miR-155在不同病理特征胃癌患者癌組織中的表達情況及其對預后的影響

趙芳宗 王 培 李丹丹 朱小娟

胃癌是常見消化系統惡性腫瘤，早期無明顯癥狀，胃鏡常規篩查普及率低，多數患者確診已到晚期，失去最佳治療時機。MiRNA作為生物學研究熱點已有時日，人類miRNA具有充當腫瘤基因或抑制瘤基因作用，對其它靶基因表達和信號通路有調控作用，在腫瘤發生、進展及轉歸中有重要作用[1-2]。miR-155目前被發現與乳腺癌、直腸癌等多種惡性腫瘤發生有關，在多種血液系統腫瘤和實體瘤中有高表達[3]。目前關于miR-155與胃癌關系的研究甚少，本研究分析胃癌癌組織miR-155表達與預后和鉑類化療后效果的關系，為今后胃癌病情觀察和療效評估提供參考，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

納入標準[4-5]：穿刺細胞學或胃鏡組織病理學診斷的胃癌；未曾接受過放化療；影像學檢查發現可測量腫瘤靶病灶；ECOG≤2分；預計生存時間≥1個月；肌酐<1.5倍ULN，膽紅素<1.5倍ULN，堿性磷酸酶≤2.5倍ULN，谷丙及谷草轉氨酶≤2.5倍ULN，血小板計數≥100×109/L，血紅蛋白≥80 g/L，中性粒細胞計數≥2.0×109/L，白細胞計數≥4.0×109/L。排除標準[6-7]：其它惡性腫瘤；為控制的高血壓、糖尿病、感染；哺乳期及妊娠期女性。從病理科獲取研究對象經福爾馬林固定石蠟包埋組織標本和距癌組織至少2 cm的癌旁非癌組織標本。根據上述標準于2013年1月至2018年1月納入胃癌患者87例，患者年齡、性別分布及分化情況等見表1。

1.2 方法

使用過美國LC Science公司提供的RNA提取式試劑盒，按說明書操作，用瓊脂糖凝膠電泳法檢測RNA完整性，miR-155莖環反轉錄反應引物為5'-CGC TGC TAC CTG AGA GTA GAC CAG ATG CAG CGA CCC CT-3'。傷害博仕生物技術公司提供的反轉錄試劑盒配置10 μl反轉錄體系，37 ℃下反應15 min，85 ℃下反應5 s，之后放在-20 ℃中保存。用Real-time PCR檢測miR-155，涉及引物，用SYBR Green實時熒光定量PCR試劑盒配置25 μl PCR反應體系，94 ℃下反應3 min，預變性后在94 ℃下反應30 s，45 ℃下反應30 s，72 ℃下反應30 s，35個循環，所有反應均有2個復孔，記錄每管中熒光信號達到的閾值時經歷的循環數，取2次平均值，經內參基因歸一化，計算癌組織和配對癌旁組織miR-155水平。

1.3 觀察指標

①對比癌組織與癌旁組織中miR-155水平；②觀察癌組織中miR-155水平與臨床病理特征的關系；③將肺癌組織中miR-155表達高于本研究中平均水平的患者歸為高表達組，低于平均水平的歸為低水平組，對比兩組進展生存時間；④癌組織miR-155水平不同療效組中的表達。其中療效參考RECIST1.1版本相關標準[8]：目標病灶：目標病灶完全消失，病理淋巴結短徑減少至10 mm以下，且所有非目標病灶消失，腫瘤標記物水平正常，無新發灶，為完全緩解；所有目標灶消失，病理淋巴短徑均將至10 mm以下，有1個或多個非目標灶持續存在或(和)腫瘤標記物水平持續高于正常值為部分緩解，或目標病灶最大徑之和較基線縮小至少30%，無新發病灶或(和)非目標病灶進展也可判斷為部分緩解；目標病灶最大徑之和較基線縮小至少30%，同時無新病灶出現或(和)非目標病灶進展，為穩定；此外均視為進展。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 癌組織與癌旁肺癌組織中miR-155水平對比

癌組織miR-155平均值為(0.449±0.031)，癌旁非癌組織為(1.124±0.110)，t=55.090(P=0.0000)。

2.2 癌組織中miR-155水平與臨床病理特征的關系

侵犯層次為T3/T4者miR-155表達較T1/T2低；TNM分期為Ⅲ/Ⅳ者較Ⅰ/Ⅱ者miR-155低；有淋巴結轉移者miR-155水平較無淋巴結轉移者低。以上比較差異無統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 胃癌癌組織中miR-155水平與其臨床病理特征的關系

2.3 隨訪6個月癌組織miR-155高表達組與低表達組預后對比

低表達組共49例，隨訪6個月總生存率為79.59%(39/49),高表達組隨訪6個月總生存率為93.88%(46/49)，χ2=8.099(P=0.0044)。低表達組6個月無進展生存率為71.43%(35/49)，高表達組為85.71%(42/49)，χ2=6.632(P=0.0100)。miR-155與PTEN表達呈正相關(γ=0.813，P<0.01)。

2.4 癌組織miR-155水平不同療效組中的表達

miR-155水平在癌組織中表達水平由高至低依次為完全緩解組、部分緩解組、病變穩定組、病變進展組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。相關性分析(Spearman)發現療效與癌組織miR-155表達呈負相關(γ=-0.561，P<0.01)。

表2 胃癌癌組織中miR-155在不同療效患者中的表達

3 討論

MinRNA是非編碼小分子RNA，轉錄后水平對目標基因表達實現負調控，引起靶mRNA分子降解，或出現翻譯抑制。本研究中miR-155廣泛分布在人類細胞及組織中，是發現較早的miRNAs之一，在多種惡性腫瘤中有異常表達，例如上皮型卵巢癌、膀胱癌、結直腸癌、黑色素瘤等[9]。目前許多研究發現其在組織中表達具有特異性，關于其在癌組中的表達意義研究逐漸增多。本研究中對比胃癌患者癌旁非癌組織和癌組中miR-155表達水平，癌組織miR-155平均值為(0.449±0.031)，癌旁非癌組織表達為(1.124±0.110)(P<0.05)。這與梁雪藝等[10]研究者報道的胃癌晚期患者癌組織中miR-155、miR-192水平較癌旁組織表達低，miR-30a較癌旁組織高的結果基本一致。

目前關于miR-155與癌癥的大部分研究發現miR-155高表達患者預后相對較好；但也有個別研究發現miR-155在惡性腫瘤發生進展中具有促癌基因作用，其表達與預后為負相關[11-12]。miR-155表達在不同腫瘤患者中表示不同的預后，這可能與腫瘤組織特異性有關，或是miR-155樣本提取不同所致，例如一些研究者是觀察血漿miR-155水平或是細胞miR-155水平，一些研究者是觀察血清miR-155水平，而本研究觀察組織miR-155水平[13-14]。在本研究中癌組織miR-155水平高表達預示較好的預后。侵犯層次為T3/T4者miR-155表達較T1/T2低；TNM分期為Ⅲ/Ⅳ者較Ⅰ/Ⅱ者miR-155低；有淋巴結轉移這miR-155水平較無淋巴結轉移者低。而早期胃癌淋巴結轉移患者病情更嚴重，其預后受諸多因素制約，淋巴結轉移、高分期、侵犯層次深是胃癌預后不良因子。本研究通過對比高表達組和低表達組無進展生存時間，發現低表達組6個月總生存率為79.59%，無進展生存率為71.43%，均較高表達組(93.88%、85.71%)低(P<0.01)。以上研究結果均提示胃癌患者癌組織中miR-155水平高低與預后密切相關。

鉑類藥物是晚期胃癌一線用藥，但是腫瘤細胞有鉑類耐藥現象，導致臨床治療面臨巨大困難。miRNA異常表達與腫瘤對鉑類化療藥物的敏感程度相關；一些研究者指出晚期胃癌患者miR-21及miR-181b表達與含奧沙利鉑化療后預后有關，其中低表達組預后較高表達組好[15]。現有研究均認為其表達與化療效果有一定關系。本研究通過對比發現miR-155水平在癌組織中表達水平由高至低依次為完全緩解組、部分緩解組、病變穩定組、病變進展組，差異有統計學意義(P<0.05)。進一步相關性分析證明癌組織miR-155表達與鉑類化療效果呈正相關關系(P<0.01)，提示miR-155有抑制胃癌基因作用。體外實驗發現miR-155能抑制鋅指 E-盒結合同源異型盒 1基因表達，從而抑制胃癌腫瘤細胞侵襲和轉移。

綜上所述，胃癌組織miR-155表達水平與胃癌患者預后及鉑類化療方案療效相關，是觀察胃癌進展和預后的重要指標。