血清血小板活化因子、活化T 細(xì)胞核因子c1 水平與冠心病、冠狀動脈病變嚴(yán)重程度及冠心病類型的關(guān)系研究

黨瑞紅，李曉慧，董莉

冠心病（coronary heart disease，CHD）是嚴(yán)重威脅人類健康的心血管疾病，主要病理基礎(chǔ)是全身大、中動脈粥樣硬化，且炎性反應(yīng)、免疫反應(yīng)均有參與。早期識別并干預(yù)CHD 是預(yù)防急性心血管事件的重要方法。血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）是目前作用最強(qiáng)的脂質(zhì)遞質(zhì)和血小板活化刺激因子，可促進(jìn)血小板聚集，誘導(dǎo)血栓形成［1］。有研究表明，PAF 與冠心病有關(guān)，可直接參與動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展，能獨(dú)立預(yù)測急性冠狀動脈事件［2］。淋巴細(xì)胞中活化T 細(xì)胞核因子c1（nuclear factor of activated T cells c1，NFATc1）是一種具有多向調(diào)節(jié)作用的核轉(zhuǎn)錄因子，其與動脈粥樣硬化的發(fā)生密切相關(guān)［3-5］。但目前少有血清PAF、NFATc1 水平對CHD 診斷價值的研究，本研究旨在探討血清PAF、NFATc1 水平與CHD、冠狀動脈病變程度及CHD 類型的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2015 年12 月—2017 年12 月內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院住院并行冠狀動脈造影（coronary angiography，CAG）檢查的患者195 例，根據(jù)CAG 檢查結(jié)果分為非CHD 組51 例（無明顯冠狀動脈狹窄或冠狀動脈狹窄率＜50%）和CHD 組144 例（至少1 支冠狀動脈狹窄率≥50%）。非CHD 組患者有類似心絞痛癥狀，但心電圖、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白T水平在參考范圍；CHD 組患者均符合2013 年歐洲心臟病學(xué)會（ESC）指南中CHD 的診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］。排除標(biāo)準(zhǔn):（1）合并冠狀動脈以外的心臟病、惡性腫瘤、外周血管病變者；（2）合并嚴(yán)重腎功能不全〔腎小球濾過率＜60 ml·min-1·1.73（m2）-1〕者；（3）合并急慢性感染、自身免疫性疾病者；（4）實驗室檢查指標(biāo)和影像學(xué)檢查結(jié)果不全者。根據(jù)冠狀動脈病變嚴(yán)重程度將CHD 患者分為輕度組36 例、中度組68 例、重度組40 例。根據(jù)CHD 類型將所有CHD 患者分為穩(wěn)定型心絞痛（SAP）組69 例和急性冠脈綜合征（ACS）組75 例。本研究經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)，所有患者知情同意。

1.2 觀察指標(biāo)

1.2.1 一般資料及血脂指標(biāo)、肌酸激酶（CK）、CK-MB 收集所有患者的一般資料〔包括年齡、性別、吸煙史（過去20 年均有吸煙，吸煙量＞20 包/年）、飲酒史（過去20 年均有飲酒，飲酒量≥50 g/月）、糖尿病病史、高血壓病史、高脂血癥病史、腦血管疾病病史、心率、血壓〕、血脂指標(biāo)〔包括總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）〕、CK、CK-MB。

1.2.2 血清PAF、NFATc1 水平 采集所有患者清晨空腹靜脈血3～5 ml，置于室溫中30 min，待自然凝固后取上清液于離心管，4 ℃下3 000 r/min 離心10 min（離心半徑15 cm），采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清PAF、NFATc1 水平，PAF 試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，NFATc1 試劑盒購自大連泛邦化工技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.3 冠狀動脈病變嚴(yán)重程度 按照J(rèn)udkins 法［7］經(jīng)橈動脈或股動脈進(jìn)行CAG 檢查，記錄冠狀動脈病變部位、累及冠狀動脈支數(shù)、冠脈狹窄程度，并計算SYNTAX積分；以SYNTAX 積分0～22 分為輕度冠狀動脈病變，SYNTAX 積分23～32 分為中度冠狀動脈病變，SYNTAX積分＞32 分為重度冠狀動脈病變［8-9］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，經(jīng)K-S 檢驗符合方差齊性和正態(tài)分布的計量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t 檢驗，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗；計數(shù)資料分析采用χ2檢驗；繪制ROC 曲線以評價血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1 水平對CHD 的診斷價值及血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1、CK、CK-MB 水平對ACS 的診斷價值。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CHD 組與非CHD 組患者一般資料、血脂指標(biāo)及血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平比較 CHD 組與非CHD 組患者年齡≥65 歲者所占比例、心率、收縮壓、舒張壓比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；CHD 組患者男性比例，有吸煙史、飲酒史、糖尿病病史、高血壓病史、高脂血癥病史、腦血管疾病病史者所占比例及血 清TC、TG、LDL-C、CK、CK-MB、PAF、NFATc1水平高于非CHD 組，血清HDL-C 水平低于非CHD 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

2.2 非CHD 組、輕度組、中度組、重度組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平比較 非CHD 組、輕度組、中度組、重度組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；輕度組、中度組、重度組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平高于非CHD 組，中度組、重度組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平高于輕度組，重度組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平高于中度組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。

2.3 非CHD 組、SAP 組、ACS 組患者血清CK、CKMB、PAF、NFATc1 水平比較 非CHD 組、SAP 組、ACS 組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；SAP 組、ACS 組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平高于非CHD 組，ACS 組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平高于SAP 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表3）。

表2 非CHD 組、輕度組、中度組、重度組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平比較（）Table 2 Comparison of serum levels of CK，CK-MB，PAF and NFATc1 in non-CHD group，mild group，moderate group and severe group

表2 非CHD 組、輕度組、中度組、重度組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平比較（）Table 2 Comparison of serum levels of CK，CK-MB，PAF and NFATc1 in non-CHD group，mild group，moderate group and severe group

注:與非CHD 組比較，aP＜0.05；與輕度組比較，bP＜0.05；與中度組比較，cP＜0.05

組別 例數(shù) CK（U/L） CK-MB（U/L） PAF（μg/L） NFATc1（ng/L）非CHD 組 51 102.54±16.37 15.21±3.06 6.30±2.47 23.58±4.11輕度組 36 192.35±21.53a 32.35±9.58a 7.26±2.76a 27.03±5.21a中度組 68 241.04±30.92ab 53.15±10.12ab 10.35±3.29ab 30.26±7.25ab重度組 40 372.38±39.57abc 65.07±13.65abc 12.91±3.75abc 36.19±9.69abc F 值 19.532 24.135 26.531 28.546 P 值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

表3 非CHD 組、SAP 組、ACS 組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平比較（）Table 3 Comparison of serum levels of CK，CK-MB，PAF and NFATc1 in non-CHD group，SAP group and ACS group

表3 非CHD 組、SAP 組、ACS 組患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1 水平比較（）Table 3 Comparison of serum levels of CK，CK-MB，PAF and NFATc1 in non-CHD group，SAP group and ACS group

注:SAP=穩(wěn)定型心絞痛，ACS=急性冠脈綜合征；與非CHD組比較，aP＜0.05；與SAP 組比較，bP＜0.05

組別 例數(shù) CK（U/L） CK-MB（U/L） PAF（μg/L） NFATc1（ng/L）非CHD 組 51 102.54±16.37 15.21±3.06 6.30±2.47 23.58±4.11 SAP 組 69 206.54±28.64a 31.52±9.05a 8.73±3.86a 24.61±4.96a ACS 組 75 319.46±35.42ab 69.42±13.75ab 11.72±2.69ab 37.07±9.50ab F 值 16.542 21.054 13.264 26.354 P 值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.4 血清 PAF、NFATc1、PAF+NFATc1 水平對CHD 的診斷價值 繪制ROC 曲線發(fā)現(xiàn)，血清PAF、NFATc1、PAF+ NFATc1 水平診斷CHD 的曲線下面積（AUC）分別為0.821、0.755、0.871（見表4、圖1）；血清PAF+NFATc1 水平診斷CHD 的AUC 大于血清PAF、NFATc1 水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z 值分別為2.351、2.467，P 值分別為0.015、0.008）。

2.5 血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1、CK、CK-MB水平對ACS 的診斷價值 繪制ROC 曲線發(fā)現(xiàn)，血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1、CK、CK-MB 水 平 診斷ACS 的AUC 分 別 為0.936、0.834、0.979、0.753、0.760（見表5、圖2）；血清PAF、NFATc1 水平診斷ACS 的AUC 大于血清CK（Z 值分別為3.261、3.245，P＜0.01）、CK-MB 水平（Z 值分別為2.634、2.515，P 值分別為0.011、0.010），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；血清PAF+NFATc1 水 平 診 斷ACS 的AUC 大 于 血 清PAF、NFATc1 水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z 值分別為2.031、2.725，P 值分別為0.036、0.009）。

表4 血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1 水平對CHD 的診斷價值Table 4 Diagnostic value of serum levels of PAF，NFATc1 and PAF+NFATc1 on CHD

表5 血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1、CK、CK-MB 水平對ACS的診斷價值Table 5 Diagnostic value of serum levels of PAF，NFATc1，PAF+NFATc1，CK and CK-MB on ACS

圖1 血清PAF、NFATc1、PAF+ NFATc1 水平診斷CHD 的ROC 曲線Figure 1 ROC curve for serum levels of PAF，NFATc1 and PAF+NFATc1 in diagnosing CHD

圖2 PAF、NFATc1、PAF+NFATc1、CK、CK-MB 診斷ACS 的ROC曲線Figure 2 ROC curve for serum levels of PAF，NFATc1，PAF+NFATc1，CK and CK-MB in diagnosing ACS

3 討論

炎性反應(yīng)在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展、斑塊破裂、血栓形成的病理過程中均有重要作用［10］。PAF 是一種具有多重潛在生物學(xué)作用的內(nèi)源性磷脂，是中性粒細(xì)胞、血小板、肥大細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等在炎性反應(yīng)、免疫反應(yīng)、氧化反應(yīng)等刺激下合成分泌［11］。本研究結(jié)果顯示，CHD 組患者血清PAF 水平高于非CHD 組，表明PAF 可能參與CHD 的發(fā)生；分析其發(fā)生機(jī)制可能是PAF 與血小板質(zhì)膜外表面特異性PAF 受體結(jié)合，并通過G 蛋白介導(dǎo)信號傳導(dǎo)通路而激活三磷酸鳥苷酶和磷酸肌醇特異性磷脂酶C，進(jìn)而誘導(dǎo)血小板活化，促進(jìn)血小板在冠狀動脈內(nèi)黏附、聚集、釋放炎性遞質(zhì)，進(jìn)而使冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展［12-14］；另一方面，PAF 可在巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)化時促進(jìn)動脈粥樣硬化進(jìn)程。海祺旻等［2］研究報道，PAF 與CHD 患者Gensini 積分呈正相關(guān)；付光學(xué)［1］認(rèn)為，PAF 參與CHD 患者粥樣硬化斑塊形成過程，且與不穩(wěn)定斑塊有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，輕度組、中度組、重度組患者血清PAF 水平高于非CHD 組，中度組、重度組患者血清PAF 水平高于輕度組，重度組患者血清PAF 水平高于中度組，表明血清PAF 水平與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度有關(guān)，冠狀動病變程度越重則血清PAF 水平越高。

NFATc1 在T 細(xì)胞、B 細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞中呈高表達(dá)，在炎性反應(yīng)中可誘導(dǎo)細(xì)胞因子并增強(qiáng)其他基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控［15］，CHD 是一種慢性低度炎性反應(yīng)，但NFATc1 在CHD 發(fā)生過程中起何種作用尚待探討。本研究結(jié)果顯示，CHD 組患者血清NFATc1 水平高于非CHD 組，分析其原因可能是CHD 患者冠狀動脈不穩(wěn)定斑塊激發(fā)炎性反應(yīng)，導(dǎo)致T 細(xì)胞活化擴(kuò)增，胞質(zhì)中Ca2+水平升高，啟動促分裂素原活化蛋白激酶級聯(lián)反應(yīng)，上調(diào)NFATc1 核內(nèi)表達(dá)，進(jìn)而使血清NFATc1 水平明顯升高［16］；有研究表明，NFATc1 通過調(diào)控炎性因子轉(zhuǎn)錄而參與動脈粥樣硬化過程［17］，此外其磷酸化后可進(jìn)入細(xì)胞核參與T 細(xì)胞分化、活化過程，從而發(fā)揮細(xì)胞免疫調(diào)控作用，誘導(dǎo)多種炎性因子轉(zhuǎn)錄，加速動脈粥樣硬化進(jìn)程；動脈粥樣硬化斑塊可誘導(dǎo)炎癥刺激分子OX40-OX40L 信號激活，促進(jìn)T 細(xì)胞表面NFATc1 活化，引起炎癥級聯(lián)反應(yīng)，調(diào)控動脈粥樣硬化斑塊形成［18-20］。本研究結(jié)果顯示，輕度組、中度組、重度組患者血清NFATc1 水平高于非CHD 組，中度組、重度組患者血清NFATc1 水平高于輕度組，重度組患者血清NFATc1水平高于中度組，提示血清NFATc1 水平與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度有關(guān)，冠狀動脈病變嚴(yán)重程度越重則血清NFATc1 水平越高。徐良潔等［21］研究表明，CHD 患者血清NFATc1 水平與血管內(nèi)超聲分析斑塊性質(zhì)有關(guān)，NFATc1 水平越高則斑塊性質(zhì)越不穩(wěn)定，ACS 發(fā)生風(fēng)險越高。

CAG 是診斷CHD 的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但其具有創(chuàng)傷性。本研究結(jié)果顯示，血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1水平診斷CHD 的AUC 分別為0.821、0.755、0.871，且血清PAF+NFATc1 水平診斷CHD 的AUC 大于血清PAF、NFATc1 水平，提示血清PAF、NFATc1 水平對CHD 具有一定診斷價值，且二者聯(lián)合對CHD 的診斷價值較高，可作為篩查及初步診斷CHD 的參考指標(biāo)；但由于血清PAF、NFATc1 水平易受年齡、性別、腎功能等多種因素影響，因此臨床診斷CHD 時仍需結(jié)合患者病情。本研究結(jié)果還顯示，血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1、CK、CK-MB 水平診斷ACS 的AUC 分別為0.936、0.834、0.979、0.753、0.760，且血清PAF、NFATc1 水平診斷ACS 的AUC 大于血清CK、CK-MB水平，血清PAF+NFATc1 水平診斷ACS 的AUC 大于血清PAF、NFATc1 水平，提示血清PAF、NFATc1 水平對ACS 亦具有一定診斷價值，且二者聯(lián)合對ACS 的診斷價值較高。

綜上所述，血清PAF、NFATc1 水平與CHD、冠狀動脈病變嚴(yán)重程度及CHD 類型有關(guān)；血清PAF、NFATc1 水平對CHD 及ACS 均具有一定診斷價值，且二者聯(lián)合對CHD 及ACS 的診斷價值較高，由于二者檢測簡便、經(jīng)濟(jì)、可重復(fù)性好，因此可作用輔助診斷CHD 及判斷冠狀動脈病情嚴(yán)重程度的參考指標(biāo)；但本研究為回顧性研究且未能動態(tài)檢測血清PAF、NFATc1水平在CHD 發(fā)生發(fā)展過程中的變化，其具備最佳診斷效能的檢測時間點等仍需進(jìn)一步研究證實。

作者貢獻(xiàn)：黨瑞紅進(jìn)行文章構(gòu)思、結(jié)果分析與解釋并撰寫論文、負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制；黨瑞紅、李曉慧、董莉進(jìn)行研究實施與可行性分析、資料收集整理、論文修訂；李曉慧、董莉?qū)ξ恼抡w負(fù)責(zé)、監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。