芹菜對高血壓大鼠降壓效果的組織學觀察

田奎蓉,孫華林,洪 業,劉俊林，藺國珍

（西北民族大學 生命科學與工程學院，甘肅 蘭州 730030）

高血壓(Hy pertension)以動脈壓升高為特征，伴有心臟、血管、腦和腎等組織器官功能性或器質性改變的一種發病率很高的疾病[1]。發病機制復雜，與神經系統功能失調、腎素-血管緊張素系統(RAS) 活性增高、血管內皮細胞功能障礙等眾多因素有關[2]。芹菜(Apium graveolens L.)是一種二年生的傘形科芹菜屬的草本植物，具有降血壓、鎮靜健胃、利尿、潤肺等功效。張桂等對芹菜的根、莖、葉三部分進行了提取研究，實驗結果表明，芹菜莖葉中都含有較高的黃酮化合物，且具有降血壓功效的主要為芹菜中的黃酮化合物。芹菜中黃酮物質主要為槲皮素、芹菜素和木犀草素[3-6]。芹菜素作為一種分布廣泛的天然植物成分，對高血壓有一定的治療作用。芹菜在科學飲食控制高血壓的食療蔬菜中占有十分重要的地位。因此，芹菜不同部位活性物質對高血壓降壓效果的觀察研究具有重要的現實意義。

1 材料與方法

1.1 藥品、材料與儀器

實驗藥品：無水乙醇、氯化鈉、甲醛、冰醋酸、二甲苯(均為分析純)，購自天津市富宇精細化工有限公司;醇溶性伊紅、蘇木精，購自上海伯奧生物科技有限公司；各熔點石蠟，上海標本模型廠生產。常規試劑購自天津大茂化學試劑廠；“利血平”原產海南制藥廠有限公司，購自蘭州本地零售藥店。

實驗儀器：BP-100A 全自動大小鼠無創血壓測量系統（成都泰盟軟件有限公司）；UV-1800 紫外可見光分光光度計（日本島津公司）；N-1100D 旋轉蒸發器；真空冷凍干燥器（北京博醫康實驗儀器有限公司）；Nikoncoolpix 4500數碼照相機(日本尼康公司)；LEICA Histo stat 820 石蠟切片機；LEI-CA-DM500 光學顯微鏡（德國萊卡公司生產)；BX-UCB/BX61 圖像采集系統、Image-Pro Plus 6. 0 圖像測量分析系統(日本奧林巴斯公司)。

1.2 實驗動物

60 只Wister 大鼠（雌雄各半），體重200～300g 由蘭州獸醫研究所提供。

1.3 試驗方法

1.3.1 芹菜各部位藥液的制備 購置蘭州本地毛芹 10 kg，將芹菜水洗后，晾干，切碎后分別放置于烘干箱內，55℃烘干，研磨成粉。70% 的乙醇 65℃ 水浴浸提 2 h，旋轉蒸發儀蒸發濃縮（45～60℃）至濃縮液呈膏體狀，然后轉入真空冷凍干燥機，冷凍干燥完全[5-10]。取其干燥粉末分別配制成含生藥 0.001 mg、0.005 mg、0.008 mg/ml 的藥液，現配現用。

1.3.2 高血壓模型建立 將60 只大鼠（雌雄各半），適應性生存 3 d 后均分為 6 個大組，給予正常飼料進行喂養，按 6% 劑量的氯化鈉溶液給予實驗組大鼠自由飲用[11,12]，對照組給予等量蒸餾水。待實驗組大鼠出現血壓升高且恢復正常飲水，血壓穩定不降低時建模成功[13,14]。

1.4 芹菜提取物對高鹽高血壓大鼠模型降壓效果

1.4.1 給藥治療 將高鹽飲水高血壓模型大鼠分為 3 組，分別標記為： 陽性對照組，“利血平”藥片研磨成粉末，按大鼠體重進行灌胃（0.001mg·kg-1BW）；實驗組，選取 1.3.1 中配制的藥液分別標記為低、中、高三個濃度（0.001 mg、0.005 mg、0.008mg/ml）。按體質量給予實驗組灌胃治療(10 ml· kg-1BW)；陰性對照組給予等量生理鹽水，治療期間大鼠自由飲食、飲水；持續2周[15-17]。

1.4.2 顯著性差異分析 使用 spss 23.0 軟件對測定結果進行差異顯著性分析。

1.5 高鹽高血壓大鼠模型組織切片的制作及相關臟器系數的測定

1.5.1 大鼠心臟系數、腎臟系數、肝臟系數、脾臟系數的測定

稱量各組大鼠體質量，頸椎脫臼處死后快速摘除心臟、腎臟、肝臟、脾臟并稱重。

1.5.2 組織切片制作 對治療后大鼠分組進行解剖，取其心臟、血管、肝臟、腎臟用10%甲醛進行固定，然后制作HE染色病理組織切片。（如圖1）

圖1 芹菜不同部位提取物對大鼠不同組織的影響

A-1 陰性組大鼠心臟 (HE，200×)，A-2 陰性組大鼠肝臟(HE，200×)，A-3 陰性組大鼠腎臟(HE，200×)，A-4陰性組大鼠血管 (HE，200×)。

B-1 芹莖組大鼠心臟 (HE，200×)，B-2 芹莖組大鼠肝臟(HE，200×)，B-3 芹莖組大鼠腎臟(HE，200×)，B-4芹莖組大鼠血管(HE，200×)。

C-1 芹根組大鼠心臟 (HE，200×)，C-1 芹根組大鼠肝臟(HE，200×)，C-1 芹根組大鼠腎臟(HE，200×)，C-1芹根組大鼠血管(HE，200×)。

D-1 芹葉組大鼠心臟 (HE，200×)，D-1 芹葉組大鼠肝臟(HE，200×)，D-1 芹葉組大鼠腎臟(HE，200×)，D-1芹葉組大鼠血管(HE，200×)。

E-1 陽性組大鼠心臟 (HE，200×)，E-1 陽性組大鼠心臟(HE，200×)，E-1 陽性組大鼠心臟(HE，200×)，E-1陽性組大鼠心臟(HE，200×)。

F-1 正常組大鼠心臟 (HE，200×)，F-1 正常組大鼠肝臟(HE，200×)，F-1 正常組大鼠腎臟(HE，200×)，F-1正常組大鼠血管(HE，200×)。

如圖 1 所示 A-1中心肌細胞肥大，心肌纖維增粗，纖維間間隙增大，有部分斷裂情況出現，局灶區域有炎性細胞浸潤；B-1中心肌纖維部分區域出血，纖維間間隙增大，心肌纖維有部分斷裂情況和炎性細胞浸潤；C-1中心肌纖維略有增粗、纖維間間隙增寬、有炎性細胞浸潤；D-1中心肌纖維形態正常，纖維間隙略有增寬；E-1中心肌纖維基本正常，局部區域有炎性細胞浸潤；F-1中心肌纖維正常。A-2中肝臟細胞充血水腫，有大量脂滴樣空泡出現，局灶地區炎性細胞浸潤，B-2、C-2、D-2、E-2 中肝組織有不同程度水腫，但無脂滴空泡和壞死情況出現，局部區域有不同程度炎性細胞浸潤。 A-3中腎組織水腫，有漿液性滲出物彌漫，局部地區炎性細胞浸潤，腎小管和集合管細胞變性壞死，腎小球纖維化，腎小管萎縮；B-3腎組織水腫，腎小球有部分出血情況并有漿液性滲出物，部分腎小球纖維化伴隨局部炎性細胞浸潤；C-3腎實質細胞部分壞死，腎組織充血水腫，腎實質細胞中有漿液性滲出物彌漫，組織內有輕微脂滴樣空泡出現，局灶地區炎性細胞浸潤明顯；D-3中腎組織有輕微水腫和漿液性滲出，部分腎組織細胞壞死，腎小管和集合管周有炎性細胞浸潤、E-3 中腎組織形態基本正常，有輕微漿液性滲出物，腎小球部分萎縮，有輕微炎性細胞浸潤。A-4、B-4、C-4、D-4、E-4 中較 F-4 中有不同程度血管充血、出血，血管周炎性細胞浸潤，血管平滑肌纖維細胞纖維化以及變性壞死、血管壁重構等現象，以A-4、C-4中最為嚴重。

2 結果

由表 1可知中劑量組和高劑量組對大鼠血壓降低具有一定作用，中劑量組治療降壓效果與陰性對照組相比具有顯著性，高劑量組提取物降壓效果與陰性對照組相比具有極顯著性差異，而低劑量組降壓效果與陰性對照組相比沒有統計學意義，低劑量組對大鼠血壓降低效果較低，高劑量組治療效果最好。

表1 芹菜提取物對大鼠血壓的影響（`x±s ）

表2 芹菜提取物對大鼠臟器系數的影響(`x±s )

由表 2 可知，中劑量組、高劑量組、陽性對照組心臟系數較陰性對照組均有較明顯的降低，低劑量組降低情況不明顯；中劑量組、高劑量組、陽性對照組腎臟系數較陰性對照組均有較明顯的降低，低劑量組降低情況不明顯；低劑量組、中劑量組、高劑量組、陽性對照、陰性對照、正常組肝臟系數和脾臟系數無明顯差異。

3 討論

選用的氯化鈉溶液建立大鼠高血壓模型。對大鼠組織制作病理組織切片結果顯示實驗組大鼠各組織器官均有不同程度的病理變化。心臟左室肥大、心臟肌纖維變粗，心肌細胞肥大；肝臟有不同程度炎性細胞浸潤；動脈血管壁增厚、細胞充血出血、血管壁重構；腎臟有不同程度的水腫，腎小管、集合管細胞變性壞死，腎臟血管硬化，腎小管萎縮，且采用芹菜提取物治療的大鼠器官病變相對陰性對照組有一定程度的減輕。科學研究表明芹菜中含有較多的黃酮化合物，且具有降血壓功效的主要為黃酮化合物。芹菜中黃酮物質主要為槲皮素、芹菜素和木犀草素。槲皮素降壓機制可能與減少氧化應激、干擾腎素-血管緊張素-醛固酮系統( RAAS) 和以內皮依賴性和非依賴性方式改善血管內皮功能等有關[3]，芹菜素能夠有效提高高血壓大鼠Ang II水平、降低血脂、改善心肌抗氧化酶活性、抑制氧化應激損傷有關[14]。芹菜提取物對大鼠高血壓有一定的治療效果，但具體機制尚未闡述清楚，需要進一步實驗進行分析探討。

4 結論

本實驗對芹菜活性物質進行提取并作用于高鹽高血壓大鼠，實驗發現其對高血壓癥狀具有良好的治療作用。結論如下：芹菜提取物對大鼠高鹽高血壓模型有良好治療效果，在一定范圍給藥濃度越高，治療效果越好。以高劑量組(0.008 mg/ml)芹菜提取物治療效果最佳，且與陰性對照組相比差異極顯著。中劑量組與陰性對照組相比有顯著性差異，低劑量組無顯著性差異。