熒光法測定海洋生物體中石油烴

李靜

（天津市生態環境監測中心，天津 300191）

石油類污染物可通過生物鏈的傳遞，影響水產品質量，進而危害人體健康[1]。近年來，石油污染造成污染物生物體內的富集和積累，使得海洋生物體內石油烴的監測具有十分重要的意義[2]。熒光分光光度法是測定海洋生物體中石油烴的經典方法，也是海洋監測規范中規定的仲裁方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

石油醚、氯化鈉飽和溶液、無水乙醇、氫氧化鈉溶液（6 mol/L）、二氯甲烷；油標準使用溶液（1000 μg/mL）；油標準使用溶液（100 μg/mL）。

熒光分光光度計、容量瓶（10 mL、50 mL、1000 mL）、移液管（容量10 mL、20 mL）、旋轉蒸發器、皂化瓶（容量100 mL碘量瓶）、錐形分液漏斗（容量500 mL）、實驗室常備儀器和設備。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的制備

分別選用鱈魚和三文魚的凍干樣作為實驗樣品。準確稱取2～5 g樣品于100 mL皂化瓶中，加入20 mL氫氧化鈉溶液，在室內下避光皂化8～12 h，期間每隔1 h搖動皂化瓶數次，加入20 mL無水乙醇溶液，充分搖勻，4 h后進行萃取，制得樣品消化液。

1.2.2 工作曲線的繪制

分別量取0.0 mL、0.1 mL、0.3 mL、0.5 mL、0.7 mL和0.9 mL油標準使用液于6個100 mL皂化瓶中，加入20 mL氫氧化鈉溶液，在室溫下避光皂化8～12 h。加入20 mL無水乙醇溶液，充分搖勻，4 h后，將皂化液全部轉入500 mL分液漏斗中，用10 mL二氯甲烷洗滌皂化瓶，洗滌液轉入分液漏斗中，加30 mL氯化鈉溶液和100 mL水振蕩3 min，靜置分層，將有機相收集于旋轉蒸發瓶中，用10 mL二氯甲烷再萃取一次，將有機相合并收集于旋轉蒸發瓶中。將旋轉蒸發瓶與旋轉蒸發器連接，在50 ℃水浴中將二氯甲烷萃取液蒸發至近干，取下旋轉蒸發瓶，用氮氣將殘留二氯甲烷萃取液吹干，準確加入10.0 mL石油醚溶解殘留物，將石油醚溶液移入1 cm石英比色池內，于激發波長310 nm，發射波長360 nm處進行熒光分光光度測定，以減空白后的相對熒光強度（Ii-Ib）為縱坐標，相應的石油烴含量為橫坐標，繪制工作曲線。

2 結果與分析

2.1 工作曲線繪制

工作曲線繪制結果見表1，由表1可知，標準溶液濃度在0.0～9.0 μg/mL范圍內，曲線方程為y=-4.65x+65.1，相關系數r=0.999 5，表明線性關系良好。

2.2 檢出限

根據《環境監測 分析方法標準制修訂技術導則》（HJ 168-2010）附錄A中有關方法檢出限的規定，按照樣品分析的全部步驟，重復7次空白試驗，將測定結果換算為樣品中的含量（當稱樣量為2.000 0 g時），計算7次平行測定的空白樣品含量的標準偏差，按公式（1）計算方法檢出限。

其中，t(n-1，0.99)為置信度為99%、自由度為n-1時的t值；n為重復分析的樣品數，連續分析7個樣品，在99%的置信區間，t(6，0.99)= 3.143；S為7次平行測定的標準偏差，測定結果見表2。

由表2結果可知，熒光分光光度法測定海洋生物體石油烴的檢出限為0.19（質量分數，10-6），測定下限為0.76（質量分數，10-6）。

表1 工作曲線繪制結果

表2 海洋生物體中石油烴的空白測定結果和檢出限

2.3 精密度

選取1.2.1中兩種海洋生物體實際樣品，分別平行測定6次，檢驗精密度，測定結果見表3。

由表3結果可知，本次實驗選擇的兩種實際樣品，平行測定結果的相對標準偏差分別為10.0%和11.4%，重復性較好，能夠滿足海洋監測規范生物體分析要求。

2.4 準確度

按照測定步驟，對兩種實際樣品進行加標回收實驗，結果見表4。

由表4可見，對兩種實際樣品進行的加標回收實驗，加標回收率分別為72.0%和74.0%，表明本實驗準確度良好。

實驗過程中皂化是生物體樣品前處理的關鍵步驟，對測定結果存在較大影響。稱好的生物樣品應用藥匙送入皂化瓶底，避免沾到瓶口，影響皂化效果。氫氧化鈉溶液加入后，應充分搖勻。由于NaOH不能溶解于石油烴中,而可以溶解于乙醇,且乙醇在烴或油脂中有一定的溶解度,因此，在皂化液中加入適量乙醇以促進生物體樣品中脂肪的水解。

由于生物樣品的特殊性，因此在萃取過程中極易出現乳化現象，在加入氯化鈉無法達到破乳效果時，可將萃取液放入離心機，2000 r/min離心3 min乳化層即可明顯分離。

表3 石油烴精密度測定結果

表4 準確度測定結果

3 結論

綜上，本文根據熒光分光光度法測定海洋生物體中石油烴測定步驟，以鱈魚和三文魚為樣品，對方法的工作曲線、精密度和準確度分別進行了驗證分析工作，實驗結果證實該方法檢出限低，具有較好的精密度和準確度，能夠滿足實驗室的分析質量要求，對我國常見海洋生物體中石油烴的監測工作具有重要意義。