土壤鏈霉菌KIB-K1次級代謝產物中大環內酯及其抗菌活性研究

王 磊，余志銀，徐冬冬，趙 晨，黃勝雄*，馬亞團*

1 西北農林科技大學化學與藥學院，楊凌 712100；2 中國科學院昆明植物研究所 植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，昆明 650201；3 西北農林科技大學植物保護學院，楊凌 712100

大環內酯類抗生素(macrolides antibiotics)是指在結構上具有12 ～ 16元環內酯骨架并且具有抑菌活性的化合物。自1952年紅霉素被應用于臨床治療以來，一共發現了超過100種大環內酯類抗生素。其中，常用于臨床醫學的達20 ～ 30種，如紅霉素、阿奇霉素、泰利霉素和白絲霉素等[1]。研究表明，大環內酯類抗生素通過與細菌核糖體50S亞單位的L27及L22蛋白質結合，來抑制細菌的蛋白合成，從而實現抗菌活性[2]。大環內酯類化合物不僅可作為抗生素應用于臨床醫學中，還具有抗哮喘、抗腫瘤、胃腸動力作用、防治心血管疾病、抑制肺間質纖維化、逆轉白血病細胞耐受性等作用[2]。

Aldgamycins和chalcomycins都是十六元內酯環化合物。二者在結構上的區別是，Aldgamycins在5號碳連接一個D-aldgarose或者脫羧基的D-aldgarose，而chalcomycins在5號碳連接一個D-chalcose。從天然產物中僅發現20個aldgamycins和7個chalcomycins類化合物[3,4]，大多數aldgamycins和chalcomycins都對革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌有較強的抑制作用[5]。

本課題組從采自大理蒼山的土壤樣本中分離獲得一批放線菌株，發現編號為Streptomycessp.KIB-K1的鏈霉菌菌株具有抗菌活性，從該菌的發酵液中共分離得到7個大環內酯類化合物，其中5個為Aldgamycins類化合物，分別是aldgamycin J(3)、aldgamycin K(4)、aldgamycin L(5)、GERI-155(6)、chalcomycin(7)，2個為Chalcomycins類化合物，分別是aldgamycin E(2)和新化合物aldgamycin P(1)。抗菌實驗顯示，化合物1～7對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌有顯著的抑制作用，其中化合物2和7對金黃色葡萄球菌的MIC值分別為0.49、0.98 μg/mL，強于陽性對照卡那霉素的MIC值(3.91 μg/mL)，新化合物1對金黃色葡萄球菌的MIC值為7.81 μg/mL。

1 材料與方法

1.1 儀器與器材

德國Bruker Avance III 400 MHz/600 MHz核磁共振波譜儀，日本Shimadzu UPLC-IT-TOF型色譜質譜聯用儀，德國Bruker Tensor 27傅立葉變換中紅外光譜儀，日本Jasco P-1020全自動旋光儀，日本Shimadzu UV 2401 PC紫外可見分光光度儀，日立Chromaster高效液相色譜儀，YMC-Triat C18型液相色譜柱(250 × 10 mm I.D.)，Thermo LYNX 6000離心機，德國Hei-VAP Value G3旋轉蒸發儀，瑞典Airtech Sephadex LH-20凝膠，青島海洋GF 254薄層色譜硅膠板和200 ～ 300目柱色譜硅膠，上海博訊YXQ-LS-18SI高壓蒸汽滅菌鍋，上海知楚ZQZY-HC恒溫搖床。

1.2 發酵菌株

發酵菌株Streptomycessp.KIB-K1分離自大理蒼山云游路(東經99°58′～ 100°27′，北緯25°25′ ～ 25°58′)附近土壤。通過對其16S rRNA進行基因測序，發現其序列與Streptomycessp.9-6(2012)的序列相似度為99.86%，參考其形態特征及培養特性，確定其為鏈霉菌屬。菌株Streptomycessp.KIB-K1保藏于昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室。

1.3 培養基及發酵條件

MS固體培養基：大豆粉20.0 g/L，甘露醇20.0 g/L，技術瓊脂粉20.0 g/L，pH=7.0；TSB種子培養基：胰蛋白胨17.0 g/L，大豆蛋白胨3.0 g/L，氯化鈉5.0 g/L，磷酸氫二鉀2.5 g/L，葡萄糖2.5 g/L，pH=7.3 ± 0.2；DTY液體發酵培養基：糊精 40.0 g/L，番茄醬 7.5 g/L，酵母提取粉5 g/L，N-amine-A 2.5 g/L，pH=7.3 ± 0.2。

從保菌管中取出少量Streptomycessp.KIB-K1的孢子在MS固體培養基上活化。將活化后的菌株接種到裝有50 mL TSB培養基的250 mL三角瓶中，置于恒溫搖床上培養36 h，培養條件設定為轉速200 rpm，溫度30 °C。取12.5 mL種子液(接種量為5%)接種到裝有250 mL DTY培養基的1 L三角瓶中發酵，共發酵15 L。發酵條件設定為轉速200 rpm，溫度30 °C。

1.4 提取和分離純化

收集15 L發酵液，將發酵液置于轉速為4 000 rpm的高速離心機中分離菌體和上清液。上清液用等量乙酸乙酯萃取5次，減壓濃縮有機相得粗提物浸膏A。菌體部分用75%甲醇浸泡并超聲萃取2 h，離心后保留甲醇相，減壓去除甲醇后，用乙酸乙酯萃取剩余水相部分，濃縮有機相后得浸膏B。A、B兩相經HPLC-DAD分析后合并，稱重共計3.5 g。

獲得的3.5 g浸膏運用硅膠柱粗分。采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(1∶0、10∶1、5∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶3、0∶1)得8個組分(Fr.A ～ H)。各組分經HPLC-DAD分析后，合并F、G和H段得組分Fr.M。Fr.M經凝膠色譜分離得7個亞組(Fr.M 1 ～ 7。Fr.M 1經HPLC半制備分離純化(方法：0 ～ 29.0 min，60%甲醇，29.1 ～ 39.0 min，66%甲醇，流速3 mL/min)得化合物2(tR=35.9 min，8.0 mg)、3(tR=17.5 min，56.2 mg)、4(tR=28.8 min，16.5 mg)、5(tR=39.8 min，1.3 mg)、6(tR=25.0 min，2.0 mg)、7(tR=25.8 min，2.8 mg)。Fr.M 2經HPLC半制備分離純化(方法：0～25.0 min，38%乙腈，流速3 mL/min)得化合物1(tR=20.8 min，2.8 mg)。

1.5 活性測試

1.5.1 抑菌圈直徑大小測定(濾紙片法)[6,7]

本實驗選用兩株農作物致病真菌(小麥赤霉病菌Gibberellazeae和玉米小斑病菌HelminthosporiummaydisNisik & Miy)與兩株致病細菌(金黃色葡萄球菌StaphylococcusaureusATCC 6538和枯草芽孢桿菌BacillussubtilisATCC 6633)作為抑菌活性測試菌株。將化合物1～7、多菌靈(Carbendazim)和卡那霉素(Kanamycin)分別配制成濃度為2.0 mg/mL的DMSO溶液備用。測試化合物對細菌的抑制作用時，以DMSO為陰性對照，以卡那霉素為陽性對照，選用LB培養基(配方：胰蛋白胨10.0 g/L，酵母提取物5.0 g/L，NaCl 10.0 g/L，瓊脂粉20.0 g/L，pH7.4)培養細菌。測試化合物對真菌的抑制作用時，以DMSO為陰性對照，以多菌靈為陽性對照，選用PDA培養基(配方：土豆200.0 g/L，瓊脂粉20.0 g/L，葡萄糖20.0 g/L)培養真菌。

取無菌濾紙片(直徑為5 mm)，滴加6 μL樣品溶液，移入已接菌的培養基平板上。真菌平板放置在28 °C培養24 h后觀察抑菌圈大小，細菌平板放置在37 °C培養12 h后觀察抑菌圈大小。用十字交叉法測量抑菌圈直徑，重復平行做3次，抑菌圈直徑測量3次求平均值。

1.5.2 MIC測定(常量肉湯稀釋法)[8,9]

將金黃色葡萄球菌菌株接種到LB液體培養基中，28 °C培養1 d左右。選取對數生長期的菌液，通過測定菌液在600 nm波長處的吸光值將菌液濃度調整到1×105CFU/mL左右。采用試管二倍稀釋法，以LB培養基為稀釋溶液，配制化合物1～7和卡那霉素的濃度分別為 1 000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91、1.96、0.98 μg/mL。無菌對照和受試菌生長對照均不加藥液。除無菌對照外，向各管中添加等體積濃度約為1×105CFU/mL菌懸液，則各管中化合物濃度分別減少為500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91、1.95、0.98、0.49 μg/mL。將各管置于37 ℃條件下恒溫培養。18～24 h后，以肉眼觀察清澈透明的試管為無菌生長，無菌生長的最大稀釋度的藥物濃度為該化合物對該菌的MIC，重復平行3次。

2 結果與分析

2.1 化合物結構鑒定

化合物1白色粉末(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z=781.360 8[M+Na]+(Calcd for C15H22O4，781.361 7)分子式為C37H58O16，不飽和度值為9。在紅外譜圖中1 711、1 233 cm-1處有吸收，提示有αβ-不飽和羰基和環氧體系的存在[10]。在1H NMR譜圖中，低場區域只存在δH6.77 (H-3)和δH5.99(H-2)兩個氫信號，且二者存在耦合相關信號(J=15.5 Hz)，推斷可能存在一個反式雙鍵。結合13C NMR和DEPT NMR譜圖，可將37個碳信號分別歸屬為：五個季碳信號(δC213.5、165.1、153.8、85.9、78.6)，十八個叔碳信號(δC120.5、151.9、102.3、100.3、86.9、80.9、80.5、79.8、72.8、69.3、69.0、68.6、66.1、58.6、56.2、47.4、40.4、33.2)，五個仲碳信號(δC66.4、39.9、32.2、31.3、26.3)，九個伯碳信號(δC61.1、57.9、20.8、20.5、17.9、17.8、17.6、14.1、12.8)。在二維譜圖中，根據1H-1H COSY譜圖中相關信號，可以發現存在H-2/H-3/H-4(H-17)/H-5/H-6(H-18)/H-7/H-8、H-10/H-11/H-12/H-13/H-14(H-20)/H-15/H-16和H-1′′/H-2′′/H-3′′/H-4′′/H-5′′/H-6′′耦合體系。同時還發現存在H-1′/H-2′、H-4′/H-5′/H-6′、H-7′/H-8′耦合信號片段。在HMBC中，H-1′、H-4′、H-8′與C-3′存在相關信號，H-1′與C-5、H-5與C-1′存在相關信號，據此推斷aldgarose片段存在并且連接在C-5。同時，H-8′′與C-3′′、H-7′′與C-2′′、H-1′′與C-5′′分別存在HMBC相關信號，以及H-1′′與C-20、H-20與C-1′′的HMBC相關信號證實allopyranose片段存在并且連接在C-20。H-6與C-8、H-19與C-8、H-19與C-9、H-11與C-9的相關HMBC信號證實C-7/C-8(C-19)/C-9/C-10連接在一起。H-3與C-1、H-2與C-1、H-15與C-1的相關HMBC信號證實雙鍵碳C-2、C-3與C-1連接在一起，且C-1與C-16通過氧原子連接在一起。據此可以確定十六元內酯環的存在，據C-12和C-13化學位移的大小(δC58.6和56.2)推測在C-12和C-13處存在三元氧環結構。通過文獻調研該結構與aldgamycin E(化合物2)結構高度類似，僅在8號位被羥基化。在所有的Aldgamycins類化合物中，8號位僅有兩種取代形式，即僅被甲基取代，或同時被甲基和羥基取代。上述兩種取代方式中，甲基總是朝向面內的，據此可推斷aldgamycin P的8號位中，甲基朝內，羥基朝外。綜上，化合物1的結構鑒定為圖1所示，命名為aldgamycin P，其關鍵的COSY和HMBC數據見圖1。

化合物1的詳細結構鑒定數據原始圖譜可從本刊官網免費下載(www.trcw.ac.cn)

圖1 化合物1～7的化學結構以及化合物1關鍵COSY、HMBC示意圖Fig.1 The chemical structures of compounds 1-7 and key COSY,HMBC correlations of compound 1

化合物2白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z765[M+Na]+，m/z391[(M+K+H)/ 2]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：6.73(dd，J=15.5，10.5 Hz，1H，H-3)，5.87(d，J=15.4 Hz，1H，H-2)，5.32(dq，J=9.7，6.2 Hz，1H，H-15)，4.65(d，J=7.7 Hz，1H，H-1′)，4.56(d，J=7.7 Hz，1H，H-1′′)，4.39(q，J=6.5 Hz，1H，H-7′)，4.13(dd，J=10.0，3.8 Hz，1H，H-20a)，3.89(m，1H，H-5′)，3.76(t，J=3.1 Hz，1H，H-3′′)，3.64(m，1H，H-20b)，3.62(s，3H，8′′-CH3)，3.55(s，3H，7′′-CH3)，3.52(m，1H，H-5′′)，3.48(m，1H，H-2′)，3.43(d，J=9.5 Hz，1H，H-5)，3.20(m，1H，H-2′′)，3.08(dd，J=7.7，2.9 Hz，1H，H-4′′)，2.83(dt，J=8.3，2.5 Hz，1H，H-12)，2.73(m，2H，H-4，H-10a)，2.54(m，2H，H-8，H-13)，2.10(m，1H，H-11a)，2.03(m，1H，H-10b)，1.86(dd，J=14.3，2.2 Hz，1H，H-4′)，1.78 ～ 1.62(overlap，3H，H-7a，H-4′)，1.59(d，J=6.4 Hz，3H，8′-CH3)，1.53(m，1H，H-6)，1.49 ～ 1.38(overlap，3H，H-7b，H-14，H-11b)，1.35(d，J=6.3 Hz，3H，16-CH3)，1.24(m，6H，17-CH3，19-CH3)，1.19(d，J=6.6 Hz，3H，6′-CH3)，1.11(d，J=6.9 Hz，3H，6′′-CH3)，0.96(d，J=6.6 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：213.4(C-9)，165.7(C-1)，154.0(C-9′)，150.7(C-3)，121.5(C-2)，101.3(C-1′)，101.0(C-1′′)，86.0(C-3′)，84.8(C-5)，82.0(C-2′′)，81.4(C-7′)，79.7(C-3′′)，72.8(C-4′′)，71.8(C-5′′)，70.9(C-2′)，70.0(C-15)，67.4(C-20)，67.3(C-5′)，61.8(C-8′′)，59.8(C-7′′)，59.7(C-12)，58.0(C-13)，48.6(C-14)，45.6(C-8)，41.2(C-4)，41.2(C-4′)，34.8(C-6)，33.5(C-10)，32.5(C-7)，26.7(C-11)，20.7(C-6′)，18.7(C-16)，18.6(C-6′′)，18.2(C-19)，17.9(C-18)，17.1(C-17)，13.8(C-8′)。以上數據與文獻[11]報道一致，故鑒定為aldgamycin E。

化合物3白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z755[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.78(dd，J=15.5，10.2 Hz，1H，H-3)，5.95(d，J=15.5 Hz，1H，H-2)，5.14(m，1H，H-15)，4.44(d，J=8.4 Hz，1H，H-1′′)，4.42(d，J=9.3 Hz，1H，H-1′)，3.89(m，1H，H-20a)，3.69(m，1H，H-5′)，3.65(m，1H，H-3′′)，3.54 ～ 3.51(overlap，3H，H-7′，H-20b，H-5′′)，3.41(m，1H，H-2′)，3.45(s，3H，8′′-CH3)，3.39(s，3H，7′′-CH3)，3.33(m，1H，H-5)，3.06(dd，J=9.5，2.6 Hz，1H，H-4′′)，2.99(dd，J=8.1，2.8 Hz，1H，H-2′′)，2.83(dt，J=7.5，2.6 Hz，1H，H-14)，2.74～2.62(overlap，3H，H-4，H-10a，H-13)，2.15(ddd，J=16.2，9.6，5.9 Hz，1H，H-10b)，1.97(m，1H，H-11a)，1.80(d，J=13.8 Hz，1H，H-4′)，1.59(d，J=12.8 Hz，2H，H-6a，H-6b)，1.40 ～ 1.29(overlap，5H，H-7a，H-7b，H-11b，H-14，H-4′)，1.24(d，J=6.3 Hz，3H，16-CH3)，1.22(s，3H，19-CH3)，1.14(d，J=6.4 Hz，3H，17-CH3)，1.11 ～ 1.06(overlap，6H，6′-CH3，6′′-CH3)，0.97(d，J=6.3 Hz，3H，8′-CH3)，0.91(d，J=6.8 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：213.6(C-9)，165.2(C-1)，152.3(C-3)，120.3(C-2)，102.8(C-1′)，100.3(C-1′′)，86.5(C-5)，80.6(C-2′′)，79.8(C-3′′)，78.7(C-8)，74.6(C-7′)，72.8(C-3′)，69.3(C-2′)，69.3(C-4′′)，68.6(C-5′′)，66.7(C-15)，66.5(C-20)，65.6(C-5′)，61.1(C-8′′)，58.7(C-7′′)，58.1(C-12)，58.0(C-13)，48.6(C-14)，47.5(C-4)，40.4(C-4′)，35.5(C-7)，33.1(C-6)，31.2(C-10)，26.1(C-11)，25.7(C-19)，21.3(C-6′)，21.2(C-17)，17.9(C-18)，17.8(C-16)，17.6(C-8′)，16.5(C-6′′)。化合物3的碳氫化學位移與化合物1相比，差異主要體現在C-5所連糖的結構不一致。以上數據與文獻[12]報道一致，故鑒定為aldgamycin J。

化合物4白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z739[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.74(dd，J=15.4，10.6 Hz，1H，H-3)，6.02(d，J=15.4 Hz，1H，H-2)，5.16(m，1H，H-15)，4.44(overlap，2H，H-1′，H-1′′)，3.90(dd，J=10.1，3.8 Hz，1H，H-20a)，3.69(m，1H，H-5′)，3.65(t，J=2.8 Hz，1H，H-3′′)，3.54 ～ 3.50(overlap，3H，H-7′，H-20b，H-5′′)，3.45(s，3H，8′′-CH3)，3.41(m，1H，H-2′)，3.39(s，3H，7′′-CH3)，3.36(m，1H，H-5)，3.07(dd，J=9.5，2.7 Hz，1H，H-4′′)，2.99(dd，J=8.0，2.8 Hz，1H，H-2′′)，2.80(dd，J=6.6，4.3 Hz，1H，H-12)，2.73 ～ 2.67(overlap，2H，H-4，H-13)，2.59(dd，J=9.2，2.0 Hz，1H，H-10a)，2.46 ～ 2.36(m，2H，H-10b，H-11a)，1.88(overlap，3H，H-4′a，H-6，H-7a)，1.77 ～ 1.64(m，1H，H-7b)，1.43 ～ 1.27(overlap，3H，H-11b，H-14，H-4′b)，1.24(d，J=6.2 Hz，3H，16-CH3)，1.16(d，J=6.5 Hz，3H，17-CH3)，1.11 ～ 1.06(overlap，9H，6′-CH3，6′′-CH3，19-CH3)，0.98(d，J=6.4 Hz，3H，8′-CH3)，0.88(d，J=6.3 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：213.1(C-9)，165.2(C-1)，152.3(C-3)，120.3(C-2)，102.9(C-1′)，100.4(C-1′′)，84.5(C-5)，80.6(C-2′′)，79.8(C-3′′)，74.6(C-7′)，72.8(C-3′)，69.4(C-4′′)，69.3(C-2′)，68.7(C-5′′)，66.6(C-15)，66.5(C-20)，65.6(C-5′)，61.0(C-8′′)，59.0(C-7′′)，58.0(C-12)，57.3(C-13)，48.6(C-14)，47.5(C-8)，40.8(C-4)，40.1(C-4′)，35.4(C-7)，34.4(C-6)，32.2(C-10)，26.3(C-11)，21.4(C-6′)，21.1(C-17)，18.0(C-8′)，17.9(C-18)，17.8(C-16)，17.1(C-19)，16.5(C-6′′)。以上數據與文獻[11]報道一致，故鑒定為aldgamycin K。

化合物5白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z723[M+Na]+，m/z370[(M+K+H)/ 2]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：6.71(dd，J=15.6，9.9 Hz，1H，H-3)，5.80(d，J=15.5 Hz，1H，H-2)，5.52(ddd，J=13.6，8.4，4.6 Hz，1H，H-12)，5.30(dd，J=15.3，9.3 Hz，1H，H-13)，5.07(m，1H，H-15)，4.66(d，J=7.6 Hz，1H，H-1′)，4.56(d，J=7.7 Hz，1H，H-1′′)，3.95(m，2H，H-20a，H-5′)，3.74(t，J=3.1 Hz，1H，H-3′′)，3.70 ～ 3.62(m，2H，H-2′，H-7′)，3.61(s，3H，8′′-CH3)，3.53(s，3H，7′′-CH3)，3.50 ～ 3.37(overlap，4H，H-5，H-20b，H-6′，H-5′′)，3.20(d，J=10.1 Hz，1H，H-4′′)，3.05(dd，J=7.7，2.9 Hz，1H，H-2′′)，2.71(m，1H，H-4)，2.52(m，1H，H-10a)，2.34(m，1H，H-14)，2.27 ～ 2.07(overlap，3H，H-10b，H-11a，H-11b)，1.67(m，1H，H-7a)，1.53(m，2H，H-6，H-4′a)，1.40(m，1H，H-4′b)，1.34(m，1H，H-7b)，1.28(m，6H，16-CH3，8′-CH3)，1.25(d，J=6.1 Hz，3H，6′′-CH3)，1.19(m，6H，17-CH3，6′-CH3)，1.10(d，J=6.9 Hz，3H，19-CH3)，0.99(d，J=6.7 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：213.8(C-9)，165.7(C-1)，150.5(C-3)，132.8(C-12)，128.7(C-13)，121.7(C-2)，101.8(C-1′)，101.1(C-1′′)，86.1(C-5)，81.9(C-2′′)，79.9(C-3′′)，74.0(C-3′)，73.9(C-7′)，72.8(C-4′′)，72.7(C-2′)，70.7(C-5′′)，70.0(C-20)，69.9(C-15)，67.1(C-5′)，61.8(C-8′′)，59.9(C-7′′)，50.3(C-14)，44.9(C-8)，40.9(C-4)，39.5(C-4′)，38.8(C-10)，34.7(C-6)，33.0(C-7)，26.2(C-11)，20.9(C-6′)，18.9(C-19)，18.7(C-17)，18.6(C-6′′)，18.3(C-16)，17.9(C-8′)，17.2(C-18)。以上數據與文獻[11]報道一致，故鑒定為aldgamycin L。

化合物6白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z725[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.77(dd，J=15.5，10.2 Hz，1H，H-3)，5.97(d，J=15.5 Hz，1H，H-2)，5.14(dd，J=8.9，5.9 Hz，1H，H-15)，4.45(d，J=8.0 Hz，1H，H-1′′)，4.16(d，J=7.6 Hz，1H，H-1′)，3.90(dd，J=10.0，4.2 Hz，1H，H-20a)，3.66(t，J=2.8 Hz，1H，H-3′′)，3.53(m，2H，H-20b，H-5′′)，3.46(s，3H，8′′-CH3)，3.39(s，3H，7′′-CH3)，3.35(overlap，3H，H-5，H-2′，H-3′)，3.31(s，3H，7′-CH3)，3.14(ddd，J=11.2，9.1，5.2 Hz，1H，H-4′′)，3.07(dd，J=9.4，2.6 Hz，1H，H-2′′)，3.00(m，1H，H-5′)，2.84(dt，J=7.6，2.6Hz，1H，H-13)，2.69(overlap，3H，H-4，H-10a，H-12)，2.14(ddd，J=16.2，9.8，5.8 Hz，1H，H-10b)，2.01(overlap，3H，H-7a，H-11a，H-4′a)，1.78(dd，J=20.8，9.1 Hz，1H，H-7b)，1.59(m，1H，H-11b)，1.44 ～ 1.28(overlap，3H，H-6，H-14，H-4′b)，1.24(m，6H，16-CH3，19-CH3)，1.13(overlap，9H，17-CH3，6′-CH3，6′′-CH3)，0.90(d，J=6.7 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：213.5(C-9)，165.2(C-1)，152.1(C-3)，120.4(C-2)，104.0(C-1′)，100.3(C-1′′)，86.8(C-5)，80.5(C-2′′)，80.4(C-2′)，79.8(C-8)，79.2(C-3′)，78.7(C-3′′)，74.0(C-5′)，72.8(C-4′′)，69.3(C-5′′)，68.6(C-15)，66.6(C-20)，66.5(C-8′′)，61.1(C-7′′)，58.7(C-12)，58.0(C-13)，56.5(C-7′)，47.6(C-14)，47.4(C-4)，38.0(C-4′)，37.3(C-7)，33.2(C-6)，31.2(C-10)，26.1(C-19)，26.0(C-11)，20.9(C-17)，17.9(C-18)，17.8(C-16)，17.7(C-6′)，17.5(C-6′′)。以上數據與文獻[12]報道一致，故鑒定為GERI-155。

化合物7白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z723[M+Na]+；1HNMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.08(d，J=15.4 Hz，1H，H-10)，6.56(dd，J=15.5，10.3 Hz，1H，H-3)，6.32(dd，J=15.4，9.3 Hz，1H，H-11)，6.13(d，J=15.3 Hz，1H，H-2)，5.18(m，1H，H-15)，4.50(d，J=8.0 Hz，1H，H-1′′)，4.38(s，1H，H-20a)，4.13(d，J=7.6 Hz，1H，H-1′)，3.96(dd，J=10.4，2.9 Hz，1H，H-20b)，3.67(t，J=2.9 Hz，1H，H-3′′)，3.61 ～ 3.51(m，2H，H-5′，H-5′′)，3.46(s，3H，8′′-CH3)，3.41(s，3H，7′′-CH3)，3.30(s，3H，7′-CH3)，3.21 ～ 2.93(overlap，6H，H-5，H-13，H-2′，H-3′，H-2′′，H-4′′)，2.74(td，J=10.2，5.8 Hz，1H，H-4)，2.02(m，2H，H-7a，H-4′a)，1.80(d，J=5.6 Hz，1H，H-7b)，1.58(m，1H，H-14)，1.37(t，J=10.0 Hz，1H，H-4′b)，1.30(m，3H，16-CH3)，1.26(d，J=6.3 Hz，3H，19-CH3)，1.14(overlap，10H，H-6，17-CH3，6′-CH3，6′′-CH3)，0.92(d，J=6.7 Hz，3H，18-CH3);13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：200.0(C-9)，165.0(C-1)，151.9(C-3)，143.7(C-11)，127.4(C-10)，120.8(C-2)，103.7(C-1′)，100.5(C-1′′)，87.3(C-5)，80.6(C-2′′)，80.4(C-3′)，80.0(C-3′′)，78.1(C-8)，74.1(C-2′)，72.8(C-5′′)，69.3(C-15)，67.9(C-5′)，66.5(C-20)，61.1(C-8′′)，58.5(C-13)，58.1(C-7′′)，58.1(C-12)，56.5(C-7′)，48.5(C-14)，40.9(C-4)，37.3(C-7)，36.5(C-4′)，33.7(C-6)，27.7(C-19)，22.7(C-6′)，20.8(C-18)，18.7(C-16)，18.0(C-17)，17.8(C-6′′)。以上數據與文獻[4]報道一致，故鑒定為chalcomycin。

2.2 活性測試結果

濾紙片抑菌活性實驗顯示，化合物1～7對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌有顯著的抑制作用(見表1)，其中化合物2、6、7對兩株細菌的抑制作用強于陽性對照卡那霉素。而化合物1、3、4、5對金黃色葡萄球菌的抑制作用與卡那霉素的抑制效果相當，抑菌圈大小均為14～15 mm。化合物1～7對于被測試的兩株真菌小麥赤霉病菌和玉米小斑病菌沒有表現出抑制作用。

在測定化合物對細菌的MIC實驗中，由于化合物量太少，因此只測定了化合物1～4和7對金黃色葡萄球菌的MIC值。

MIC實驗測定結果如表2所示，化合物1～4和7對金黃色葡萄球菌的抑制效果基本與卡那霉素相近。其中，化合物2和7對于金黃色葡萄球菌的MIC值分別為0.49和0.98 μg/mL，強于卡那霉素對金黃色葡萄球菌的MIC值(3.91 μg/mL)。化合物1對于金黃色葡萄球菌的MIC值為7.81 μg/mL，表現出中等強度的抑菌活性。

注：NT意味著沒有進行該試驗。

Note:NT means this test was not carried out.

表2 化合物1～7對金黃色葡萄球菌的MIC 值

注：NT意味著該沒有進行該試驗。

Note:NT means this test was not carried out.

3 討論

我們從土壤鏈霉菌Streptomycessp.KIB-K1發酵液中共分離得到7個大環內酯類化合物，其中化合物1為首次報道的大環內酯，命名為aldgamycin P(1)。化合物1～7對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌都有顯著的抑制作用，而對被測試的兩株真菌都沒有表現出抑制活性。新化合物1對于金色葡萄球菌的MIC值分別為7.81 μg/mL，接近陽性對照卡那霉素的MIC值(3.91 μg/mL)。Jiang[10]、Wang[11]、Kim[13]的研究表明，Aldgamycins類化合物對大部分的革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌有很好的抑制作用，而對真菌一般不表現出活性，這與本實驗結果相符。同時，Wang[11]在研究Aldgamycins類化合物的構效關系時，提出環氧體系對于抑菌活性有促進作用，同時糖片段的不同對于抑菌活性強弱并沒有直接關系的假設。我們分到的7個化合物中，只有化合物5不具備環氧體系，且其抑菌活性相對其他化合物較弱；化合物1和3、2和4之間也沒有明顯活性強弱的差距，本實驗結果一定程度上為該假設提供了數據支持。

活性化合物aldgamycin P的發現，為aldgamycins家族類化合物增添了新的成員，豐富了活性十六元大環內酯化合物的種類，為此類化合物后續深入的開發和利用提供了菌株資源，是潛在的抗生素藥物資源。