奶牛乳腺炎病原菌的耐藥性分析思路總結

穆國冬 張忠湛 盧松巖 王晉 任銳

摘 要 在奶牛場中作為常見、危害最大的一種疾病為奶牛乳腺炎，由此會導致產乳量不斷降低，還會對乳品質造成嚴重影響，尤其是隱性乳腺炎，因在臨床上變化不明顯而很難被發現。由于長期使用藥物治療，促使致病菌產生的耐藥性很強，如大環內酯類、氨基糖苷類、青霉素類、頭孢類、喹諾酮類藥物。為幫助獸醫做好臨床用藥工作，可對奶牛乳腺炎病原菌開展體外抑菌試驗。

關鍵詞 奶牛乳腺炎病原菌；耐藥性分析；思路總結

奶牛乳腺炎作為一種比較常見的奶牛疾病，會影響奶牛產奶量，導致奶牛養殖經濟效益不斷降低，會喪失泌乳功能而被迫淘汰奶牛，且會對牛奶品質造成影響，不利于人們的身體健康。根據研究發現，該病的發生率大約控制在25-60%之間，每年所造成的經濟損失高達20億美元。這類疾病的產生與多種非特定病原微生物感染有關，根據種類可分為四種，包括80多種病原微生物，其中23種最為常見，但是主要是細菌，如鏈球菌、大腸桿菌等，會對乳房造成直接感染。通過對病原菌分布地域的了解，便于更好的做好疾病診治工作[1]。

1 材料與方法

1.1 材料

使用細菌基礎與鑒別培養基、生化試驗用培養基。取32個規模化奶牛場的牛奶樣品，采樣之前需使用消毒液對乳頭進行擦拭，不用頭兩把乳汁，然后使用無菌試管取5-10ml乳汁送檢。

1.2 病原菌分離培養

在血瓊脂平板上接種所采集的無菌樣品，在37攝氏度溫度下進行18-24小時的培養，選擇可疑菌落開展涂片、革蘭氏染色處理，鏡檢后進行分離培養[2]。

1.3 分離菌的鑒別培養與形態觀察

在各種培養基上分別接種可疑菌落，如SS瓊脂培、伊紅美蘭、三糖鐵斜面以及Baird-parker等鑒別培養基中，同樣在37攝氏度下培養18-24小時。采用常規方法做好涂片、革蘭氏染色和鏡檢操作，對菌落形態與培養基顏色變化進行密切觀察[3]。

1.4 API鑒定試驗

分離菌通過24小時的血平板純培養之后，需嚴格根據操作要求在API細菌鑒定試劑條上分別接種，在37攝氏度濕盒內進行18-24小時的培養，試劑加入以后進行認真觀察，并將結果準確記錄下來。

1.5 Vitek-32細菌鑒定試驗

對分離菌開展血平板純培養24小時，根據要求分別接種在VITEK細菌鑒定卡上，設置培養箱溫度為37攝氏度，然后進行為期18-24小時的培養，關于結果需使用計算機每小時分析一次。

1.6 藥敏試驗

在合適的培養基瓊脂培平板上接種各細菌純培養物涂片，然后對各種藥敏紙片進行均勻放置，在選擇24h、48h時間點將各藥敏片抑菌圈大小記錄下來。

2 結果

2.1 培養特性與生化鑒定

在SS瓊脂、伊紅美蘭培養基中分別接種革蘭氏陰性球菌，通過一段時間的培養后對菌落形態進行認真觀察。取伊紅美蘭上黑色帶有金屬光澤的單菌落、白色半透明細小菌落，在三糖鐵斜面上進行穿刺接種，關于初步生化鑒定需嚴格根據常規方法操作。

早Baird-parker培養基中接種革蘭氏陽性葡萄球菌，觀察菌落形態。取中心黑色，對于周圍的透明袋單菌落開展血漿凝固酶試驗，若結果為陽性可初步鑒定為金黃色葡萄球菌。

在分離鑒定病原菌的過程中可見比較純的酵母樣菌落，通過涂片染色進行鏡檢，也會發現卵圓形酵母菌樣微生物，可初步鑒定為酵母菌[4]。

2.2 API或Vitek-32鑒定結果

采用API 20E或Vitek-32來鑒定開展生化試驗較難的菌株，葡萄球菌的檢出率最高，其中金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌最高，其次為鏈球菌、停乳與乳房鏈球菌，再次為革蘭氏陰性桿菌（大腸桿菌、肺炎/溶血巴氏桿菌）。

2.3 藥敏試驗

研究發現，病原微生物金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、無乳鏈球菌等為主要的病原菌，因此可針對性選擇14種藥物開展藥敏試驗。結果可知，所分離株經常使用的抗菌藥物會產生較強的耐藥性，如復合磺胺、青霉素、鏈霉素等，同時類似于恩諾沙星、氧氟沙星等新型抗生素同樣也會產生一定的耐藥菌株。

3 討論

通過對32個規模化奶牛場的奶羊開展細菌分離鑒定，結果可知該地區的奶牛乳腺炎主要是葡萄球菌感染，這符合國內其它省市和國外的報道。同時，發現了少數酵母菌，且是臨床型乳腺炎，而酵母菌所造成的奶牛乳腺炎少之又少，究其原因在細菌性乳腺炎治療過程中因抗生素的大量反復使用有關，由此導致乳區微生物生態失衡，大量繁殖這類真菌。研究發現，本次分離所分離出來的酵母菌均不敏感應用的全部抗生素，為此必須引起臨床的高度重視。

縱觀流行病學的調查結果可知，臨床型乳腺炎奶牛的表現以乳房炎癥反應為主，如發病、疼痛、腫脹、觸診腫塊等，嚴重者會出現全身癥狀、乳汁不正常，存在不同程度的凝塊、絮片，重者會出現黃色漿液性物質。同時，疾病的產生受各種因素的影響，如環境衛生、飼養管理、季節、胎數、泌乳月等，其中發生率最高的當屬第三季度、三胎，頭胎發生率低；牛易感性最強的泌乳月當屬3-4月、第9月[5]。

根據藥敏試驗結果，對于臨床經常使用的抗菌藥物所分離菌株所產生的耐藥性較強，且抗生素殘留會造成較大的食品安全隱患，為此人們需高度重視抗生素濫用，在免疫預防時積極的接種疫苗。但是，基于乳腺病原比較復雜，不利于有效的研制與選擇疫苗，為此在今后的工作中應該重視消毒、飼養管理共組，對疫苗、抗生素進行正確合理的選擇，制定綜合防治措施積極有效的預防奶牛乳腺炎。

參考文獻：

[1]王丹，楊峰，李新圃，羅金印，劉龍海，張哲，張亞茹，李宏勝.江蘇部分奶牛場乳腺炎病原菌的分離鑒定、耐藥性及血清型研究[J].中國預防獸醫學報，2018，40（08）：680-686.

[2]王雪梅，郭紅霞，郭莉娟，林琳，李建龍，代敏，孫豐慧.120株奶牛乳腺炎流行病原菌的分類和耐藥譜分析[J].成都醫學院學報，2017，12（05）：555-560.

[3]董翔宸，馬友記，張勇，胡俊杰，趙興緒.奶牛乳腺炎主要病原菌的藥物敏感性檢測[J].中國獸醫學報，2015，35（09）：1505-1510.

[4]尹婷慧，王熙濤，徐永平，王麗麗，陳紅莉，吳妍妍，李曉宇.奶牛乳腺炎病原菌的分離、耐藥性分析及其特異性卵黃抗體的體外抑菌效果[J].飼料與畜牧，2015（08）：31-35.

[5]趙香汝，崔紅玉，徐明舉，李繼連.奶牛乳腺炎病原菌的耐藥性分析[J].黑龍江畜牧獸醫，2007（09）：68.