斑蝥酸鈉維生素B6注射液對乳腺癌輔助化療患者血清IL-6、IL-17、TNF-α及MIF表達(dá)水平的影響

郭曉鶯，申國宏，趙 濱

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，具有高發(fā)病率和高死亡率的特點(diǎn)，目前在我國的發(fā)病年齡有年輕化趨勢[1]。手術(shù)為該病的根治方法，但很多患者在就診時(shí)已處于中晚期，失去了最佳的手術(shù)時(shí)機(jī)[2,3]?；煘橹型砥谌橄侔┗颊叩闹饕椒ǎ裳娱L無病生存時(shí)間并提高生活質(zhì)量，也可降低局部復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率[4]。但是隨著化療的進(jìn)行，很多患者產(chǎn)生耐藥性，造成效果不佳，也容易復(fù)發(fā)[5,6]。斑蝥酸鈉維生素B6注射液又名艾易舒注射液，可影響線粒體膜的通透性，增強(qiáng)氧化磷酸化的藕聯(lián)過程[7]；也能減少癌細(xì)胞DNA、RNA前體物質(zhì)的攝入，影響癌細(xì)胞的能量代謝平衡，抑制核酸的代謝，減少癌細(xì)胞對氨基酸的攝取，控制和緩解癌變發(fā)展[8]。該藥已經(jīng)在晚期非小細(xì)胞肺癌、食管癌、肝癌等治療中取得了很好的效果[9,10]，但在乳腺癌的應(yīng)用中還無相關(guān)報(bào)道。免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御疾病的第一道防線，其中T細(xì)胞參與的細(xì)胞免疫應(yīng)答發(fā)揮著重要作用[11]。白介素(interleukin，IL-6)、IL-17、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)對T細(xì)胞、造血細(xì)胞、肥大細(xì)胞、單核細(xì)胞都有免疫調(diào)節(jié)作用，其過表達(dá)能導(dǎo)致腫瘤的惡性增殖[12]。巨噬細(xì)胞移動抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，可抑制巨噬細(xì)胞游走，可促進(jìn)機(jī)體炎性反應(yīng)與調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)[13,14]。本研究旨在探討斑蝥酸鈉維生素B6注射液對乳腺癌輔助化療患者血清IL-6、IL-17、TNF-α及MIF表達(dá)水平的影響，以明確斑蝥酸鈉維生素B6注射液的作用效果與機(jī)制。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇2014-05至2018-06在我院診治的中晚期乳腺癌患者122例作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)女性；(2)年齡30～70歲；(3)臨床、病理與隨訪資料完整；卡氏評分(KPS，Karnofsky) ≥60分，預(yù)計(jì)生存期≥3個(gè)月；(4)存在可測量的病灶，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期，具有化療指征；(5)肝腎功能、心電圖及血象正?；蚪咏！Ｅ懦龢?biāo)準(zhǔn)：(1)存在化療禁忌證；(2)伴有嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。根據(jù)治療方法的不同分為研究組(62例)與對照組(60例)，兩組患者的組織類型、病程、臨床分期等對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)，具有可比性。本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

指標(biāo)研究組(n=62)對照組(n=60)χ2/tP年齡(歲)56.77±2.1956.10±3.870.5440.489月經(jīng)狀態(tài)(絕經(jīng)/未月經(jīng))32/3030/300.0320.858臨床分期(Ⅲ期/Ⅳ期)42/2038/220.2630.608體重指數(shù)(kg/m2)22.84±2.1122.19±3.890.4110.561病程(年)2.33±1.482.67±1.240.3090.671淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(n)32310.0001.000組織類型(高/中/低分化)31/19/1231/21/80.8670.648

1.2 治療方法 (1)對照組：給予常規(guī)化療，環(huán)磷酰胺(CTX)500 mg/m2、吡柔比星(THP)40 mg/m2、氟尿嘧啶500 mg/m2，第1天靜脈滴注，21 d為1個(gè)周期，化療觀察4個(gè)周期。(2)研究組：在對照組治療的基礎(chǔ)上給予斑蝥酸鈉維生素B6注射液治療，斑蝥酸鈉維生素B6注射液(貴州柏強(qiáng)制藥有限公司)40 ml+0.9%氯化鈉注射液250 ml，靜脈滴注，1次/d，每個(gè)化療周期的第1～8天靜脈滴注，持續(xù)觀察4個(gè)周期。

1.3 觀察指標(biāo) (1)療效標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)病灶的直徑大小進(jìn)行判定。完全緩解(CR)，全部病灶都消失，持續(xù)時(shí)間≥4周；部分緩解(PR)，患者病灶最長直徑≥30%[4]或者所有病灶的直徑總和≥30%；疾病進(jìn)展(PD)，病灶的最長直徑≥20%，或者出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)新的病灶；疾病穩(wěn)定(SD)，病灶的變化既沒有達(dá)到PR的標(biāo)準(zhǔn)，也沒有達(dá)到PD的程度?？傆行?%)=(完全緩解+部分緩解)/組內(nèi)例數(shù)×100.0%。(2)按WHO抗癌藥物毒性反應(yīng)分級評價(jià)兩組在治療期間出現(xiàn)的毒副反應(yīng)。(3)所有患者在化療前后抽取空腹肘靜脈血3～5 ml，平分為兩管，其中一管不進(jìn)行抗凝，2 h內(nèi)分離血清(500～3500 r/min離心5～10 min，取上層血清)，采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附劑測定法檢測血清IL-6、IL-17、TNF-α及MIF含量。另外一管進(jìn)行抗凝，取全血細(xì)胞，利用Epics Elite Esp流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)CD3+、CD4+細(xì)胞值。(4)隨訪至今，記錄兩組的生存期(OS，Overall survival)及無進(jìn)展生存期(PFS，Progress free survival)，生存期為指患者從入院開始至因任何原因引起死亡的時(shí)間，進(jìn)展生存期為患者首次完成根治性抗腫瘤化療后到再次出現(xiàn)腫瘤進(jìn)展的時(shí)間。

2 結(jié) 果

2.1 總有效率 化療后研究組的總有效率為67.7%，高于對照組的33.3%，兩組對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表2)。

表2 兩組乳腺癌輔助化療患者療效對比 (n；%)

2.2 毒副反應(yīng) 兩組化療期間的骨髓抑制、消化道反應(yīng)、脫發(fā)、血小板下降等毒副反應(yīng)發(fā)生情況對比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。

表3 兩組乳腺癌輔助化療患者治療期間毒副反應(yīng)情況對比 (n；%)

2.3 血清IL-6、IL-17、TNF-α及MIF水平變化 兩組化療后的血清IL-6、IL-17、TNF-α及MIF水平均低于化療前(P<0.05)，且研究組低于對照組(P<0.05，表4)。

指標(biāo)研究組(n=62)化療前化療后對照組(n=60)化療前化療后L-6(pg/ml)56.29±14.1412.49±7.49①②54.20±11.4422.10±8.14①IL-17(pg/ml)34.14±9.045.45±2.28①②33.13±9.0612.10±3.44①TNF-α(pg/ml)56.22±6.4412.76±2.55①②56.00±7.1921.64±5.66①M(fèi)IF(μg/L)9.08±2.191.98±0.92①②9.21±1.383.22±0.52①

注：與治療前比較，①P<0.05；與對照組比較，②P<0.05

2.4 細(xì)胞免疫功能變化 研究組化療后的CD3+、CD4+水平均高于化療前，也高于對照組(P<0.05，表5)，對照組化療前后對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

指標(biāo)例數(shù)CD3+(%)CD4+(%)研究組62 化療前58.33±7.9224.28±7.29 化療后65.27±8.13①②38.29±5.49①②對照組60 化療前58.10±8.4424.12±8.11 化療后58.01±7.4925.09±5.11

注：與化療前比較，①P<0.05；與對照組比較，②P<0.05

2.5 生存情況 隨訪至2019-02[5]KM分析顯示研究組的總生存期[(26.09±4.11)月]及無進(jìn)展生存期[(20.87±4.14)月]都長于對照組[(30.22±5.69)月，(26.39±4.44)月]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

乳腺癌具有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)高、生存率低、侵襲性強(qiáng)、易局部復(fù)發(fā)、疾病進(jìn)展快等生物學(xué)特性。特別是中晚期乳腺癌患者很難獲得長期生存，但病情轉(zhuǎn)歸存在較大的異質(zhì)性[13,14]?；煘橹型砥谌橄侔┗颊叩闹饕委煼椒?，聯(lián)合化療能取得比較好的效果，能對微管網(wǎng)正常重組以及細(xì)胞的有絲分裂進(jìn)行抑制，導(dǎo)致細(xì)胞分化受阻，使得細(xì)胞死亡[15]。但是長期化療存在較多的毒副反應(yīng)，且化療成本高，停藥后容易復(fù)發(fā)。

斑蝥酸鈉維生素B6注射液是由斑蝥酸鈉和維生素B6配制而成的抗腫瘤注射劑，可減少腫瘤細(xì)胞DNA和RNA前體物質(zhì)的攝入，抑制重要蛋白質(zhì)的合成[16]。其也可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制核酸代謝，減少腫瘤細(xì)胞對氨基酸的攝取[17]。該藥也可緩解癌痛，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，可改變T細(xì)胞亞群促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答，也可刺激巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和多形核白細(xì)胞產(chǎn)生白介素，從而緩解患者的臨床癥狀[18]。本研究發(fā)現(xiàn)化療后研究組的總有效率為67.7%，高于對照組的33.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩組化療期間的骨髓抑制、消化道反應(yīng)、脫發(fā)、血小板下降等毒副反應(yīng)發(fā)生情況對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明斑蝥酸鈉維生素B6注射液的應(yīng)用并不會增加毒副反應(yīng)的發(fā)生，且可提高化療效果。

已有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移與腫瘤微環(huán)境存在緊密聯(lián)系，而腫瘤微環(huán)境與患者的免疫功能顯著相關(guān)，患者免疫功能下降可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，不利于患者預(yù)后改善[19,20]。Th1和Th2細(xì)胞的相互平衡直接影響機(jī)體的免疫功能，與疾病的發(fā)生密切相關(guān)，一些感染性疾病的發(fā)生和發(fā)展與Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞的失衡有關(guān)[21,22]。IL-17 是通過各種刺激因子包括細(xì)菌和各種炎性因子刺激產(chǎn)生的，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的激活和刺激成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-6、IL-17、TNF-α等，從而導(dǎo)致炎性反應(yīng)[23,24]。MIF最早發(fā)現(xiàn)于激活的T淋巴細(xì)胞，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、細(xì)胞增殖分化、血管生成等過程中扮演著重要角色[25],也是一種能抑制巨噬細(xì)胞隨機(jī)移動的細(xì)胞因子，具有促炎作用等多種生物學(xué)功能，并參與機(jī)體免疫及炎性反應(yīng)。相關(guān)研究顯示，肺癌組織中MIF蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，MIF具有促進(jìn)肺癌細(xì)胞分泌IL-6、促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用[6]。在雄激素依賴的前列腺癌細(xì)胞中阻斷MIF的表達(dá)，導(dǎo)致了細(xì)胞增殖下降及侵襲能力下降[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，兩組化療后的血清IL-6、IL-17、TNF-α及MIF水平均低于化療前，且研究組顯著低于對照組，表明斑蝥酸鈉維生素B6注射液的應(yīng)用能抑制IL-6、IL-17、TNF-α及MIF的表達(dá)。從機(jī)制上分析，斑蝥酸鈉維生素B6注射液可通過多種途徑發(fā)揮抗腫瘤作用，可減少癌細(xì)胞對氨基酸的攝取，也可減少癌細(xì)胞DNA、RNA前體物質(zhì)的攝入，抑制核酸的代謝[8]；其能改善癌細(xì)胞的能量代謝，提高過氧化氫酶的活力，從而發(fā)揮抑制IL-6、IL-17、TNF-α及MIF表達(dá)的作用[9]。

一般認(rèn)為，乳腺癌是由機(jī)體免疫應(yīng)答引起的病理損傷所致，化療雖然有一定的效果，但是影響患者的免疫功能。本研究顯示研究組化療后的CD3+、CD4+水平顯著高于化療前，也高于對照組，對照組化療前后對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從機(jī)制上分析，乳腺癌患者多伴隨有免疫抑制狀態(tài)，斑蝥酸鈉維生素B6注射液對正常組織沒有或僅有很小的毒副反應(yīng)，可調(diào)節(jié)細(xì)胞周期停滯、啟動修復(fù)蛋白分子等對損傷進(jìn)行修復(fù)，從而促進(jìn)機(jī)體免疫功能的恢復(fù)[11]。并且該藥還具有刺激骨髓造血、調(diào)節(jié)免疫功能等功能，與化療藥物聯(lián)用可達(dá)到協(xié)同抗腫瘤及減輕毒副反應(yīng)的目的[6]。

中晚期乳腺癌具有侵襲性強(qiáng)、轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高等特征，化療為治療乳腺癌的一種重要手段，但化療藥物在殺滅或抑制腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也損傷機(jī)體正常組織細(xì)胞，使一部分患者被迫中止化療，從而不利于延長患者的生存時(shí)間[12]。斑蝥酸鈉維生素B6注射液是一種新型的抗腫瘤藥物，可阻滯腫瘤細(xì)胞從S期進(jìn)入G期及M期，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡[14]。本研究結(jié)果顯示研究組的總生存期及無進(jìn)展生存期都顯著長于對照組。相關(guān)研究也表明中藥注射液的應(yīng)用能夠解決化療阻抗現(xiàn)象，增強(qiáng)化療效果，使得患者的5年無復(fù)發(fā)生存率和總生存率都顯著增高[18]。

綜上所述，斑蝥酸鈉維生素B6注射液在乳腺癌輔助化療患者中的應(yīng)用能抑制血清IL-6、IL-17、TNF-α及MIF的表達(dá)，改善患者的免疫功能，提高化療效果，且不會增加毒副反應(yīng)的發(fā)生，從而延長患者的生存時(shí)間。