蔓荊子中木脂素類成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定*

黃艷麗，張 晗，郭 穎，李安平，姚進(jìn)龍，鄧雁如，房士明

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市中藥化學(xué)與分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 301617；2.天津南開(kāi)醫(yī)院，天津300100，瀚盟測(cè)試科技（天津）有限公司，天津 300457）

蔓荊子為馬鞭草科牡荊屬植物單葉蔓荊（Vitex trifolia L.var.simplicifolia Cham） 或蔓荊（Vitex trifolia L.）的干燥成熟果實(shí)，其主要成分為萜類、黃酮類、蒽醌類、木脂素類、酚酸類等化學(xué)成分，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。蔓荊子味辛、苦，性微寒。歸肺、膀胱、肝經(jīng)，輕浮升散，主治外感頭痛，昏暈?zāi)堪担嘌鄱鄿I，目睛內(nèi)痛，齒齦腫痛等[1]。現(xiàn)代藥理研究表明：蔓荊子還具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抑制組胺釋放、解熱鎮(zhèn)痛和抗突變等作用[2-3]。作者采用多種色譜法相結(jié)合，對(duì)蔓荊子95%乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行分離并鑒定了7個(gè)木脂素類化合物，分別為 dihydrodehydrodiconiferyl alcohol（1），ficusal（2），（7R，8S）-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9-O-β-D-glucopyranoside（3），dihydrodehydrodiconiferyl alcohol-β -D-（2′-O-p-hydroxybenzoyl）glucoside（4），（7R，8R）-7，8-dihydro-9′-hydroxyl-3′-methoxyl-8-hydroxymethyl-7-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl）-1′-benzofuranpropanol 9′-O-β-D-glucopyranoside（5），松 脂 醇（pinoresinol）（6），1-syringaresinol（7）。其中化合物5為首次從牡荊屬中分離得到，化合物6和7為首次從該植物中分離得到的化合物。

1 儀器與材料

安捷倫6500系列四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（美國(guó) Agilent公司，6520 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS）；Bruker AM 400-MHz 型核磁共振儀、Bruker DRX 500-MHz型核磁共振儀、Bruker AvanceⅢTM 600-MHz型核磁共振儀（德國(guó)Bruker公司）-；高效液相色譜法用分析柱以及制備柱型號(hào)為[Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ（4.6 ID×250 mm，5 μm），Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ（10 ID×250 mm，5 μm），Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ（20 ID×250 mm，5 μm）]；乙酸乙酯、石油醚、甲醇、乙醇、乙腈等試劑購(gòu)自天津康科德科技有限公司。蔓荊子購(gòu)于安國(guó)藥市，并由天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院李天祥教授鑒定為馬鞭草科牡荊屬單葉蔓荊（Vitex trifolia L.var.simplicifolia Cham.）的干燥果實(shí)。部分標(biāo)本保留于天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院。

2 提取與分離

取蔓荊子藥材18 kg，用8倍量95%乙醇冷浸，回流提取3次。藥渣繼續(xù)采用8倍量60%乙醇加熱回流提取1.5 h，共提取3次，合并兩部分浸膏稱重，共計(jì)約990 g。粗浸膏用蒸餾水3 L分散均勻，用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇分別萃取，得到石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取物 78.0 g，156.3 g，206.2 g。將上述乙酸乙酯總浸膏（156.3 g）用適量溶劑溶解并加100-200目硅膠均勻拌樣裝柱，石油醚-氯仿-甲醇（PE-CHCl3-MeOH）溶劑系統(tǒng)洗脫。根據(jù)TLC結(jié)果，收集合并相應(yīng)洗脫液濃縮，合并為17個(gè)組分[Fr.1-Fr.17]。

Fr.5（7.504 g）經(jīng) MCI柱層析[MeOH-H2O（20：80-100：0，v/v）]分離，得到 11 個(gè)組分[Fr.5-1～Fr.5-11]。Fr.5-3（457.7 mg）經(jīng)預(yù)裝好的 Sephadex LH-20柱層析[CH2Cl2-MeOH（1：1，v/v）]分離，得到 2 個(gè)組分[Fr.5-3-1～Fr.5-3-2]。Fr.5-3-1（348.4 mg）經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）分離制備[MeOH-H2O（38：62，v/v）；6 mL/min]，得到 9 個(gè)組分[Fr.5-3-1-1-Fr.5-3-1-9]。其中，F(xiàn)r.5-3-1-4 為 ficusal（2，9.6mg）。Fr.5-3-1-5經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）再次純化[MeOH-H2O（38：62，v/v）]，得到 dihydrodehydrodiconiferyl alcohol（1，21.1 mg），F(xiàn)r.5-3-1-8 經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）再次純化[CH3CNH2O（20：80，v/v）；3 mL/min]，得到 1-syringaresin（7，3.0 mg），F(xiàn)r.5-3-1-9經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）再次純化[CH3CN-H2O（22：78，v/v）；3 mL/min]，得到pinoresinol（6，5.5 mg）。

Fr.15（6.196 g）經(jīng)預(yù)裝好的 Sephadex LH-20 柱層析[MeOH-H2O（95：5，v/v）]分離，得到 6 個(gè)組分[Fr.15-1～Fr.15-6]。Fr.15-3（1.770 g） 經(jīng)預(yù)裝好的Sephadex LH-20 柱層析[CH2Cl2-MeOH（1：1，v/v）]分離，得 5 個(gè)組分[Fr.15-3-1～Fr.15-3-5]。Fr.15-3-5（480.3 mg）經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）分離制備[MeOH-H2O（27：83，v/v）；3 mL/min]，得到（7R，8R）-7，8-dihydro-9′-hydroxyl-3′-methoxyl-8-hydroxymethyl-7-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl）-1′-benzofuranpropanol 9′-O-β -D-glucopyranoside（5，7.9 mg）。Fr.15-4（1.770 g）經(jīng)預(yù)裝好的 Sephadex LH-20 柱層析[CH2Cl2-MeOH（1：1，v/v）]分離，得 6 個(gè)組分[Fr.15-4-1～Fr.15-4-6]。Fr.15-4-4（924.9 mg）經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）分離制備[MeOHH2O（35：65，v/v）]，得到（7R，8S）-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9-O-β-D-glucopyranoside（3，18.4 mg） 和 dihydrodehydrodiconiferyl alcohol-β-D-（2′-O-p-hydroxybenzoyl）glucoside（4，24.5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色不定形粉末；[α]25 D+0.190°（c 1.06，CH3OH）[4]1H-NMR（CD3OD，600 MHz）：δ 6.95（1H，d，J=1.4 Hz，H-2），6.82（1H，dd，J=8.2，1.4 Hz，H-6），6.76 （1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.73（2H，s，H-2′，6′），5.49（1H，d，J=6.3 Hz，H-7），3.85（3H，s，3′-OCH3），3.81（3H，s，3-OCH3），3.57（2H，t，J=6.3 Hz，H-9），3.45（1H，q，J=6.3 Hz，H-8），3.35（2H，m，H-9′），2.63 （2H，t，J=7.7 Hz，H-7′），1.82 （2H，m，H-8′）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz）：δ 149.1 （C-3），147.5（C-4），147.5（C-4′），145.2（C-3′），136.9（C-1′），134.8（C-1），129.9（C-5′），119.7（C-6），114.1（C-2′），116.1（C-5），117.9（C-6′），110.5（C-2），89.0（C-7），65.0（C-9），62.2（C-9′），56.7（3′-OMe），56.3（3-OMe），55.4（C-8），32.9（C-7′），35.8（C-8′）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物為dihydrodehydrodiconiferyl alcohol。

圖1 化合物1～7的結(jié)構(gòu)

化合物 2：黃色油狀物；[α]25 D+0.208°（c 0.96，CH3OH）[4]1H-NMR（CD3OD，500 MHz）：δ 9.79（1H，s，CHO），7.52（1H，br.s，H-2′），7.46（1H，br.s，H-6′），6.95（1H，br.s，H-2），6.83（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.79（1H，d，J=8.0 Hz，H-6），5.66（1H，d，J=6.0 Hz，H-7），3.93（3H，s，3′-OCH3），3.86（2H，d，J=5.6 Hz，H-9），3.82（3H，s，3-OCH3），3.61（1H，m，H-8）；13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ 192.7（C-7′），155.6（C-4′），149.2（C-3），148.0（C-4），146.3（C-3′），133.6（C-1），132.8（C-1′），131.2（C-5′），122.3（C-6′），119.9（C-6），116.3（C-5），113.9（C-2′），110.7（C-2），90.6（C-7），64.5（C-9），56.7（3′-OCH3），56.4（3-OCH3），54.3（C-8）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物為ficusal。

化合物 3：無(wú)色不定形粉末；[α]25 D-0.381°（c 0.56，CH3OH）[4]；1H-NMR（CD3OD，400 MHz）：δ 6.96（1H，d，J=1.6 Hz，H-2），6.84（1H，dd，J=8.2，1.6 Hz，H-6），6.74（1H，br.s，H-2′），6.72（1H，br.s，H-5），5.57（1H，d，J=6.0 Hz，H-7），4.36（1H，d，J=7.6 Hz，H-1"），4.22（1H，dd，J=9.6，5.6 Hz，Ha-9），3.85（3H，s，3′-OCH3），3.85 （1H，m，overlapped，Hb-9），3.80（3H，s，3-OCH3），3.78（1H，t，J=9.6 Hz，Ha-6"），3.59（1H，m，overlapped，Hb-6"），3.67（1H，m，H-8），3.57（2H，t，J=6.6 Hz，H-9′），3.20-3.40（4H，m，H-2"，3"，4"，5"），2.64（2H，br.t，J=7.6 Hz，H-7′），1.83（2H，m，H-8′）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）：δ 149.5（C-3），149.1（C-4），147.5（C-4′），145.2（C-3′），136.9（C-1′），133.6（C-1），129.8（C-5′），119.9（C-6），118.2（C-2′），116.5 （C-5），114.2（C-6′），110.7（C-2），104.6（C-1"），89.2（C-7），78.2（C-3"），78.0（C-5"），75.2（C-2"），72.4（C-9），71.6（C-4"），62.8（C-6"），62.2（C-9′），56.8（3′-OCH3），56.4（3-OCH3），53.1（C-8），32.9（C-7′），35.8（C-8′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]基本一致，故鑒定化合物為（7R，8S）-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9-O-β-D-glucopyranoside。

化合物 4：無(wú)色不定形粉末；[α]25 D-0.163°（c 1.23，CH3OH）[4]；1H-NMR（CD3OD，400 MHz）：δ 7.81～7.84（2H，m，H-2″′，6″′），6.71～6.75（2H，m，H-3″′，5″′），6.79（1H，d，J=1.7 Hz，H-2），6.67（1H，br.s，H-2′），6.66（1H，br.s，H-6′），6.64（1H，d，J=8.1 Hz，H-5），6.62（1H，dd，J=8.1，1.7 Hz，H-6），5.34（1H，d，J=5.6 Hz，H-7），4.99 （1H，dd，J=9.4，8.0 Hz，H-2″），4.66（1H，d，J=8.0 Hz，H-1′），4.19（1H，dd，J=9.4，5.0 Hz，Hb-9），3.94 （1H，dd，J=12.0，2.2 Hz，Hb-6″），3.81（3H，s，3′-OCH3），3.79 （3H，s，3-OCH3），3.72（1H，dd，J=12.0，5.6 Hz，Ha-6″），3.69 （1H，dd，J=9.4，8.8 Hz，H-3″），3.64（1H，m，Ha-9），3.56（2H，t-like，J=6.5 Hz，H-9′），3.46 （1H，dd，J=9.4，8.8 Hz，H-4″），3.43-3.48（1H，m，H-8），3.40（1H，ddd，J=9.3，5.6，2.0 Hz，H-5″），2.54（2H，dd，J=8.8，6.8 Hz，H-7′），1.74-1.83（2H，m，H-8′）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）：δ 167.8（C-7″′），167.2（C-4″′），148.9（C-3），147.3（C-4′，4），145.0 （C-3′），136.9 （C-1′），134.4 （C-1），133.0（C-2″′，6″′），129.0（C-5′），120.0（C-1″′），119.4（C-6），117.9（C-6′），116.0（C-3″′，5″′），116.0（C-5），114.2（C-2′），110.3（C-2），102.7（C-1″），88.5（C-7），78.2（C-5″），76.2（C-3″），75.2（C-2″），72.1（C-9），71.8（C-4″），62.7（C-6″），62.3（C-9′），56.7（3′-OCH3），56.4（3-OCH3），53.2（C-8），35.7（C-8′），32.8（C-7′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為 dihydrodehydrodiconiferyl alcohol-β-D-（2′-O-p-hydroxybenzoyl）glucoside。

化合物 5：無(wú)色不定形粉末；[α]25 D-0.253°（c 0.7，CH3OH）[9]；1H-NMR （CD3OD，500 MHz）：δ 6.93（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），6.81（1H，dd，J=8.2，1.8 Hz，H-6），6.76 （1H，overlapped，H-5），6.75 （1H，s，H-6′），6.72（1H，overlapped，s，H-2′），5.48（1H，d，J=6.4 Hz，H-7），4.25（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），3.85（3H，s，3′-OCH3），3.80 （3H，s，3-OCH3），3.80，3.74（2H，overlapped，m，H-9），3.51，3.92（2H，overlapped，m，H-9′），3.67（1H，dd，J=11.9，5.4 Hz，H-6″），3.47（1H，m，H-8），3.35 （1H，m，H-2″），3.34（1H，overlapped，m，H-3″），3.32（1H，overlapped，m，H-4″），3.26（1H，m，H-5″），2.68（2H，t，J=7.7 Hz，H-7′），1.90（2H，m，H-8′）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）：δ 148.9（C-3），147.5（C-4，4′），145.2（C-3′），136.8（C-1′），133.8（C-1），130.0 （C-5′），119.9（C-6），118.0 （C-6′），116.5（C-5），114.3（C-2′），110.6（C-2），104.5（C-1″），89.2（C-7），78.2（C-3″），77.9（C-5″），75.2（C-2″），71.7（C-4″），70.0（C-9′），65.0（C-9），62.8（C-6″），56.8（3′-OCH3），56.4（3-OCH3），55.4（C-8），32.9（C-7′，8′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為（7R，8R）-7，8-dihydro-9′-hydroxyl-3′-methoxyl-8-hydroxymethyl-7-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl）-1′-benzofuranpropanol 9′-O-β-D-glucopyranoside。

化合物 6：白色不定形粉末；[α]25 D+0.519°（c 0.55，CH3OH）[11]，1H-NMR（CD3OD，500 MHz）：δ 6.92（2H，s，H-2，2′），6.79 （2H，dd，J=8.2，1.8 Hz，H-5，5′），6.74（2H，d，J=8.2 Hz，H-6，6′），4.69（2H，d，J=4.2 Hz，H-7，7′），4.22（2H，m，H-9b，9′b），3.84（6H，s，2×-OCH3），3.81（2H，m，H-9a，9′a），3.15（2H，m，H-8，8′）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ 149.7（C-4，4′），147.8（C-3，3′），132.5（C-1，1′），120.2（C-6，6′），116.6（C-5，5′），111.0（C-2，2′），87.7（C-7，7′），72.6（C-9，9′），56.4（2×-OCH3），55.3（C-8，8′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為松脂醇（pinoresinol）。

化合物 7：無(wú)色方晶；[α]25 D+0.667°（c 0.3，CH3OH）[11]，1H-NMR（CDCl3，600 MHz）：δ 6.59（4H，s，H-Ar），4.73（2H，d，J=4.0 Hz，H-7，7′），4.28（2H，m，H-9a，9′a），3.90 （2H，overlapped，H-9b，9′b），3.91（12H，s，4×-OCH3），3.08-3.12（2H，m，H-8，8′）；13CNMR（CDCl3，150 MHz）δ 147.2（C-4，4′），134.4（C-3，3′，5，5′），132.2（C-1，1′），102.8（C-2，2′），86.2（C-7′，7），71.9（C-9，9′），56.5（4×-OCH3），54.4（C-8′），51.0（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為1-syringaresinol。

4 結(jié)果與討論

文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，化合物3具有抗炎活性[7]，化合物5于2006年首次從元寶楓屬植物中發(fā)現(xiàn)[10]，目前鮮有其活性研究報(bào)道。化合物6（6.80±0.52 μmol/L）具有抗氧化活性[14]，能夠抑制LPS誘導(dǎo)的小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，降低NO,PGE2,TNF-α,IL-1β和IL-6的產(chǎn)生[15]，對(duì)四氯化碳引起的小鼠肝損傷具有保護(hù)作用[16]。該研究進(jìn)一步豐富了蔓荊子的化學(xué)成分，為更深入的藥效及作用機(jī)制研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。