桂丁香質量標準改進研究

江蘇省鹽城市食品藥品監督檢驗中心（224002）支榮榮

本品為樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl.的干燥帶宿萼的未成熟果實，別名肉桂子、桂丁等，入藥始見于《百草鏡》，《綱目拾遺》引《百草鏡》曰：桂丁“形如吳茱萸，出廣西交趾，乃肉桂子也”所述與今相符。主產于廣西、廣東、福建；云南亦產。主銷華北、東北、并出口國外。具有溫里散寒，止痛，止呃的功效，主治心胸疼痛，胃腹冷痛，惡心，噯氣，呃逆，嘔吐，肺寒咳喘等癥[1]。桂丁香含揮發油，油中含桂皮醛（Cinnamaldehyde）等[2]，桂丁香中的桂皮醛含量高于肉桂[3]。桂皮醛能使冠狀動脈和腦動脈灌注壓相應提高，促進心肌側支循環開放，改變其血液供應，對心肌有保護作用，從而使肉桂油具有抗心律失常的作用[4]。2015年版《中國藥典》中，肉桂、桂枝等藥材及其制劑均以桂皮醛作為重要指標性化合物[5]。

該品種為江蘇省地方中藥材，收載于《江蘇省中藥飲片炮制規范》（2002年版），由于標準中檢驗項目較少，只有性狀項，已不能科學評價和全面控制桂丁香的質量，為了完善該標準，在原標準的基礎上進行了修訂與提高，增加了組織顯微鑒定和主成分桂皮醛HPLC法測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀（美國Agilent）；BP211D電子天平、BT224S電子天平（德國Sartorius）；Olympus bx51顯微成像系統（日本Olympus）；Milli-Q超純水系統（德國Merk）。

1.2 試藥 桂皮醛對照品（中國食品藥品檢定研究院，110710-201821）；乙腈（江蘇漢邦科技有限公司，色譜純）；水（Milli-Q超純水系統）等；其他試劑均為分析純；硅膠G薄層板（德國Merk、青島海洋化工廠分廠）；色譜柱（Capcell C18 4.6×150mm，5μm）。桂丁香樣品為8批次，購自江蘇各地。

2 實驗方法與結果

2.1 顯微鑒別[6]本品粉末棕褐色至紅褐色。非腺毛單細胞，類矛狀，多彎曲，有的胞腔內有紅棕色分泌物，壁厚。厚壁細胞淡黃色，類圓形，長圓形或不規則形，壁明顯增厚，孔溝和紋孔均明顯，木化，多含棕色物質。纖維淡黃色，單個或成束，長梭形、類棒形，細長或較粗短，胞腔較大，孔溝和紋孔不明顯。色素細胞黃棕色至棕褐色，類長方形或不規則多邊形。網紋細胞長圓形，具網狀紋孔。油細胞多已破裂，油滴黃棕色，多散在。黏液細胞類圓形。外果皮細胞淡黃色，類長方形，外壁和側壁增厚，外壁被角質層。中果皮果皮薄壁組織類白色，圓形、卵圓形或不規則形，有的壁稍增厚，可見草酸鈣小柱晶，少見小方晶。內果皮細胞為草酸鈣方晶層。胚乳細胞可見草酸鈣簇晶。見附圖1。

2.2 桂皮醛的含量測定[6]

2.2.1 對照品溶液的制備 取桂皮醛對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末（過三號篩）約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）15分鐘，放置過夜，同法超聲處理一次，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

附圖1 桂丁香粉末顯微特征圖

2.2.3 色譜條件 色譜柱為Capcell C18 柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動相為乙腈-水（33∶67）；檢測波長為290nm，柱溫為30℃；流速為1.0ml/mlm；進樣量10μl。在該色譜條件下，桂皮醛可達到基線分離，其他成分對測定無干擾。見附圖2。

附圖2 桂丁香高效液相色譜圖。A供試品溶液；B對照品溶液；C空白溶劑

2.2.4 線性關系考察 精密吸取對照品溶液（10μg·mL-1）1μl、2μl、4μl、8μl、10μl、20μl、30μl，40μl注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積Y為縱坐標，對照品的質量X（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程：Y=10×103X+9.3，R=0.9999（n=8）；桂皮醛在0.01μg～0.40μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液（10μg·mL-1），連續進樣6次，對照品溶液峰面積的RSD為0.2%，結果表明精密度良好。

2.2.6 穩定性考察 取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，18，24h分別進樣10μl，按上述條件測定峰面積，RSD為0.5%（n=5），結果表明供試品溶液在24h內穩定。

2.2.7 重復性試驗 精密稱取同一樣品，按供試品溶液制備方法平行制備6份，依次測定，計算得桂皮醛的含量，RSD為1.2%，結果表明重復性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品（含量5.3%）6份，每份0.125g，分別精密加入1.08mg·mL-1的對照品溶液6.1ml（6.6mg），依法測定供試品溶液。分別吸取上述溶液各10μl測定回收率，平均回收率為99.2%（RSD%=0.60%）。

2.2.9 樣品測定及限度擬定 依2.2.3方法測定8批樣品，結果按干燥品計算，含桂皮醛分別為5.4%，5.3%，5.5%，4.7%，5.8%，5.9%，4.0%，2.8%，平均4.9%，以平均值80%為限，故擬定本品按干燥品計算，含桂皮醛（C9H8O）不得少于3.9%。

3 討論

3.1 顯微鑒別中，果實橫切面觀察：中果皮薄壁細胞可見草酸鈣小柱晶，少見小方晶；內果皮細胞為草酸鈣方晶層；胚乳細胞中可見草酸鈣簇晶，由于果實橫切面不易操作，故只在粉末鑒定中注明有關特征及特征存在的部位。

3.2 桂皮醛的含量測定，供試品的制備，比較了乙醇、甲醇兩種溶劑，結果甲醇提取效果最好。方法中浸漬過夜的目的：考慮到桂皮醛易揮發，隨著超聲時間的增加，水溫增加，桂皮醛易揮發，所以采取了兩次超聲法，同時，浸漬過夜能使溶液充分滲透到組織細胞中，利于成分的溶出，并比較了不同超聲時間（10min，15min，20min），最終采取了超聲處理15分鐘，放置過夜，再同法超聲處理一次的提取方法。