T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子1在膀胱癌中的表達(dá)意義及對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響①

蘇宏偉 李 婷 李 晨 劉 鑫 凌海濱 曹 娟 李向東

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院泌尿外科，張家口 075000)

膀胱癌是泌尿外科常見(jiàn)惡性腫瘤，其發(fā)病率居我國(guó)泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位[1]。膀胱癌死亡率也較高，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，2012年膀胱癌致發(fā)展中國(guó)家16萬(wàn)多人死亡[2]，而在美國(guó)2017年79萬(wàn)新發(fā)膀胱癌患者中約16萬(wàn)人死亡[3]，2018年81萬(wàn)多新發(fā)病例中17萬(wàn)多人死亡[4]，可見(jiàn)膀胱癌的發(fā)病率和死亡率不斷上升。研究報(bào)道大于90%的腫瘤患者死亡原因?yàn)檗D(zhuǎn)移[5]，而威脅人們生命健康的肌層浸潤(rùn)性膀胱癌具有高侵襲性和較易發(fā)生轉(zhuǎn)移的特性[6]，同時(shí)具有高復(fù)發(fā)率，使得33%～75%的膀胱癌患者對(duì)治療的反應(yīng)較差，療效不佳[7]。因此研究膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移的潛在分子機(jī)制，將有助于改善侵襲轉(zhuǎn)移膀胱癌患者的預(yù)后。T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子1(T lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1,Tiam1) 基因位于染色體21q22，主要表達(dá)于正常腦和睪丸組織中，在其他正常組織中表達(dá)較低或不表達(dá)[8]，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)Tiam1在肝癌、結(jié)腸癌等多種常見(jiàn)腫瘤組織中高表達(dá)[9，10]，并且通過(guò)調(diào)控不同信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為[11，12]，而Tiam1在膀胱癌組織中的表達(dá)情況及發(fā)揮的生物學(xué)功能尚未見(jiàn)報(bào)道，因此本研究首先檢測(cè)了Tiam1在膀胱癌組織的表達(dá)水平，并分析其表達(dá)水平與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，進(jìn)一步在體外以膀胱癌細(xì)胞T4為工具，研究Tiam1表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及作用機(jī)制，為發(fā)掘膀胱癌候選促癌分子的靶向治療提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1臨床樣本 納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前未接受放化療、靶向治療等任何形式的抗腫瘤治療，經(jīng)2位病理專(zhuān)家證實(shí)為膀胱癌的首次手術(shù)標(biāo)本，并具備完整的病理和隨訪(fǎng)資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他腫瘤或威脅生命健康的重大疾病。收集2012年6月至2013年6月入住我院行手術(shù)切除的標(biāo)本70例，其中，患者年齡33～76歲，平均年齡(59.34±18.97)歲，<60歲者27例，≥60歲者43例；男45例，女25例。另取40例同時(shí)間段由于其他疾病中取得的正常膀胱組織作為對(duì)照，年齡30～71歲，平均年齡(40.30±23.16)歲；男22例、女18例，膀胱癌組與對(duì)照組患者的資料均具有可比性。所有患者均簽署知情同意書(shū)，并由我院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.1.2試劑與儀器 反轉(zhuǎn)錄、qRT-PCR試劑盒等均購(gòu)自日本TaKaRa公司；兔抗人Tiam1多克隆抗體(ab211518)，兔抗人MMP7多克隆抗體(ab5706)均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；動(dòng)物非免疫羊血清、SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；加拿大中性樹(shù)膠購(gòu)于Solarbio公司；人膀胱癌細(xì)胞系J82、EJ和T24和人正常膀胱上皮細(xì)胞系SV-HUC-1均購(gòu)自美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)；DMEM-F12、RPMI1640培養(yǎng)基、FBS購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；Tiam1、內(nèi)參GAPDH引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成；Tiam1 siRNA由廣州瑞博公司合成；Transwell購(gòu)于美國(guó)Thermo公司；蛋白裂解試劑購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

1.2方法

1.2.1qRT-PCR 所有組織樣本經(jīng)液氮冷凍后研磨，采用TRIzol裂解法提取總RNA。設(shè)計(jì)合成Tiam1引物F:5′-GATCCACAGGAACTCCGAAGT-3′,R:5′-GCTCCCGAAGTCTTCTAGGGT-3′。內(nèi)參GAP-DH引物F:5′-ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG-3′,R:5′-GCCATCACGCCACAGTTTC-3′。將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA作為模板并進(jìn)行熒光定量PCR。每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)反應(yīng)復(fù)孔，按兩步法進(jìn)行反應(yīng)，分析各樣品的循環(huán)閾值(Threshold cycle，Ct)，用2-ΔΔCt法分析各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1.2.2免疫組織化學(xué) 采用免疫組化SP法進(jìn)行檢測(cè)，所有組織樣本均經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋成厚度為4 μm切片；經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精及雙蒸水水化，在枸櫞酸鈉溶液中高溫高壓進(jìn)行抗原修復(fù)，避光室溫放置于3%過(guò)氧化氫甲醇溶液中滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，滴加非免疫羊血清室溫封閉1 h，滴加一抗工作液(Tiam1稀釋比為1∶100)，4℃孵育過(guò)夜，PBS洗滌3次后滴加二抗(稀釋比為1∶200)，37℃孵育30 min，PBS洗滌3次后DAB試劑顯色，充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)梯度酒精脫水，透明干燥后封片。

在低倍顯微鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或者褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，無(wú)陽(yáng)性著色為0分，淺棕黃色為1分，深棕黃色為2分，棕黃色為3分。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例計(jì)分，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分，1%～25%為1分；25%～50%為2分；50%～75%為3分；75%～100%為4分。按陽(yáng)性染色程度和細(xì)胞所占比例綜合判定，二者之和>3分為陽(yáng)性表達(dá)，≤3分為陰性表達(dá)。同時(shí)，兩者之和>4分為陽(yáng)性表達(dá)定義為T(mén)iam1高表達(dá)組(>4)，反之為T(mén)iam1低表達(dá)組(≤4)。并有專(zhuān)業(yè)隨訪(fǎng)人員采用電話(huà)及門(mén)診的方式進(jìn)行隨訪(fǎng)，隨訪(fǎng)時(shí)間為手術(shù)后1～60個(gè)月，直至患者死亡或者隨訪(fǎng)時(shí)間截止。

1.2.3細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染 J82、EJ和T24細(xì)胞的培養(yǎng)基為DMEM-F12+10%FBS，SV-HUC-1細(xì)胞的培養(yǎng)基為RPMI1640+10%FBS，培養(yǎng)在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中。將呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的T24細(xì)胞胰酶消化后鋪至6孔板中，細(xì)胞完全貼壁后將各組轉(zhuǎn)染試劑與脂質(zhì)體2000按說(shuō)明書(shū)轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，分為T(mén)iam1 siRNA(si-Tiam1)和對(duì)照組(si-NC)，放至培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.4Doyden和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力 Boyden實(shí)驗(yàn)所需基質(zhì)膠提前放置4℃使其成為液態(tài)，將基質(zhì)膠與無(wú)血清培養(yǎng)基以1∶20的比例混合后加入PBS濕潤(rùn)過(guò)的Transwell小室聚碳酸酯微孔膜上，每孔加入45 μl并放置37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中6 h左右，使基質(zhì)膠成固態(tài)。收集轉(zhuǎn)染的各組細(xì)胞，無(wú)血清培養(yǎng)基洗3次后計(jì)數(shù)，以每孔1×105個(gè)細(xì)胞、100 μl無(wú)血清培養(yǎng)基接種于Transwell小室的上室固態(tài)基質(zhì)膠上，Transwell實(shí)驗(yàn)直接將細(xì)胞接種于小室聚碳酸酯微孔膜上，下室加500 μl的含10% FBS的培養(yǎng)基作為趨化因子，放至培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)小時(shí)，顯微鏡下觀察細(xì)胞穿過(guò)情況，穿過(guò)細(xì)胞超過(guò)10個(gè)時(shí)終止培養(yǎng)，PBS洗3次后甲醇固定10 min，蘇木素染色，取出聚碳酸酯微孔膜，顯微鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)3個(gè)視野穿過(guò)的細(xì)胞，取其均值代表細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力。

1.2.5Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá) 收集轉(zhuǎn)染的各組細(xì)胞，PBS洗3次，加入蛋白裂解液(含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑)，-80℃凍存過(guò)夜，冰上裂解30 min后4℃、12 000 r/min離心20 min，BCA試劑測(cè)蛋白濃度，煮沸變性冷卻后，上樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳，以濕轉(zhuǎn)方式將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，加入一抗4℃孵育過(guò)夜，TBST洗3次后，二抗室溫孵育1 h，ECL化學(xué)發(fā)光法曝光條帶。

2 結(jié)果

2.1qRT-PCR檢測(cè)Tiam1在膀胱癌組織中的表達(dá) qRT-PCR檢測(cè)Tiam1在70例膀胱癌組織和40例正常膀胱組織中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示：Tiam1在膀胱癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁組織(圖1A)，且高表達(dá)與腫瘤臨床分期(圖1B)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(圖1C)顯著相關(guān)，P值均<0.05。

2.2免疫組化檢測(cè)Tiam1在膀胱癌組織中的表達(dá)及與患者臨床病理特征的關(guān)系 Tiam1在膀胱癌和正常膀胱組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為71.42%、37.50%，膀胱癌組織中Tiam1陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于膀胱組織(χ2=12.125，P=0.000)。Tiam1在膀胱癌組織中的表達(dá)水平與患者的年齡、性別、腫瘤大小和腫瘤分級(jí)均無(wú)關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Tiam1在腫瘤臨床分期T2-T4組織中陽(yáng)性表達(dá)比例高于臨床分期Ta-T1組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中陽(yáng)性表達(dá)比例高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織(P值均<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3膀胱癌組織中Tiam1的表達(dá)水平對(duì)患者預(yù)后的影響 對(duì)70例膀胱癌患者進(jìn)行術(shù)后隨訪(fǎng)，根據(jù)Tiam1在膀胱癌中的染色程度和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例綜合評(píng)分分為T(mén)iam1高表達(dá)組(>4，共54例)和Tiam1低表達(dá)組(≤4，共16例)。 Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示：Tiam1高表達(dá)組膀胱癌患者的5年生存期明顯短于Tiam1低表達(dá)組(χ2=9.824，P=0.002，圖2)。

2.4qRT-PCR檢測(cè)Tiam1在人膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá) qRT-PCR結(jié)果顯示Tiam1在人膀胱癌細(xì)胞系J82、EJ和T24中的表達(dá)顯著高于人正常膀胱上皮細(xì)胞系SV-HUC-1，且在T24中的表達(dá)最高。選擇Tiam1表達(dá)最高的T24細(xì)胞系進(jìn)行Tiam1 siRNA的轉(zhuǎn)染，qRT-PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示si-Tiam1組中Tiam1 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著低于si-NC組(P<0.05，圖3)。

圖1 qRT-PCR檢測(cè)Tiam1在膀胱癌組織中的表達(dá)Fig.1 qRT-PCR detects expression of Tiam1 in bladder cancer tissuesNote: A.Tiam1 expression in bladder cancer tissues was significantly higher than that in normal bladder tissues;B.Tiam1 was significantly higher in T-T4 tissues than in Ta-T1 tissues;C.Tiam1 expression in lymph node metastasis tissues was significantly higher than in non-lymph node metastasis tissues，*.P<0.05.

2.5Boyden實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Tiam1對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲能力的影響 Boyden實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示si-NC和si-Tiam1組細(xì)胞穿膜數(shù)分別為158.14±20.57、52.33±14.68。si-Tiam1組細(xì)胞侵襲能力明顯低于si-NC組(P<0.05，圖4)。

2.6Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Tiam1對(duì)膀胱癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響 Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示si-NC和si-Tiam1組細(xì)胞穿膜數(shù)分別為189.75±18.67、78.34±15.78。si-Tiam1組細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力明顯低于si-NC組(P<0.05，圖5)。

表1 Tiam1在膀胱癌組織中的表達(dá)水平與臨床病理特征之間的關(guān)系

Tab.1 Relationship between expression of Tiam1 in bladder cancer tissues and clinical characteristics

Clinical characteristicsnTiam1 positive expressionχ2P valueAge(year)<604330(69.76%)0.1510.698≥602720(74.07%)SexMale4531(68.89%)0.3980.528Female2519(76.00%)Tumor size≤3 cm3323(69.70%)0.0920.762>3 cm3727(72.97%)Tumor clinical stageTa-T13621(58.33%)6.2280.013T2-T43429(85.30%)Tumor gradingLow level4231(73.81%)0.2920.589High level2819(67.86%)Lymph node metastasisNo3823(60.53%)4.8410.028Yes3227(84.34%)

圖2 膀胱癌組織中Tiam1的表達(dá)水平與患者術(shù)后生存時(shí)間的關(guān)系Fig.2 Relationship between expression of Tiam1 in bladder cancer tissues and survival time of patientsNote: The patients with high expression of Tiam1 have a shorter 5-year survival time.

2.7Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá) Western blot結(jié)果顯示si-Tiam1組細(xì)胞中MMP7蛋白的表達(dá)為11.36±0.28，si-NC組中MMP7蛋白的表達(dá)為1.02±0.08，與si-NC組相比si-Tiam1組MMP7蛋白的表達(dá)水平明顯降低(圖6)。

圖3 qRT-PCR檢測(cè)Tiam1在人膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá)Fig.3 qRT-PCR detects expression of Tiam1 in human bladder cancer cell linesNote: A.The expression level of Tiam1 in human bladder cancer cell lines J82,EJ and T24 was significantly increased,and the expression was highest in T24 (*.P<0.05,vs human normal bladder epithelial cell line SV-HUC-1)；B.The expression of Tiam1 mRNA in si-Tiam1 group was significantly lower than that in si-NC group;C.The expression of Tiam1 protein in si-Tiam1 group was significantly lower than that in si-NC group.

圖4 Boyden實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Tiam1對(duì)細(xì)胞侵襲能力的影響Fig.4 Boyden assay detects effect of Tiam1 on cell invasionNote: The invasive ability of Tiam1 siRNA transfected T24 cells is significantly reduced.*.P<0.05.

3 討論

膀胱癌發(fā)病率居全球惡性腫瘤的第九位[2]，是我國(guó)常見(jiàn)的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，流行病學(xué)調(diào)查顯示男性發(fā)病率較女性高，且隨著年齡的增長(zhǎng)其發(fā)病率也有所增加[13]。90%以上的原發(fā)性膀胱癌經(jīng)膀胱癌根治切除術(shù)治療后具有較好的預(yù)后，但是膀胱癌患者5年復(fù)發(fā)率為60%左右，且30%左右患者會(huì)進(jìn)展為浸潤(rùn)性膀胱癌，而目前對(duì)于浸潤(rùn)性和復(fù)發(fā)性的膀胱癌治療有限，使得膀胱癌患者5年生存率較差，生存質(zhì)量較低，承受較大的醫(yī)療負(fù)擔(dān)[14，15]。研究報(bào)道具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者5年生存率為40%左右，明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的90%左右，且生存率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)量及部位有關(guān)[16]，腫瘤的轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后密切相關(guān)，膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移的潛在分子機(jī)制尚未闡明，因此本研究旨在研究膀胱癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制，為治療膀胱癌提供新的基因靶點(diǎn)。Tiam1是介導(dǎo)Rac1特異性激活鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子的家族成員，是最早被Habets等[17]在攻擊性小鼠內(nèi)發(fā)現(xiàn)的與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因。文獻(xiàn)報(bào)道Tiam1在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)，其中在胰腺癌組織中高表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及5年總生存率顯著相關(guān)，且是胰腺癌患者獨(dú)立預(yù)后危險(xiǎn)因素，在體外促進(jìn)細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移[18]。Yang等[19]研究結(jié)果顯示Tiam1蛋白高表達(dá)與宮頸癌的晚期臨床分期、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和較低的總體存活率密切相關(guān)，是宮頸癌預(yù)后不良分子。而Tiam1在膀胱癌中的表達(dá)及與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系未見(jiàn)報(bào)道，因此Tiam1是否參與具有高侵襲性和轉(zhuǎn)移性的膀胱癌的惡性進(jìn)展引起我們的關(guān)注。

首先本研究采用qRT-PCR和免疫組化發(fā)現(xiàn)與正常膀胱組織相比，Tiam1在mRNA和蛋白水平均顯著高表達(dá)于膀胱癌組織，且差異進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)Tiam1高表達(dá)與膀胱癌高臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明Tiam1在膀胱癌中同樣是與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的高表達(dá)基因，同時(shí)采用Kaplan-Meier生存曲線(xiàn)對(duì)患者隨訪(fǎng)資料進(jìn)行分析，結(jié)果顯示Tiam1高表達(dá)患者5年總生存期較短，提示Tiam1可能為膀胱癌患者預(yù)后不良分子。與現(xiàn)有的研究結(jié)果相似，Song等[20]報(bào)道的Tiam1在口腔鱗癌組織中的表達(dá)與患者的性別和年齡無(wú)關(guān)，而與腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，可作為反映其生物學(xué)行為新的標(biāo)記。本研究結(jié)果提示Tiam1與膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后差相關(guān)，但是其是否發(fā)揮侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)生物學(xué)功能需要進(jìn)一步探究。而qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Tiam1 mRNA在人膀胱癌細(xì)胞系J82、EJ和T24中的表達(dá)顯著高于人正常膀胱上皮細(xì)胞系SV-HUC-1，與其在膀胱癌組織水平表達(dá)具有一致性，選用Tiam1 mRNA表達(dá)最高的細(xì)胞系T24進(jìn)行后續(xù)功能研究，借助于具有較高轉(zhuǎn)染效率及生物安全的小干擾RNA技術(shù)[21]干擾T24細(xì)胞中目的基因Tiam1的表達(dá)，抑制T24細(xì)胞中Tiam1基因的表達(dá)后，Boyden和Transwell實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力，結(jié)果顯示細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力均下降。功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 Tiam1基因可能為膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移惡性行為進(jìn)展的驅(qū)動(dòng)基因，腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是腫瘤放化療抵抗、復(fù)發(fā)預(yù)后差的主要原因[22]，是惡性腫瘤的重要特征，因此深入研究Tiam1促進(jìn)膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移的具體分子機(jī)制具有重要意義。

Tiam1作為介導(dǎo)Rac1激活鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換的調(diào)控因子，可通過(guò)Rac1介導(dǎo)的多種信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[23，24]，而Liu等[25]發(fā)現(xiàn)在甲狀腺癌細(xì)胞中敲低Tiam1的表達(dá)通過(guò)抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化生物活動(dòng)及Wnt/β-catenin信號(hào)通路降低細(xì)胞侵襲和遷移的能力。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)連續(xù)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲時(shí)，腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞會(huì)分泌蛋白水解酶使細(xì)胞外基質(zhì)降解，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞-腫瘤細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞-基質(zhì)黏附的喪失，基底膜的受損，腫瘤細(xì)胞入侵周?chē)＝M織，同時(shí)游離的腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血管內(nèi)，隨血液向遠(yuǎn)處發(fā)生轉(zhuǎn)移，而目前認(rèn)為最重要的蛋白水解酶是基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs)[26，27]。MMP7是MMPs家族重要成員之一，位于染色體11q22.2上，編碼的蛋白質(zhì)在胚胎發(fā)育、繁殖、組織重塑及傷口愈合等正常生理過(guò)程中具有重要功能[28]，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)MMP7在腫瘤組織中普遍高表達(dá)，在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的標(biāo)志分子[29]。在膀胱癌組織、尿液和血清中已經(jīng)檢測(cè)到升高的MMP7，高M(jìn)MP7血清濃度被證明是膀胱癌獨(dú)立特異性存活和不利的預(yù)測(cè)因子[30]。同時(shí)MMP7可以通過(guò)切割激活MMP2和MMP9酶原以及腫瘤壞死因子前體蛋白發(fā)揮促進(jìn)侵襲轉(zhuǎn)移作用[31]。因此本研究采用Western blot檢測(cè)Tiam1 siRNA轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)MMP7蛋白表達(dá)降低，表明Tiam1可能通過(guò)促進(jìn)MMP7蛋白的表達(dá)促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，Tiam1在膀胱癌組織和細(xì)胞中高表達(dá)，與膀胱癌患者的腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，在膀胱癌細(xì)胞中干擾Tiam1的表達(dá)可能通過(guò)作用于MMP7蛋白抑制細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，Tiam1可能是抑制膀胱癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的潛在靶點(diǎn)，可以為干預(yù)膀胱癌惡性生物學(xué)行為提供新的思路。