不同抗凝劑對大鼠血液生化指標測定結果的影響

劉穎, 王鐵山, 劉珍清

(北京中醫藥大學 北京中醫藥研究院, 北京 100029)

在藥物臨床前藥理實驗、毒理試驗中，血液生化指標的檢測結果往往是評判肝臟功能、腎臟功能、糖代謝和脂代謝等是否正常的客觀而又靈敏的指標。大鼠，作為臨床前藥理/毒理試驗中的常規實驗動物之一，在中長期實驗需要不同時間點采血或藥效指標多需要血液量大時，因其血液量有限而難以滿足實驗需求。采血液量越小對動物的損傷越小，符合動物福利原則。因此，如何采用最少量的血液來獲取更多的可靠的檢測結果就顯得尤為重要。

在采血容器中預置抗凝劑等添加劑已成為血液標本處理的重要手段, 臨床研究中常有報道[1-3]采用抗凝血漿進行血液生化指標的測定，節省了分析時間，改善了臨床治療的及時性。同樣，抗凝血漿的使用將解決臨床前檢測指標多而血液量少的問題[4]。影響大鼠血液生化檢測結果的因素有很多[5]，所用抗凝劑的種類將直接影響檢驗結果的可靠性和準確性。本研究針對正常SD大鼠的血清、EDTA-K2抗凝血漿、檸檬酸鈉抗凝血漿和肝素鈉抗凝血漿的12種生化指標進行了比較，為SD大鼠的血液生化指標檢測中抗凝劑的選擇提供了參考。

1材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級雄性SD大鼠21只，體質量(200.8±5.2)g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司[SCXK(京)-2016-0006]。同一環境下適應性飼養3 d，溫度(24.0±1.0)℃，相對濕度55%～ 65%，動物自由進食，飲水，12 h/12 h明暗循環飼養[SYXK(京)2016-0038]。實驗開始前動物禁食不禁水12 h。

1.2 儀器試劑

AU-480 全自動生化分析儀(COULTER)購自美國Beckman公司; DT5 -2B 低速臺式離心機購自北京時代北利離心機有限公司。所有生化檢測試劑均購自美國貝克曼庫爾特有限公司。

1.3 檢測指標

生化指標共計12 項, 包括: 血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHO)、尿素氮(UREA)、肌酐(Cre)、總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)。

1.4 實驗方法

21只SD大鼠標號稱體質量后, 采用10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射進行麻醉后, 于腹主動脈取血液, 并采用市售的不含抗凝劑的采血管、涂有肝素鈉、檸檬酸鈉和EDTA-K2抗凝劑的2 mL的采血管(江蘇宇力醫療器械有限公司)，充分混勻，以3 000 r/min離心15 min，取出上層血清、血漿并利用全自動生化分析儀分析每只大鼠四種樣本的12個生化指標。

1.5 統計分析

采取SPSS 16.0 統計學軟件對于各項數據資料進行分析，每項指標檢測值使用表示，進行配對t檢驗，P＜0.05的差異有統計學意義。

2 結果

表1數據顯示，與血清生化檢測值比較，肝素鈉抗凝血漿的Cre、AST、Alb均明顯降低(P＜0.05)、LDH明顯升高(P＜0.05); EDTA-K2抗凝血漿的AST、LDH、ALP均明顯降低(P＜0.05)、Alb明顯升高(P＜0.05); 檸檬酸鈉抗凝血漿的CHO、UREA、Cre、AST、CK、LDH、ALP、TP、Alb均明顯降低(P＜0.05)。

表 1 血清和抗凝血漿的生化檢測值比較

與檸檬酸鈉抗凝血漿生化檢測值比較，肝素鈉抗凝血漿的TG、CHO、UREA、AST、LDH、ALP、TP、Alb均明顯升高(P＜0.05); EDTA-K2抗凝血漿的CHO、UREA、AST、ALT、CK、LDH、ALP、TP、Alb均明顯升高(P＜0.05)。

與EDTA-K2抗凝血漿的生化檢測值比較, 肝素鈉抗凝血漿的LDH、ALP均明顯升高(P＜0.05),Alb明顯降低(P＜0.05)。

3 討論

醫學實驗室檢查是疾病診治過程的一個重要環節，其目的是通過各種離體成分的檢測提供全面、準確的機體狀態信息。隨著檢驗技術的不斷進步，對血液標本的要求也越來越高。如何準確規范地使用抗凝劑是實驗室全面質量管理的重要內容之一。2002 年WHO 文件[6]《實驗室檢查中抗凝劑的使用》中強調: 使用抗凝血漿可避免血液中待測成分的改變，與血清比較，其成分能更好反映機體狀態，因此部分實驗室檢查推薦首選血漿。該文件中列舉了血液標本317 項指標，將血液標本分為推薦、可用、限制性使用和不宜使用4 類。推薦使用血漿56 項，其中肝素抗凝血漿13 項，EDTA 抗凝血漿17 項，檸檬酸鹽抗凝血漿26 項; 推薦使用全血液47 項，其中肝素抗凝全血液7 項，EDTA 抗凝全血液37 項，檸檬酸鹽抗凝全血液3 項; 推薦使用血清的項目僅有8 項; 尚有204 項血清或血漿均可使用。本研究中涉及到的12項生化指標，肝素抗凝血漿中除Glu為限制性使用全血液外，其余指標均為推薦或可用；EDTA 抗凝血漿中，除Alb 和ALP為限制性使用或不宜使用，Glu 建議使用全血液外，其余指標均為可用。

抗凝劑因成分和抗凝機制的不同，對結果可產生不同的影響。ALP 是一種含鋅的糖蛋白，檸檬酸鹽和EDTA能夠與鋅產生絡合物，從而抑制ALP 的活性，造成本研究中EDTA 抗凝血漿和檸檬酸鈉抗凝血漿的ALP檢測值偏低。

目前，臨床前動物實驗中仍普遍使用血清進行生化指標測定[7,8]。針對中藥的多成分、多活性和多靶點的特點，臨床前實驗中，大鼠的藥效指標設計較多而大鼠血液量相對較少，且大多藥

效指標的檢測需要抗凝血漿。因此，生化指標的檢測若能用抗凝血漿代替血清，藥效指標和生化檢測指標采用同一份血漿，將解決實驗指標多而血液量少的問題。當出現檢測指標多而血液量不足時，依據《實驗室檢查中抗凝劑的使用》[6]和本研究的檢測結果，部分檢測項目可考慮采用肝素鈉抗凝血漿和EDTA 抗凝血漿代替血清進行生化指標測定。