羅嵐 覃彬華 余惠凡

摘要:建立了水靈芝的顯微鑒定方法,對中藥水靈芝的顯微鑒別方法進行了研究。闡述了水靈芝的藥材粉末顯微特征以及莖橫切面的顯微構造。此研究可為水靈芝在中藥臨床使用的質量標準和進一步開發利用提供鑒別參考。
關鍵詞:水靈芝;顯微鑒別;質量標準
中圖分類號:R28 文獻標識碼:A 文章編號:1674-9944(2019)16-0248-03
1引言
水靈芝,是地方中醫院的傳統民族藥材,俗稱魚膽草、河風草、青魚膽草、水黃連等。本品基源是龍膽科獐牙菜屬植物川東獐牙菜(Swertia davidii Franch.)的干燥全草。用于腎炎,濕熱黃疸,肺熱咳嗽,牙齦出血,癰疽腫癤,咽喉腫疼,皰疹,尿路感染,腹瀉痢疾等多種疾病。主要分布于我國華東、西南地區,湖北省主要分布恩施市來鳳縣。已陸續有關于該藥材化學成分及其藥理活性的的研究報道。水靈芝作為特色土家族藥物,在荊州市中醫醫院腎病科大量使用,作為治療腎炎的關鍵藥物,本課題組對其進行了性狀、橫切面及粉末的顯微特征,以及快速薄層鑒定方法,為其深入研究和開發提供鑒定方法和依據。
2藥材與試劑
OLYMPUS CX-41顯微鏡(日本奧林巴斯(中國)有限公司),DLF-50中藥粉碎機(溫州頂歷醫療器械有限公司),其他試劑均為分析純。水靈芝于2018年7月購買于自湖北省恩施市,經中南民族大學劉新橋副教授鑒定為水靈芝(Swertia davidii Franch.)的干燥全草,植物標本存放于荊州市中醫醫院藥學部。
3方法與結論
根據藥材顯微鑒別常規方法,參照《中國藥典》(2015年版)四部“顯微鑒別法”項下的方法,對中藥房所購買的水靈芝藥材樣品做徒手切片及粉末制片,分別置光學顯微鏡下觀察研究,記錄拍照。
取水靈芝的干燥全草,粉碎,顯微鏡下觀察其顯微特征,并進行詳細描述。按照2015版《中國藥典》四部通則顯微鑒別法,將水靈芝粉末過四或五號篩,挑少許粉末至載玻片上,加水合氯醛試液用酒精燈加熱透化后,在光學顯微鏡下觀察研究臨時裝片的組織結構,描述其特征,并對具有典型特征的組織結構進行拍照。莖橫切面:取上述水靈芝的莖,切片,顯微鏡下觀察其顯微特征,并進行描述。按2015版《中國藥典》四部通則顯微鑒別法下橫切片法,取水靈芝莖,軟化處理后,徒手切片,切成10~20um的薄片,置載玻片上,采用水合氯醛試液,利用其對雜質的溶解作用,加熱透化后,制成臨時裝片。在光學顯微鏡下觀察研究其組織結構,描述其特征,并對具有典型特征的橫切面進行拍照。
3.1水黃連粉末顯微特征
水靈芝粉末黃綠色。纖維長梭形,細胞的腔大,紋孔較為明顯,單列或者多列,直徑在10~55um?;ǚ哿A球形、卵形,萌發孔3個,成熟的可見孔溝,表面有微細點狀突起,直徑16~40um(見圖1中的a、b、c)。螺紋導管直徑5~15um(見圖1中的d、e、f)。非腺毛少見,平直或彎曲,直徑約30um,長約至60um,壁?。ㄒ妶Dl中的j)。
3.2水靈芝莖橫切面組織構造
結果:該藥材顯微切片顯示莖橫切面表皮細胞排成一列,類圓形,位于棱翅部的表皮細胞較大,向外突起,外被角質層。植物細胞皮層由數列至十數列薄壁細胞組成,內皮層凱氏點明顯。木質部發達,導管單個散在或數個相聚,徑向排列。髓發達,中部中空(圖2)。
3.3薄層鑒別
取本品各批次粉末2g,加甲醇25mL,超聲提取45rain,濾過,濾液蒸干,殘渣用甲醇2mL溶解。作為供試品溶液。另取齊墩果酸對照品,加甲醇制成每1.0mL/mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗,吸取上述兩種溶液各3uL,分別點于同一硅膠G板上,以甲苯一乙酸乙酯一甲酸(10:1.5:0.1,V/V/V)為展開劑,薄層板置展開缸中預飽和45min,展開,取出,晾干,噴10%硫酸乙醇溶液,在105。C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點(圖3)。
4討論
水靈芝作為特色土家族藥物,在荊州市中醫醫院有長期應用歷史,療效顯著,藥材全草入藥,外觀形狀上無明顯的特征性,筆者對水靈芝的性狀、組織粉末顯微特征及薄層色譜鑒別方法進行研究。結果表明,該藥材(全草)性狀,橫切面顯微構造以結構簡單,薄層色譜以具有1個清晰的色譜斑點為鑒別特征。本研究為水靈芝的鑒定提供了較全面而可靠的方法,為其質量標準的研究制訂奠定了良好基礎。此方法對于醫院質檢部門快速鑒定水靈芝的真偽提供方法。