高效液相色譜-串聯質譜法檢測小麥中11 種農藥殘留

鄭州市農產品質量檢測流通中心 李柱梅 韓洛利 朱其叢

本文采用渦旋提取、固相萃取柱凈化、高效液相色譜-串聯質譜法檢測小麥中阿維菌素、噻蟲嗪、除蟲脲、烯酰嗎啉、吡蟲啉、甲維鹽、辛硫磷、滅幼脲、多菌靈、啶蟲脒、氟啶脲等11 種農藥殘留，準確度高、可靠性好、重復性佳，適用于小麥中多種農藥殘留檢測。

一、試驗部分

（一）儀器與試劑

1.儀器。Waters Xevo-TQ-S液相色譜-串聯質譜儀（美國 waters 公司）；SilentCrusher M型勻漿機（德國Heidolph 公司）；Milli-Q Advantage A10 超純水機（美國 Millipore 公司）；UNIVERSAL 320R 型離心機（德國Hettich 公司）。11 種農藥純度不低于95%。

2.試劑。標準儲備液。準確吸取標準品各800μL 于10 mL 容量瓶中，根據各農藥的性質用甲醇、丙酮等溶劑溶解并定容，制得11 種單一標準儲備液（80 μg/mL），置于-18 ℃冰箱中密封儲存備用。

混合標準儲備液。分別移取一定量的上述標準儲備液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容得到濃度為4μg/mL 的混合標準儲備液，置于-18 ℃冰箱中密封儲存備用。

乙腈、甲醇（色譜純，德國默克公司）、C18粉、N-丙基乙二胺吸附劑（PSA）（色譜純，美國安捷倫科技有限公司）、氯化鈉、無水硫酸鎂（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司）。試驗用水為超純水。

（二）儀器工作條件

1.色譜條件。色譜柱：Acquity UPLC BEHRP C18 色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7μm）；柱溫40 ℃；流動相A 相為乙腈，B 相為0.1%甲酸水溶液。線性梯度洗脫程序：0～2 min，10%～30% A；2～8 min，30%～90% A；8～9 min，90%～10% A；保持1 min。流速0.3 mL/min；進樣體積 1μL。

2.質譜條件。電噴霧離子源（ESI），正離子掃描，離子源溫度150 ℃，脫溶劑氣溫度500 ℃，脫溶劑氣和錐孔氣均為高純N2，脫溶劑氣流速為1000 L/h，錐孔氣流速為40 L/h。采用MRM 多反應監測方式檢測。

（三）試驗方法

前處理方法。準確稱取5.0 g（±0.05 g）新鮮樣品，于50 mL塑料離心管中，加入 15 mL 水浸潤30 min，再加入乙腈溶液20 mL 勻漿提取1 min，再加入5 g NaCl 振蕩3 min，5000 r/min 離心5 min。取10 mL 上清液至10 mL 玻璃離心管中，50 ℃氮氣吹至近干。用2 mL 洗脫液甲醇-二氯甲烷（5：95）溶解殘渣，4 mL 洗脫液活化NH4固相萃取柱，15 mL 洗脫液洗脫，收集濾液，于40 ℃下氮吹至近干，用1 mL 乙腈-水（1：1）定容，過0.22μm 濾膜待測。

表1 加水浸潤對小麥中11 種農藥提取率的影響

二、結果與討論

（一）優化前處理方法

提取方式的優化。試驗考察了加水浸潤后提取和不加水直接用乙腈提取兩種提取方式下0.05 mg/kg加標水平下的回收率（提取率見表1）。結果發現，加水浸潤后提取，對大部分化合物的提取會有一定的提高，而且回收率比較穩定。因此，為了試驗操作簡便，選擇先加水浸潤后提取。

另外，試驗考察了加水量的多少對于回收率的影響。采用樣品量的2 倍、2.5 倍、3 倍、3.5 倍、4 倍、5 倍數量的水的體積，考察回收率的變化。結果表明，隨著水量的增加回收率會增大，3 倍時回收率最大。若繼續加大加水體積，對于大部分化合物的回收率沒有明顯變化，但如阿維菌素、辛硫磷反倒會減小。因此，選擇加水3 倍即15 mL。

（二）優化凈化方法

1.根據農藥性質的不同，選用氨基固相萃取柱凈化，分別用甲醇/二氯甲烷（5：95）和乙腈洗脫；用石墨碳黑氨基柱凈化，甲苯/乙腈（3：8）洗脫；比較2 種凈化柱3種洗脫溶劑和QuEChERS 凈化包（PSA 400 mg，C18400 mg，無水硫酸鎂1200 mg）對11 種農藥回收率的影響。考察添加濃度0.05 mg/kg時回收率的變化（見表2）。

結果顯示，用氨基柱凈化時，甲醇/二氯甲烷洗脫大多數農藥回收率在81.2%～101.7%，是比較理想的；乙腈洗脫時，多菌靈、啶蟲脒等由于極性弱洗脫效果不佳；石墨碳黑氨基柱凈化時，11 種化合物的回收率都比較高，但是所需洗脫體積太大，增加下一步氮吹時間，不利于大批量做樣。QuEChERS凈化包凈化時，可能是由于凈化包中C18粉的緣故，吸附性特別強，致使回收率普遍較低，源于極性較強吸附到PSA 上但缺乏足量溶劑的洗脫。因此，本試驗選用氨基柱凈化并用甲醇/二氯甲烷（5：95）洗脫。

另外，不同的凈化方法對小麥空白基質的影響也不同。氨基柱凈化，用不同的洗脫劑洗脫對基質沒有太大的影響；石墨碳黑氨基柱凈化后，基質較為干凈，空白基質進樣后基線噪音明顯要弱很多；QuChERS 凈化包凈化后，對基質并沒有太大改善，反而不如氨基柱干凈，基線噪音要高很多。

2.分別考察10 mL、15 mL、20 mL 洗脫溶劑對回收率的影響。結果表明，當洗脫劑體積為15 mL時，11 種農藥的回收率均在80%以上，效果最好故洗脫劑用量取15 mL。

（三）方法的線性范圍與定量限

在空白小麥樣品中分別添加4 μg/mL 的3 種混標溶液25μL、62.5μL、125μL，理論添加濃度為0.02 mg/kg、0.05 mg/kg、0.1 mg/kg，分別設6 個平行樣，按本試驗方法進行樣品處理和測定，考察精密度。結果表明，平均回收率為75.8%～97.5%，相對標準偏差（RSD）＜10%。

空白樣品經上述方法處理后的進樣液配制混合標準溶液，配制濃度為0.000 1～1μg/mL。以檢出限響應的3～5 倍確定化合物的方法定量限（Limit of Quantity，LOQ），并考察定量離子峰面積和濃度之間的線性關系。

（四）實際樣品檢測

抽取5 個小麥樣品檢測，用本方法和國標GB/T 20770-2008 進行比較。結果發現，國標方法顯示陰性，本方法會有一定量的檢出，但是數值很小，基本在檢出限附近，故判斷為檢出陰性。

三、結論

本研究建立了檢測小麥中11種農藥殘留的超高效液相色譜串聯質譜法，對提取方式、凈化方法進行優化，確定加15 mL 水浸潤后提取，提取率最優，氨基固相萃取柱凈化整體回收率最高，洗脫體積為15 mL 時回收率結果最佳，也比較經濟。另外，又進行了方法精密度和重復性考察，確定方法定量限和線性范圍。本方法快速、高效、準確度高，可實現對小麥基質中目標化合物的快速準確篩查分析。