丹參無糖配方顆粒制備工藝研究及其質(zhì)量評(píng)價(jià)

李筱玲，鄧寒霜，趙月梅，牛靈霄

(商洛學(xué)院 生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院，陜西商洛 726000)

丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根及根莖[1]，主產(chǎn)于陜西、安徽、山西、河北、四川、江蘇等地，具有活血通絡(luò)、祛瘀止痛、涼血消癰、清心除煩等功效，常用作于治療心絞痛、冠心病及胸腹刺痛、經(jīng)閉痛經(jīng)等病癥，入藥歷史悠久[2-4]。丹參的主要化學(xué)成分可分為兩類，一是脂溶性的丹參酮類化合物，主要有丹參酮ⅡA、丹參酮Ⅰ和隱丹參酮等；二是水溶性的丹酚酸類成分，主要有丹酚酸B、原兒茶醛、丹參素等[5,6]。丹參酮ⅡA具有抗腫瘤、抗氧化、抗凝血及抗血栓等作用，是治療冠心病的主要有效成分之一；丹酚酸B、丹參素具有抗心肌缺血、缺氧等活性，臨床用途十分廣泛[7-9]。

中藥配方顆粒是以傳統(tǒng)中藥為原料，經(jīng)提取、濃縮、制粒等工藝，制成的一種統(tǒng)一規(guī)格、統(tǒng)一劑量、統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的新型配方用藥，是由單味中藥飲片制成的、供中醫(yī)臨床配方用的顆粒。相比于傳統(tǒng)中藥，中藥配方顆粒制劑具有服用方便、易于攜帶，質(zhì)量規(guī)格統(tǒng)一，便于保管、存放，臨床使用組合方便快捷，靈活多變等優(yōu)勢(shì)[10-12]。

中藥顆粒劑按照是否添加蔗糖為輔料，可以分為含糖顆粒和無糖顆粒兩類。由于蔗糖具高生物活性，易誘發(fā)胃炎、齲齒、糖尿病及肥胖等病癥，含糖顆粒不宜用于年老及禁糖患者。無糖顆粒是一種新型的中藥顆粒劑，擴(kuò)大了顆粒劑的適應(yīng)范圍，可解除糖尿病患者及糖耐量不足患者的用藥限制[13-16]。本課題旨在遵循傳統(tǒng)中醫(yī)用藥理論、確保藥材有效成分得以保留的前提下，探索丹參無糖配方顆粒的最優(yōu)制備工藝，以期為進(jìn)一步開發(fā)丹參藥材資源奠定一定的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥材與藥品 丹參，購自陜西天士力植物藥業(yè)有限公司，經(jīng)商洛學(xué)院執(zhí)業(yè)藥師李筱玲鑒定為唇形科鼠尾草屬植物丹參(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根及根莖；丹參酮ⅡA對(duì)照品(批號(hào)：568-72-9)、丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào)：115939-25-8)，購自北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司；可溶性淀粉(AR，山東德彥化工有限公司)；色譜純甲醇(HPLC，F(xiàn)isher Chemical)；95%乙醇(AR，天津元澤化工貿(mào)易有限公司)；無水乙醇(AR，天津元澤化工貿(mào)易有限公司)；甲醇(AR，天津元澤化工貿(mào)易有限公司)；磷酸(AR，山東德彥化工有限公司)；純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)等。

1.1.2 儀器與設(shè)備 高效液相色譜儀(LC-20A，島津公司，具體配置為：在線脫氣機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測器)；C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm，Kromasil公司)；電子天平(BS110，賽多利斯天平公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9030A，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)；微型粉碎機(jī)(FW80，天津泰斯特儀器有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE52-99，上海亞榮生化儀器廠)等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥材前處理 取丹參藥材，除去泥土等雜質(zhì)后，剪成0.5 cm的小段，干燥備用。

1.2.2 丹參提取物的制備 主要有:

(1)水提物的制備。

取處理好的藥材100 g，加入12倍量的水，置鍋中煎煮3次，每次1.5 h，過濾，收集濾液；合并3次濾液置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至約100 mL，將濃縮后的濾液轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，置恒溫水浴鍋上，繼續(xù)濃縮至稠膏狀，控制相對(duì)密度約為1.3左右，即得[17]。

(2)醇提物的制備

將水提后的藥渣置圓底燒瓶內(nèi)，加入8倍量的95%乙醇，在80℃下加熱回流提取3次，每次1 h，過濾，收集濾液；合并3次濾液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至約100 mL，將濃縮后的濾液轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，置恒溫水浴鍋上，繼續(xù)濃縮至稠膏狀，控制相對(duì)密度約為1.3左右，即得[18-20]。

1.2.3 活性成分的含量測定[1]主要有:

(1)丹參酮類。

對(duì)照品溶液的制備取丹參酮ⅡA對(duì)照品適量，加甲醇溶解，配制成濃度為19 μg·ML-1的對(duì)照品溶液，備用。供試品溶液的制備取樣品粉末(過三號(hào)篩)約0.3g，精密稱定重量，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率140W，頻率42 kHz)30 min，取出放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.02%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；柱溫為20℃；檢測波長為270 nm。

表1 高效液相梯度洗脫程序

測定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，以丹參酮ⅡA對(duì)照品為參照，以其相應(yīng)的峰為S峰，照表2中規(guī)定，計(jì)算樣品色譜圖中隱丹參酮、丹參酮Ⅰ的相對(duì)保留時(shí)間，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5%范圍之內(nèi)；以丹參酮ⅡA的鋒面積為對(duì)照，分別乘以校正因子，計(jì)算樣品中隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的含量。相對(duì)保留時(shí)間及校正因子見表2。

表2 丹參酮類成分的相對(duì)保留時(shí)間及校正因子

(2)丹酚酸B。

對(duì)照品溶液的制備取丹酚酸B對(duì)照品適量，以甲醇-水(8:2)混合溶液溶解，制成濃度為0.201 mg·mL-1的對(duì)照品溶液，備用。

供試品溶液的制備取樣品粉末(過三號(hào)篩)約0.15 g，精密稱定重量，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-水(8:2)混合溶液50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率140 W，頻率42 kHz)30 min，取出放冷，再稱定重量，用甲醇-水(8:2)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，移至10mL量瓶中，加甲醇-水(8:2)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液(22:78)為流動(dòng)相；柱溫為20℃；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長為286 nm，進(jìn)樣量10 μL。

1.2.4 顆粒劑制備流程 將1.2.2項(xiàng)中所得全部丹參藥材水提物、醇提物浸膏合并，混合均勻，取混合浸膏適量，按表3中方法加入輔料、潤濕劑，用手不斷搓捏混勻至“手握成團(tuán)，輕壓即散”狀后，擠壓通過制粒篩，收集所得顆粒，在60 ℃下烘干，即得。

1.2.5 正交試驗(yàn)方案 以可溶性淀粉為輔料、不同濃度的乙醇溶液為潤濕劑；以輔料用量、潤濕劑用量、乙醇濃度為考察因素，以顆粒劑中有效成分含量及外觀性狀等檢查項(xiàng)目為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行3因素4水平正交試驗(yàn)。因素水平和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案見表3、表4。

表3 丹參無糖配方顆粒制備正交試驗(yàn)因素水平

表4 丹參無糖配方顆粒制備正交試驗(yàn)方案

1.2.6 顆粒劑質(zhì)量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 照1.2.3項(xiàng)中規(guī)定，對(duì)所得丹參無糖配方顆粒進(jìn)行含量測定；照《中國藥典(2015版，第四部)》中有關(guān)顆粒劑質(zhì)量評(píng)價(jià)的規(guī)定，對(duì)所得丹參無糖配方顆粒進(jìn)行粒度、溶化性、水分和干燥失重檢查；對(duì)含量測定及各項(xiàng)檢查結(jié)果進(jìn)行打分，以各項(xiàng)目得分總和為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)。其中丹參酮類成分含量占30分，丹酚酸B含量占30分；顆粒劑粒度、水分、溶化性和干燥失重的檢查結(jié)果各占10分，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下。

①含量測定項(xiàng)目，以含量最高者為滿分30分，其他組數(shù)據(jù)與最高者相比，再乘以30分，即為其分?jǐn)?shù)；

②粒度檢查項(xiàng)目，以不合格率最低者為滿分為10分，最低者與其他組數(shù)據(jù)相比，再乘以10分，即為其他組分?jǐn)?shù)；

③溶化性檢查項(xiàng)目，以全部溶化者為滿分10分，輕微渾濁8—9分，中度渾濁6—7分，重度渾濁0—5分；

④水分檢查項(xiàng)目，以含水量最低者為滿分10分，最低者與其他組數(shù)據(jù)相比，再乘以10分，即為其他組分?jǐn)?shù)；

⑤干燥失重項(xiàng)目檢查，以減失重量最低者為滿分10分，最低者與其他組數(shù)據(jù)相比，再乘以10分，即為其他組分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 丹參原藥材的含量測定

取丹參藥材適量，照1.2.3項(xiàng)中規(guī)定，分別進(jìn)行丹參酮類和丹酚酸B含量測定，記錄其色譜分析信號(hào)，如圖1-圖4所示。

圖1 丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品色譜

1 隱丹參酮 2 丹參酮Ⅰ 3 丹參酮ⅡA

圖3 丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品色譜

圖4 丹參藥材中丹酚酸B色譜

由圖1～圖4可知，丹參酮ⅡA保留時(shí)間為22.930 min、丹酚酸B的保留時(shí)間為34.731 min；供試品溶液中隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA保留時(shí)間分別為17.717 min、18.528 min和23.008 min，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.77、0.80和1.00，與藥典規(guī)定相比均末超出5%范圍，符合藥典要求；供試品溶液中丹酚酸B保留時(shí)間為34.737 min，與對(duì)準(zhǔn)品保留時(shí)間基本一致。計(jì)算得藥材中丹參酮ⅡA的含量為0.36%、隱丹參酮的含量為0.43%，丹參酮Ⅰ的含量為0.48%，三者總量為1.27%；丹酚酸B的含量為4.16%，均符合藥典要求。其中丹參酮總量達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)5倍以上，丹酚酸B含量達(dá)到藥典要求2倍以上，說明本研究所用丹參藥材質(zhì)量較好。

2.2 丹參無糖配方顆粒的質(zhì)量檢查

2.2.1 外觀性狀 如圖5所示，試驗(yàn)所得顆粒劑干燥、粒度均勻，同處理顆粒劑色澤一致，呈淺紅棕色，無吸潮、軟化、結(jié)塊、潮解等現(xiàn)象。

2.2.2 粒度、水分、干燥失重及溶化性檢查 照《中國藥典(2015版，四部)》顆粒劑相關(guān)檢查項(xiàng)目規(guī)定[21]，對(duì)不同處理所得顆粒進(jìn)行粒度、水分、干燥失重及溶化性檢查，具體結(jié)果見表5。

表5 丹參無糖配方顆粒粒度、水分、溶化性檢查結(jié)果

注：《中國藥典》規(guī)定粒度不合格率≤15%、水分≤8%、干燥失重≤2.0%，溶化性應(yīng)為全部溶解或輕微渾濁。

由表5數(shù)據(jù)可知，不同處理所得丹參無糖配方顆粒各項(xiàng)檢查指標(biāo)均符合藥典要求。

2.2.3 丹參無糖配方顆粒的含量測定 取不同處理所得顆粒劑適量，照1.2.3項(xiàng)中規(guī)定進(jìn)行含量測定，記錄色譜圖如圖5、圖6所示，具體檢測結(jié)果見表6。

1 隱丹參酮 2 丹參酮Ⅰ 3 丹參酮ⅡA

圖6 丹參無糖配方顆粒丹酚酸B色譜

由圖6、圖7及表6可知，所得各顆粒劑樣品中均含有隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA和丹酚酸B等成分，且顆粒劑與藥材色譜圖形狀基本一致，說明丹參原藥材中的有效成分已成功轉(zhuǎn)移至無糖配方顆粒中。各處理中，當(dāng)輔料用量為浸膏量5倍，乙醇濃度為75%，潤濕劑用量為輔料與浸膏總量的10%時(shí)，所得顆粒劑中丹參酮類成分含量最高，為0.628%；當(dāng)輔料用量為浸膏量5倍，乙醇濃度為60%，潤濕劑用量為輔料與浸膏總量的5%時(shí)，所得顆粒劑中丹酚酸B含量最高，為2.030%。

表6 丹參無糖配方顆粒活性成分含量測定結(jié)果

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果

將各處理所得顆粒劑按1.2.6項(xiàng)下規(guī)定進(jìn)行質(zhì)量評(píng)分，并以各項(xiàng)目得分之和作為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行正交分析，具體結(jié)果見表7、表8。

表7 丹參無糖配方顆粒制備試驗(yàn)正交分析結(jié)果

表8 丹參無糖配方顆粒制備工藝正交試驗(yàn)方差分析

由表7、表8數(shù)據(jù)分析可知，試驗(yàn)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的主次順序?yàn)镃>A>B，即輔料用量對(duì)顆粒劑質(zhì)量影響最大，其次是乙醇濃度的影響，潤濕劑用量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最小。經(jīng)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選得最佳因素水平組合為A4B2C1，即以75%的乙醇溶液為潤濕劑，潤濕劑用量為輔料與浸膏總量的10%，輔料用量為藥物浸膏量的5倍，在此條件下制得的丹參無糖配方顆粒質(zhì)量最優(yōu)。由表7可知，14號(hào)試驗(yàn)處理?xiàng)l件與本文優(yōu)選出的最優(yōu)條件完全相同，在此處理下制得的顆粒劑綜合評(píng)分在所有處理中得分最高，說明正交試驗(yàn)結(jié)果可信。

為進(jìn)一步檢驗(yàn)正交試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，本文對(duì)篩選出的最優(yōu)工藝進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果見表9。

表9 丹參無糖配方顆粒制備最優(yōu)工藝條件驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

由表9可知，驗(yàn)證試驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果與正交試驗(yàn)最優(yōu)處理結(jié)果相近，所得顆粒劑干燥、粒度均勻、色澤一致，呈淺紅棕色，無吸潮、軟化、結(jié)塊、潮解等現(xiàn)象，表明正交試驗(yàn)優(yōu)選結(jié)果可靠，所得最優(yōu)制備工藝可行，在最優(yōu)工藝下制備所得丹參無糖配方顆粒質(zhì)量較好。

3 結(jié)論與討論

中藥配方顆粒相較于傳統(tǒng)湯劑來說，具有方便服用、便于攜帶、易于調(diào)配、劑量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)；而相對(duì)于片劑來說，顆粒劑的溶解時(shí)間短、藥物溶出迅速、患者吸收快，能降低部分藥物對(duì)胃的刺激、生物利用度高。特別是無糖型顆粒，因其不含蔗糖，使得顆粒劑質(zhì)量更為穩(wěn)定，且更適合老年、兒童及糖尿病患者使用。本文在參閱部分參考文獻(xiàn)及充分預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)之上，對(duì)丹參無糖配方顆粒的制備工藝進(jìn)行了探索，得出其最佳制備工藝為：取丹參藥材提取物適量，以5倍于丹參提取物的可溶性淀粉為輔料，加入輔料與浸膏總量的10%的75%乙醇為潤濕劑，充分搓捏混勻，制成軟材后，擠壓通過制粒篩，制成顆粒，于60℃烘干，即得。

因藥材浸膏的相對(duì)密度，對(duì)顆粒劑制備效果影響較大，本文還對(duì)浸膏密度進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)當(dāng)相對(duì)密度在1.25～1.30之間時(shí)，藥材浸膏粘度適宜，掛壁現(xiàn)象較輕，浸膏損失小，因此本文所有試驗(yàn)處理均將藥材浸膏相對(duì)密度控制在1.30左右。

丹參作為一種傳統(tǒng)中藥，長期記載于《中國藥典》中，且成為我國第一個(gè)被列入美國藥典的中藥[22]。丹參是“五大商藥”之首，陜西省商洛市是我國丹參主要產(chǎn)區(qū)之一，丹參蘊(yùn)藏量豐富。陜西天士力植物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的丹參是我國第一個(gè)拿到國家《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(Good Agricultural Practice ，GAP)認(rèn)證的藥材。丹參作為中醫(yī)臨床使用和中成藥生產(chǎn)中最為常見的品種之一，具有良好的市場開發(fā)前景。本課題組在今后的研究中將進(jìn)一步對(duì)丹參無糖配方顆粒的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)其藥理、藥效做初步的探索。