Tris-HCl溶液替代原煙堿檢測連續流動分析法緩沖劑效果

張文 周崇健 王躍 饒玉慧 常城

摘 要：新緩沖劑Tris-HCl溶液不與鈣、鎂離子及重金屬離子生成沉淀，對生物化學過程干擾小。而原煙堿檢測連續流動分析法緩沖劑中的磷酸氫二鈉易與煙葉中富含的鈣、鎂、重金屬離子液締合生成沉淀。因此，使用Tris-HCl替代磷酸氫二鈉成為煙堿檢測連續流動分析法的緩沖劑將有助于檢測精度的提升。

關鍵詞：煙堿;連續流動分析法;緩沖劑

煙堿檢測連續流動分析法通常均選用磷酸氫二鈉作為煙堿美拉德反應緩沖劑的組成部分。然而，近些年的分析化學研究結果表明以磷酸氫二鈉為代表的磷酸鹽類的緩沖劑易與常見的鈣Ca2+離子、鎂Mg2+離子以及重金屬離子締合生成沉淀。在煙堿檢測過程中，煙葉樣品溶液中存在的游離態重金屬離子穿透透析膜后與磷酸氫二鈉溶液締合生成沉淀，沉淀附著在透析膜上，影響煙堿等物質的穿透，造成檢測結果的漂移，且漂移幅度隨檢測的進行持續增加。因此，本研究致力于驗證使用新緩沖劑Tris-HCl替代磷酸氫二鈉的可行性。

1 試驗設計

試驗針對“煙堿含量檢測連續流動氰化鉀法”與“煙堿含量檢測連續流動硫氰酸鉀法”分別建立對比試驗。即，對比一：對比測試變更緩沖劑對氰化鉀法的影響;對比二：對比測試變更緩沖劑對硫氰酸鉀法的影響。

試驗涉及兩種煙堿檢測法共計4種處理方案。4種處理方案具體見表1。

2 結果與分析

2.1 原始數據

按照本次試驗方案，針對4種處理方式，各連續檢測煙葉樣品（青州標樣）標準溶液60次，得到4組共計240個檢測數據。

2.2 變更緩沖劑對氰化鉀法的影響

使用spss軟件“獨立樣本非參數檢驗”分析“處理1”與“處理2”的試驗數據，以確認使用兩種不同緩沖劑有無顯著性差異：

曼-惠特尼檢驗結果表明，相伴概率為0.006小于顯著性水平，可認為拒絕零假設，使用氰化鉀法的前提下，兩種緩沖劑的處理結果存在顯著性差異。

2.3 變更緩沖劑對硫氰酸鉀法的影響

使用spss軟件“獨立樣本非參數檢驗”分析“處理3”與“處理4”的試驗數據，確認使用兩種不同緩沖劑有無顯著性差異：

曼-惠特尼檢驗結果表明，相伴概率為0.004小于顯著性水平，可認為拒絕零假設，使用硫氰酸鉀法的前提下，兩種緩沖劑的處理結果存在顯著性差異。

2.4 使用新緩沖劑兩種檢測方法有無差異

使用spss軟件“獨立樣本非參數檢驗”分析“處理2”與“處理4”的試驗數據，曼-惠特尼檢驗結果表明，U=1729.5，W=3559.5，Z的值為-.420，相伴概率為0.674大于顯著性水平（P=0.05），可認為接受零假設，使用Tris-HCl緩沖劑的前提下，兩種檢測法的處理結果無顯著性差異。

2.5 新緩沖劑對檢測結果正確性影響分析

通過“標準物質歸一化偏差En值”驗證測試結果的“正確度”，其計算公式為：

4種處理方式的“正確度”分別為“處理1：0.3498”、“處理2：0.0721”、“處理3：0.3172”、“處理4：0.0699”。其結果表明：使用“Tris-HCl緩沖劑”的處理2與處理4，其標準物質歸一化偏差En值均低于處理1與處理3，說明采用新緩沖劑后，檢測結構的正確度要優于原緩沖劑。即，對于煙堿檢測連續流動分析法，使用“Tris-HCl緩沖劑”效果更優。

3 結論

使用三羥甲基氨基甲烷（C4H11NO3）與鹽酸（HCL）混合配置的緩沖劑可用于煙堿檢測連續流動分析法，且對反應進程干擾小，檢測正確性高。

參考文獻：

[1] YCT 160-2002.煙草及煙草制品 總植物堿的測定 連續流動法[S].北京：國家煙草專賣局，2002.

[2] YCT 468-2013.煙草及煙草制品 總植物堿的測定 連續流動（硫氰酸鉀）法[S].北京：國家煙草專賣局，2013.