氣候限制。本試驗所選用的耐寒豐花月季花期長、花色艷麗且具有優良的耐寒性狀，栽培管理較為容易[9]。月季通常的無性繁殖方式為扦插繁殖，但在實際扦插生產過程中，易受月季線蟲感染，且難以防治[10]。該試驗建立了耐寒豐花月季的直接分化快速繁殖途徑，為其產業化生產奠定基礎[11]。