視黃酸對大鼠肝癌細胞γ-丁基甜菜堿雙加氧酶的表達及肉堿合成的影響

屈尚藍，任偉偉，宋流東，馮維楊

1昆明醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院；2昆明醫(yī)科大學藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室，昆明650500

視黃酸(retinoic acid，RA)是天然維生素A在哺乳動物體內(nèi)代謝產(chǎn)生的活性衍生物，包括全反視黃酸(all-trans-retinoic acid，atRA)、9-順式視黃酸(9-cis-retinoic acid，9-cis-RA)和13-順式視黃酸(13-cis-retinoic acid，13-cis-RA)三種異構(gòu)體，三者可相互轉(zhuǎn)變[1]。RA不僅防癌、抗癌，在脂代謝調(diào)節(jié)中也具有重要作用[1-4]。研究發(fā)現(xiàn)，維甲酸X受體(retinoid x receptors，RXRs)與過氧化物酶體增殖激活物受體(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)所形成的異源二聚體在脂代謝調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[1-4]。在哺乳動物體內(nèi)，RXRs包括RXRα,RXRβ和RXRγ三種亞型，9-cis-RA是RXRs的天然配體[1]。

L-肉堿在真核細胞的脂肪酸分解代謝中起著不可或缺的作用，其主要功能是作為載體將活化脂肪酸轉(zhuǎn)運到線粒體中進行β-氧化。在哺乳動物中，參與脂肪酸轉(zhuǎn)運的肉堿可以由生物體自身合成[6]。γ-丁基甜菜堿雙加氧酶(γ-butyrobetainedioxygenase,γ-BBD,EC 1.14.11.1)是大鼠和人肉堿生物合成途徑中一個重要的關(guān)鍵酶，主要在肝臟中催化γ-甜菜堿到L-肉堿的立體特異性羥化[6]。研究發(fā)現(xiàn)，γ-BBD抑制劑能抑制L-肉堿的生物合成并降低脂肪酸的轉(zhuǎn)運和氧化率[7,8]。這些研究表明，γ-BBD在大鼠和人肝臟中所催化的反應(yīng)對肉堿合成及脂肪酸氧化分解具有重要作用。

據(jù)報道，肝癌細胞具有明顯的脂代謝重編程現(xiàn)象[9,10]，而且多項研究已表明RA能增強脂肪酸分解代謝[4,11,12]。但是，γ-BBD的表達在肝癌細胞內(nèi)是否隨脂代謝調(diào)節(jié)而被調(diào)節(jié)、是否受RA影響目前尚不清楚。本研究用二乙基亞硝胺(diethylnitrosamine,DEN)建立大鼠原發(fā)性肝癌模型，通過western blotting等技術(shù)研究了肝癌模型組織中γ-BBD的基因表達；探討了13-cis-RA對大鼠肝癌細胞γ-BBD基因表達的影響，為闡明RA對肝癌細胞肉堿合成的影響提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實驗細胞

RH-35大鼠肝癌細胞(KCB 92022YJ)，購于中國科學院昆明動物研究所。

1.2 實驗動物

雄性Sprague Dawley(SD)大鼠，購于昆明醫(yī)科大學SPF實驗動物中心，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(滇)K2015-0002，動物合格證號：53004100000036。

1.3 試劑

N-Nitrosodiethylamine(sigma,N0756)；13-cis-RA(sigma,R3255)；DMEM,High Glucose,GlutaMAXTM,Pyruvate(Gibco,10569010)；胎牛血清(Gibco,10270106)；0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液(索萊寶,T1300)；1×PBS緩沖液(PH7.2～7.4)(索萊寶,P1020)；RIPA組織細胞裂解液(索萊寶,R0010)；BCA蛋白定量試劑盒(天根,PA115)；Anti-Actin antibody(SAB,21338)；Anti-Gamma-Butyrobetaine Dioxygenase antibody(abcam,ab96348)；Anti-Retinoid X Receptor Gamma antibody(abcam,ab53162)；Goat Anti-Rabbit IgG-Hrp conjugated(SAB,L3012)；Pro-light HRP化學發(fā)光檢測試劑(天根，PA112)；細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(碧云天，C1052)；動物組織總RNA提取試劑盒(天根,DP413)；TRNzolA+總RNA提取試劑(天根,DP421)；Recombinant DNase I(寶生物，2270A)；RevertAid H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit(Thermo,K1632)；LightCycler?480 SYBR Green I Master(Roche,04707516001)。

1.4 儀器

超高速流式細胞分析分選工作站(Partec,德國)；微量核酸蛋白定量儀(BDT,美國)；化學發(fā)光成像系統(tǒng)(Bio-Rad，美國)；實時熒光定量PCR儀(ABI7300,美國)。

2 實驗方法

2.1 DEN誘發(fā)肝癌

40只雄性SD大鼠，體重160～180 g，適應(yīng)性飼養(yǎng)4天后，隨機分為肝癌模型組(n=20)和正常對照組(n=20)。在常規(guī)飲食、飲水基礎(chǔ)上，模型組腹腔注射50 mg/kg公斤體重DEN[13]，每周一次；正常對照組腹腔注射0.9%NaCl溶液，每周一次。DEN誘導(dǎo)肝硬化和肝癌形成期間，每兩周處死一只大鼠，跟蹤觀察肝硬化和肝癌形成情況，至16周后將所有動物處死。

2.2 肝組織HE染色

肝組織用(10%)甲醛固定、脫水、石蠟包埋切片，按常規(guī)操作用蘇木精-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察肝組織的細胞形態(tài)學變化。

2.3 細胞培養(yǎng)

用含10%胎牛血清的DMEM于5%CO2、37 ℃條件下傳代培養(yǎng)RH-35細胞。待細胞在25 cm2直角斜頸培養(yǎng)瓶中長滿后，棄去培養(yǎng)基，用1×PBS緩沖液(pH7.2～7.4，0.01 mmol/L)清洗細胞兩次，加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，待大部分細胞變成圓形時輕輕拍打培養(yǎng)瓶使細胞懸浮，然后立即加入2 mL完全培養(yǎng)基終止消化。將胰蛋白酶消化細胞轉(zhuǎn)移到50 mL離心管中1 000 rpm離心5 min，棄去上清液，加入13 mL完全培養(yǎng)基并吹打均勻，再將細胞轉(zhuǎn)移至6孔板或25 cm2直角斜頸培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。待細胞長滿80%左右時，視黃酸處理組細胞在培養(yǎng)基中加入13-cis-RA使其終濃度為1 μmol/L[14,15]，對照組細胞在培養(yǎng)基中按常規(guī)繼續(xù)培養(yǎng)。

2.4 流式細胞術(shù)測定細胞周期

視黃酸處理組(n=3)于13-cis-RA處理大鼠肝癌細胞48 h后，與對照組細胞(n=3)一起以PI單染法流式細胞術(shù)分析RH-35細胞的細胞周期進程。所有細胞用胰酶消化收集后，經(jīng)PBS溶液洗滌并加入1 mL冰浴預(yù)冷的70%乙醇，4 ℃固定12～24 h，細胞再經(jīng)PBS洗滌后加入按細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒說明書操作配制好的碘化丙啶染色液0.5 mL，37 ℃避光溫浴30 min，用流式細胞儀檢測并分析DNA含量和細胞周期進程。

2.5 蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測γ-BBD和RXRγ翻譯水平的表達

通過Western blotting技術(shù)對DEN誘發(fā)的肝癌模型組(n=12)、正常肝組織對照組(n=13)的γ-BBD和RXRγ的蛋白表達水平進行測定。分別在視黃酸處理12 h(n=8)、24 h(n=8)和48 h(n=8)后提取RA處理組和對照組(n=24)細胞總蛋白，通過western blotting技術(shù)對γ-BBD和RXRγ的蛋白表達水平進行測定。肝組織按RIPA說明書每20 mg加入150～250 μL組織細胞裂解液，6孔板培養(yǎng)肝細胞按每孔細胞加入150～250 μL裂解液裂解肝細胞，裂解液經(jīng)離心后取上清用BCA法測定總蛋白濃度。取含35 μg總蛋白的裂解液于12%分離膠、5%濃縮膠中進行SDS-PAGE電泳，采用半干轉(zhuǎn)移法將總蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。轉(zhuǎn)膜后用5%脫脂奶粉溶液于室溫條件下封閉2 h，按抗體說明書加入適量I抗4 ℃孵育過夜，用含1‰Tween-20的TBS-T洗膜3次，再加入II抗(1∶10 000)室溫孵育2 h。用TBS洗膜2次，每次10 min。用化學發(fā)光試劑顯影，Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件進行灰度分析，以β-actin作為內(nèi)參進行相對半定量分析。

2.6 實時熒光定量PCR技術(shù)檢測γ-BBD和RXRγ轉(zhuǎn)錄水平的表達

通過real-time PCR技術(shù)對DEN誘發(fā)的肝癌模型組(n=12)、正常肝組織對照組(n=13)的γ-BBD和RXRγ的mRNA表達水平進行測定。分別在視黃酸處理24 h(n=8)和48 h(n=8)后提取RA處理組和對照組(n=16)細胞總RNA，通過real-time PCR技術(shù)對γ-BBD和RXRγ的mRNA表達水平進行測定。肝組織總RNA提取按動物組織總RNA提取試劑盒說明書進行操作，培養(yǎng)肝細胞總RNA提取按TRNzol-A+總RNA提取試劑盒說明書進行操作。所有總RNA樣品先用瓊脂糖凝膠電泳鑒定質(zhì)量，隨后定量、用DNAase I消化基因組DNA。總RNA樣品再定量后按RevertAid H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒說明書操作將肝細胞內(nèi)的mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，20 μL逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中加入RNA模板2 μg、1 μL通用引物Oligo(dT)18。所有cDNA溶液經(jīng)定量后按LightCycler?480 SYBR Green I Master說明書計算并配制PCR反應(yīng)體系，20 μLPCR反應(yīng)體系中引物的終濃度為0.5 μmol/L、cDNA模板加70 ng。每個樣本至少做3個平行反應(yīng)。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性5 min，60～62 ℃退火10 s，72 ℃延伸30 s，循環(huán)45次。PCR反應(yīng)結(jié)束后，以β-actin作為內(nèi)參，用2-△△Ct定量方法對基因表達產(chǎn)物進行相對定量分析。β-actin、γ-BBD和RXRγ的引物序列見表1。

2.7 統(tǒng)計學處理方法

采用SPSS22.0軟件進行統(tǒng)計學分析，實驗結(jié)果以平均值±標準差表示，組間比較采用t檢驗或單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 實驗結(jié)果

3.1 DEN誘發(fā)大鼠原發(fā)性肝癌

在接受DEN給藥方案的大鼠中，大鼠肝臟的外觀于12周時開始出現(xiàn)明顯變化，肝表面失去原有光澤，顏色變淺、表面粗糙，可見部分結(jié)節(jié)(圖1A)。至DEN給藥14周時，肝表面更粗糙，且結(jié)節(jié)數(shù)量明顯增多、增大(圖1B)。于DEN給藥16周時，肝臟表面結(jié)節(jié)進一步增多且出現(xiàn)數(shù)量較多的大結(jié)節(jié)(圖1C)，但對照組肝臟外觀無任何變化(圖1D)。取肝組織行HE染色組織學檢查，DEN處理14周時肝組織在光鏡下表現(xiàn)為肝臟內(nèi)彌漫性纖維組織增生，炎性細胞浸潤，假小葉形成，小葉內(nèi)肝細胞排列雜亂，部分細胞出現(xiàn)異型性(圖2A)。尤其是，在DEN處理16周后肝組織在光鏡下明顯表現(xiàn)為細胞大小不一，排列雜亂，細胞核大、深染，形態(tài)怪異，異型性細胞明顯增多，胞漿嗜堿性，血竇閉塞，部分細胞壞死(圖2B)；但0.9%NaCl給藥14周和16周的對照組肝細胞則有規(guī)律地排列成條索狀，細胞及細胞核大小一致，染色均勻(圖2C，2D)。以上實驗表明按50 mg/kg公斤體重的DEN腹腔給藥方案在藥物作用14周時肝臟出現(xiàn)明顯肝硬化和組織增生，在藥物作用16周時大鼠肝組織在進行性肝硬化基礎(chǔ)之上出現(xiàn)癌變的形態(tài)學變化。

表1 PCR反應(yīng)中使用的引物和條件

圖1 DEN處理的大鼠肝組織與對照肝組織Fig.1 Rat liver tissue treated with DEN and control liver tissue注：(A)DEN處理12周的肝組織；(B)DEN處理14周的肝組織；(C)DEN處理16周的肝組織；(D)0.9%NaCl處理16周的肝組織。Note:(A)Rat liver tissue treated with DEN for 12 weeks；(B)Rat liver tissue treated with DEN for 14 weeks；(C)Rat liver tissue treated with DEN for 16 weeks；(D)Rat liver tissue treated with 0.9%NaCl for 16 weeks.

圖2 肝組織HE染色(×400)Fig.2 Liver tissue HE staining(×400)注：(A)DEN處理14周的肝組織；(B)DEN處理16周的肝組織；(C)0.9%NaCl處理14周的肝組織；(D)0.9%NaCl處理16周的肝組織。Note:(A)Rat liver tissue treated with DEN for 14 weeks；(B)Rat liver tissue treated with DEN for 16 weeks(C)Rat liver tissue treated with 0.9%NaCl for 14 weeks；(D)Rat liver tissue treated with 0.9%NaCl for 16 weeks.

3.2 γ-BBD在DEN誘發(fā)的大鼠原發(fā)性肝癌中的表達

與對照組相比，在接受DEN給藥方案的大鼠中，肝癌模型組γ-BBD的蛋白表達水平顯著低于對照組(P<0.05)(圖3)；熒光定量PCR分析也發(fā)現(xiàn)肝癌模型組γ-BBD的mRNA豐度明顯低于對照組(P<0.05)(圖4A)。這些結(jié)果表明，DEN誘發(fā)的大鼠原發(fā)性肝癌細胞下調(diào)了γ-BBD的表達。

圖3 大鼠肝組織BBD的western blotting 分析Fig.3 Western blotting analysis of BBD in rat liver tissue

圖4 大鼠肝組織BBD和RXRγ的qRT-PCR 分析Fig.4 qRT-PCR analysis of BBD and RXRγ in rat liver tissue

3.3 RXRγ在DEN誘發(fā)的大鼠原發(fā)性肝癌中的表達

與對照組相比，肝癌模型組RXRγ的蛋白表達水平顯著低于對照組(P<0.05)(圖5)，熒光定量PCR分析也發(fā)現(xiàn)RXRγ的mRNA豐度明顯低于對照組(P<0.05)(圖4B)。這些結(jié)果表明，DEN誘發(fā)的大鼠原發(fā)性肝癌細胞也下調(diào)了RXRγ的表達。

圖5 大鼠肝組織RXRγ的Western blotting 分析Fig.5 Western blotting analysis of RXRγ in rat liver tissue

3.4 13-cis-RA對RH-35細胞RXRγ表達的影響

RH-35細胞經(jīng)1 μmol/L13-cis-RA處理12～48 h后，與對照組比較，RXRγ的蛋白表達水平顯著增加，13-cis-RA處理48 h后RXRγ蛋白表達水平增加最為顯著(P<0.05，圖6)。為了進一步確定13-cis-RA對RH-35細胞RXRγ表達的影響是否發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，實時熒光定量PCR技術(shù)被用來分析RXRγ轉(zhuǎn)錄水平的表達，結(jié)果顯示，在13-cis-RA處理24、48 h后，與對照組相比，13-cis-RA處理組RXRγmRNA的豐度明顯升高(P<0.05，圖7A)。這些實驗結(jié)果表明，13-cis RA能誘導(dǎo)并上調(diào)肝癌細胞RXRγ的表達。

圖6 13-cis-RA對RH-35細胞RXRγ蛋白表達的影響Fig.6 The effects of 13-cis-RA on the expression of RXRγ protein in RH-35 cell

圖7 13-cis-RA對RH-35細胞γ-BBD mRNA和RXRγ mRNA表達的影響Fig.7 The effects of 13-cis-RA on the expression of γ-BBD mRNA and RXRγ mRNA in RH-35 cell

3.5 13-cis-RA對大鼠肝癌細胞細胞周期進程的影響

在用1 μmol/L的13-cis-RA處理大鼠肝癌細胞48 h后，與對照組相比較，13-cis-RA處理組的細胞G1期細胞數(shù)量分布明顯增加(P<0.05)，S期細胞數(shù)量分布顯著減少(P<0.05)(圖8)，細胞周期分析的定量結(jié)果也在表2中顯示。以上結(jié)果表明，1 μmol/L的13-cis-RA處理RH-35細胞48 h后，細胞周期明顯阻滯于G1期，大鼠肝癌細胞處于顯著的細胞增殖抑制狀態(tài)。

圖8 13-cis-RA對RH-35細胞周期進程的影響Fig.8 The effects of 13-cis-RA on RH-35 cell cycle progression注：(A)對照組；(B)13-cis-RA處理組。Note:(A)Control group;(B)13-cis-RA-treated group.

表2 13-cis-RA對RH-35細胞周期進程的影響

注：與空白對照組相比，*P< 0.05。

Note:Compared with control group,*P< 0.05.

3.6 13-cis RA對RH-35細胞γ-BBD表達的影響

RH-35細胞經(jīng)1 μmol/L 13-cis-RA作用12～48 h后，與對照組比較，γ-BBD的蛋白表達水平顯著增加，13-cis-RA處理48 h后γ-BBD蛋白表達水平增加最為顯著 (P<0.05，圖9)。但是，γ-BBD的蛋白表達水平在13-cis-RA處理12 h組與13-cis-RA處理24 h組之間無顯著性差異(P> 0.05，圖9)。為了進一步確定13-cis-RA對RH-35細胞γ-BBD表達的影響是否發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，實時熒光定量PCR技術(shù)被用來分析γ-BBD轉(zhuǎn)錄水平的表達，結(jié)果顯示，與對照組相比，在13-cis-RA處理24、48 h后，γ-BBD mRNA的豐度明顯升高(P<0.05，圖7B)。這些結(jié)果表明13-cis-RA在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上調(diào)了γ-BBD的表達。

圖9 13-cis-RA對RH-35細胞γ-BBD蛋白表達的影響Fig.9 The effects of 13-cis-RA on the of γ-BBD protein in RH-35 cell

4 結(jié)論

DEN誘發(fā)大鼠肝癌模型因其誘癌成功率高，誘發(fā)癌變的病理變化過程與各種原因引起的大鼠和人肝細胞癌變過程相似而被廣泛應(yīng)用[13,16]。不管是什么原因引起的肝癌，其發(fā)展過程一般都要經(jīng)歷肝硬化—再生性結(jié)節(jié)—腺瘤性增生—早期肝癌—進展期肝癌的病理變化過程[13,16]。臨床上或肝癌模型制備過程中常以肝臟宏觀的形態(tài)學變化、HE染色鏡下肝硬化形態(tài)學變化以及組織、細胞異型性增生的形態(tài)學特點作為判斷典型癌變肝組織的重要指標。本研究采用Seong Tae Park等[13]的研究方法制備大鼠原發(fā)性肝癌模型，肝臟于12周時開始出現(xiàn)肝硬化結(jié)節(jié)，至DEN給藥14周時，肝表面結(jié)節(jié)數(shù)增多、增大，HE染色可見彌漫性纖維組織增生、假小葉形成等典型的肝硬化表現(xiàn)。于DEN給藥16周時，肝臟表面出現(xiàn)明顯且數(shù)量較多的大結(jié)節(jié)，HE染色組織學檢查發(fā)現(xiàn)細胞大小不一，排列雜亂，細胞核大、深染，形態(tài)怪異，異型性明顯。因此，至誘癌16周結(jié)束時，大鼠肝組織已表現(xiàn)出典型的肝硬化基礎(chǔ)上癌變的病理學特征。而且，這些進行性變化的形態(tài)學特征與多項DEN誘發(fā)原發(fā)性肝癌的報道相似[13,16]。這說明50 mg/kg公斤體重的DEN腹腔給藥方案能成功誘發(fā)大鼠原發(fā)性肝癌。

L-肉堿作為脂肪酸分解代謝必不可少的載體，其合成有可能隨脂代謝重編程而被協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)。本研究用DEN誘發(fā)大鼠原發(fā)性肝癌，通過western blotting等技術(shù)分析了大鼠原發(fā)性肝癌模型γ-BBD的表達，結(jié)果證實了γ-BBD在進展期肝癌模型組織中轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的表達是下調(diào)的，提示，DEN誘發(fā)的大鼠原發(fā)性肝癌模型中的肉堿合成可能下調(diào)。研究發(fā)現(xiàn)，γ-BBD是PPARα調(diào)控的靶基因[17]；另有研究還發(fā)現(xiàn)RXRγ活化和過表達能上調(diào)PPARα的表達[18]。因此，DEN誘導(dǎo)的原發(fā)性肝癌模型細胞中γ-BBD表達的調(diào)控模式可能與RXRγ的基因表達調(diào)控模式有關(guān)。本研究通過western blotting等技術(shù)證實了DEN誘發(fā)的大鼠原發(fā)性肝癌模型中RXRγ的表達是下調(diào)的，與γ-BBD的調(diào)控趨勢一致。提示，DEN誘發(fā)的原發(fā)性肝癌模型中γ-BBD的低表達調(diào)控模式可能與與RXRγ的低表達有關(guān)。

據(jù)報道，RA能上調(diào)RXRγ的表達[14,19,20]，因此RA干預(yù)有可能通過影響肝癌細胞RXRγ的表達進而影響γ-BBD的表達。本研究證實了13-cis-RA在藥物誘導(dǎo)48 h這一時間點能顯著上調(diào)大鼠肝癌細胞RXRγ的表達。一些研究還發(fā)現(xiàn)RXRγ在癌細胞中低表達與癌發(fā)生、增殖以及低分化有關(guān)[15,19]，因此本研究用流式細胞術(shù)觀察RA對大鼠肝癌細胞細胞周期的影響，結(jié)果也表明在13-cis-RA作用48 h這一時間點，RH-35細胞表現(xiàn)出顯著的G1期阻滯。提示，RA上調(diào)肝癌細胞RXRγ的表達可能與癌細胞重分化有關(guān)。在此基礎(chǔ)之上，本研究通過western blotting等技術(shù)檢測了13-cis-RA對大鼠肝癌細胞γ-BBD表達的影響，結(jié)果也發(fā)現(xiàn)在RA作用48 h這一時間點，γ-BBD在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的表達均顯著上調(diào)。提示，13-cis-RA可能在誘導(dǎo)細胞重分化時期通過上調(diào)RXRγ的表達促進PPARα表達，進而影響了γ-BBD的表達。研究發(fā)現(xiàn)單獨的PPARs不能直接調(diào)控靶基因，需與RXRs結(jié)合形成異二聚體才能發(fā)揮作用[1,2]，因此本研究中13-cis-RA還可能在細胞內(nèi)通過異構(gòu)成9-cis-RA后，與PPARs：RXRs中的RXRs連接直接活化該異二聚體[1,2,5,20,21]，進而增強γ-BBD的轉(zhuǎn)錄。

綜上所述，DEN誘發(fā)的原發(fā)性大鼠肝癌模型有可能因γ-BBD下調(diào)而下調(diào)肉堿合成代謝；但是，13-cis-RA能上調(diào)γ-BBD的表達，因此13-cis-RA可能影響RH-35大鼠肝癌細胞的肉堿合成。13-cis-RA對γ-BBD表達的影響可能通過上調(diào)肝癌細胞RXRγ的表達，活化并增強PPARs：RXRs的轉(zhuǎn)錄活性而發(fā)揮作用。