卡介菌多糖核酸對尋常型白癜風患者外周血Treg細胞的影響

郭利平 牛瑞兵 東曉仙 郭雋

摘要：目的 ?探討卡介菌多糖核酸BCG-PSN聯合308 nm準分子光對尋常型白癜風患者外周血Treg細胞的影響。方法 ?選取2013年9月～2017年5月我院收治的尋常型白癜風患者120例設為治療組，采用隨機數字表法分成Ⅰ組和Ⅱ組，各60例。Ⅰ組采用308 nm準分子光單獨治療，Ⅱ組聯合卡介菌多糖核酸肌注。另選取同期我院健康體檢者30例作為對照組，比較治療組與對照組外周血Treg細胞比值、治療組不同分期外周血Treg細胞比值、各組治療前后外周血Treg細胞比值以及Ⅰ組和Ⅱ組治療總有效率。結果 ?治療組外周血Treg細胞比值低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;進展期外周血Treg細胞比值低于穩定期，差異有統計學意義（P<0.05）;與對照組比較，Treg細胞比值均降低，且進展期下降更明顯;治療后Ⅰ組、Ⅱ組Treg細胞比值均較治療前升高，且Ⅱ組升高更為明顯，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后Ⅰ組Treg細胞比值低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;Ⅱ組治療總有效率高于Ⅰ組，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 ?BCG-PSN可以通過增加Treg細胞水平提高患者細胞免疫功能，臨床療效確切，安全性高，不良反應少，值得臨床應用。

關鍵詞：尋常型白癜風;卡介菌多糖核酸;Treg細胞

中圖分類號：R758.41 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.20.022

文章編號：1006-1959（2019）20-0082-03

Effect of BCG-polysaccharide Nucleic Acid on Peripheral Blood Treg Cells

in Patients with Vitiligo Vulgaris

GUO Li-ping，NIU Rui-bing，DONG Xiao-xian，GUO Jun

Abstract：Objective ?To investigate the effect of BCG-PSN combined with 308 nm excimer light on peripheral blood Treg cells in patients with vitiligo vulgaris.Methods ?120 patients with vitiligo vulgaris admitted to our hospital from September 2013 to May 2017 were enrolled in the treatment group. They were divided into group I and group II by random number table， 60 cases each. Group I was treated with 308 nm excimer light alone， and group II was combined with BCG polysaccharide nucleic acid. In addition， 30 healthy subjects in our hospital were selected as the control group. The ratio of peripheral blood Treg cells in the treatment group and the control group， the ratio of Treg cells in the peripheral blood of the different treatment groups， the ratio of Treg cells in the peripheral blood of each group before and after treatment， and the groups I and II. The total effective rate of treatment in the group.Results ?The ratio of Treg cells in the peripheral blood of the treatment group was lower than that of the control group ， the difference was statistically significant（P<0.05）. The ratio of Treg cells in the peripheral blood was lower than that in the stable phase， the difference was statistically significant（P<0.05）. Compared with the control group， the ratio of Treg cells decreased， and the progression decreased. Obviously， the ratio of Treg cells in group I and group II increased after treatment， and the increase in group II was more significant ， the difference was statistically significant（P<0.05）. The ratio of Treg cells in group I after treatment was compared with the control group， the difference was statistically significant（P<0.05）. The total effective rate of group II was higher than that of group I ， the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion ?BCG-PSN can improve the cellular immune function of patients by increasing the level of Treg cells. The clinical efficacy is clear， the safety is high， and the adverse reactions are few， which is worthy of clinical application.

Key words：Vitiligo vulgaris;BCG polysaccharide nucleic acid;Treg cells

白癜風（vitiligo，Vt）是一種常見的獲得性色素脫失癥，治療難度較高，嚴重影響患者的生活質量，近年來，隨著免疫學的發展和實驗技術水平的不斷提高，對白癜風尤其是尋常型白癜風發病機制的研究逐漸深入。Treg細胞參與白癜風的自身免疫機制的探索是近年來臨床研究的熱點之一[1-3]。卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）是一種具有多種調節免疫功效的物質，其作用機制主要是誘導T淋巴細胞增殖活化，增強自然殺傷細胞的活性等[4]，本研究采用BCG-PSN聯合308 nm準分子激光治療白癜風，測定治療前后Treg細胞等因子的變化，進一步觀察BCG-PSN對白癜風的自身免疫功能的調節作用及治療效果，現報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 ?選取2013年9月～2017年5月鄂爾多斯市中心醫院收治的尋常型白癜風患者120例設為治療組，其中女66例，男54例;病程：15 d～30年;年齡5～64歲;臨床分型：局限性38例，散發性26例，泛發性25例，肢端性31例;皮損分布于頭皮、面、耳后、前胸、腰、背、腿、手足等部位。臨床分期：進展期71例，穩定期49例。采用隨機數字表法分為308 nm準分子光組（Ⅰ組）和聯合治療組（Ⅱ組），各60例。Ⅰ組男性27例，女性33例;年齡5～60歲，平均年齡（29.01±0.50）歲。Ⅱ組男性27例，女性33例;年齡6～64歲，平均年齡（29.02±0.31）歲。另外選取健康體檢者30例作為對照組，男性15例，女性15例;年齡5～60歲，平均年齡（30.01±0.20）歲。各組年齡、性別比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2納入及排除標準

1.2.1納入標準 ?診斷為尋常型白癜風的患者且愿意配合治療及化驗者。

1.2.2排除標準 ?①患有免疫系統疾病、嚴重心肝腎功能障礙、器官衰竭、惡性腫瘤;②近1個月內接受過紫外線、皮質類固醇激素、免疫抑制劑、光感藥物等治療者。

1.3試劑及儀器 ?熒光標記單克隆抗體CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE及同型對照小鼠IgGl-FITC、IgGl-APC、IgGl-PE、破膜固定液、淋巴細胞分離液及熒光標準微球均購自美國BD公司。流式細胞儀FACSCalibur為美國BD公司所生產。

1.4標本采集和檢測 ?所有對象于清晨空腹抽取肘靜脈血2 ml，用枸櫞酸鈉抗凝劑抗凝，2 h內送檢。采用Ficoll密度梯度離心法分離單一核細胞，調整細胞數為10×l06/ml，檢測時每個標本取兩管，一管為同型對照，一管做檢測。向這兩管中分別加入100 μl細胞懸液，然后檢測管加CD4-FITC及CD25-APC各10 μl熒光標記單抗，同型對照管加小鼠IgGl-FITC及IgGl-APC各10 μl，混勻后室溫避光孵育15 min;PBS洗滌后，固定破膜，然后同型對照管加IgGl-PE、檢測管加Foxp3-PE抗體各 ? 10 μl，混勻后室溫避光孵育15 min。PBS洗滌后，重懸細胞，立即上流式細胞儀進行測定。對淋巴細胞群設門，每次獲取設門內10000個細胞，并用CellQuest軟件分析數據。Treg細胞以CD4+CD25+Foxp3+T細胞/CD4+T細胞比值表示。

1.5治療方法 ?治療組于初次就診時檢測Treg細 胞比值，Ⅰ組給予308 nm準分子光局部治療， 2次/周。Ⅱ組在Ⅰ組基礎上給予卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）（湖南斯奇生物制藥有限公司，批號：S20020019）肌肉注射，0.35 mg/次，隔日1次，均連續治療3個月，每2周復查1次，記錄觀察皮損變化和不良反應。治療結束后再次檢測Treg細胞比值，對照組體檢時行Treg細胞的檢測。

1.6療效判定標準 ?①痊愈：白斑全部消退;②顯效：白斑消退面積≥50%;③有效：白斑部分消退，消退面積10%～50%;④無效：白斑消退面積<10%?？傆行?（痊愈+顯效）/總例數×100.00%[4]。

1.7統計學方法 ?采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料用[n（%）]表示，組間比較采用？字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1治療組與對照組外周血Treg細胞比值比較 ?治療組外周血Treg細胞比值低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2治療組不同分期外周血Treg細胞比值比較 ?進展期外周血Treg細胞比值低于穩定期，差異有統計學意義（P<0.05）;與正常對照組比較，Treg細胞比值均降低，且進展期下降更明顯，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3各組治療前后外周血Treg細胞比值比較 ?治療后Ⅰ組、Ⅱ組Treg細胞比值均較治療前升高，且Ⅱ組升高更為明顯，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后Ⅰ組Treg細胞比值與對照組比較，差異有統計學意義（P<0.05），治療后Ⅱ組與對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表3。

2.4Ⅰ組和Ⅱ組治療總有效率比較 Ⅱ組總有效率高于Ⅰ組，差異有統計學意義（P<0.05），見表4。

3討論

白癜風是世界公認的三大皮膚頑癥之一，困擾全世界5000萬以上的患者。由于病因不明，發病機制復雜，目前尚無十分有效的根治方案。根據白斑分布特點不同可將白癜風分為節段型和尋常型，節段型白癜風的白斑常沿單側皮神經節段支配的皮膚區域分布，其發病率較低，約占10%;尋常型白癜風根據白斑分布部位及面積不同又可再分為局限性、散發性、泛發性和肢端性[5]。目前認為節段型白癜風和尋常型的發病機制并不相同，節段型白癜風的發生主要與神經因素相關，而尋常型的發病機制尚未明確，但多項證據支持自身免疫因素參與該型的發病[6]。

調節性T細胞（regulatory T cells，Treg）是一類具有負調節作用的T細胞亞群，包括在胸腺內分化成熟后直接遷移到外周的自然調節T細胞（nTreg）和外周初始T細胞經轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）等細胞因子誘導分化的適應性調節T細胞（iTreg）。Treg的表型為CD4+CD25+Foxp3+。Treg細胞可以抑制CD4+T細胞和CD8+T細胞的活化與增殖，達到負調節作用，同時Treg還可以分泌具有抑制作用的細胞因子TGF-β、IL-10等，抑制多種免疫細胞達到免疫負調節作用[7]。Treg及其分泌的細胞因子的減少，可增加自身反應性T細胞的應答。白癜風患者的血清TGF-β水平比健康組有明顯下降，TGF-β水平的下降導致Treg細胞成熟減少，從而抑制炎癥的作用受損，有利于白癜風的發生，TGF-β水平的下降可能是CD8+T細胞反應引起的[8]。本研究結果顯示，進展期的尋常型白癜風患者體內Treg細胞比值低于對照者（P<0.01），與多數研究[9，10]結果相似。另有研究顯示[11]，患者體內Treg細胞比值高于正常人，這可能與研究對象、實驗方法及淋巴細胞的時間生物學效應不同有關。另外，處于不同病程、分期、分型、皮損部位的患者T淋巴細胞變化亦不同。

BCG-PSN是新一代卡介菌提取物，由多糖及核酸等多種免疫活性物質制成，其主要作用機制是通過增強多種免疫細胞的免疫功能及其合成分泌的免疫分子發揮雙向調節作用[12]。通過激活并增強單核-巨噬細胞功能、穩定肥大細胞減少其釋放的活性物質、增強自然殺傷細胞（NK）的活性、刺激網狀內皮系統、提高血清C3含量等，從而增強體內的細胞免疫、調節體液免疫、增強機體抗病能力[4]。本研究中發現，在308 nm準分子激光治療的基礎上加用卡介菌多糖核酸肌注可以收到良好的效果，總有效率明顯提高（？字2=3.34，P<0.05）。與單獨308 nm準分子激光照射組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。提示卡介菌多糖核酸治療尋常型白癜風可以通過上調Treg細胞水平，使其恢復免疫的負調節作用，從而使體內的細胞免疫達到新的平衡狀態，恢復免疫調節功能，最終使黑色素細胞免于T淋巴細胞的攻擊。

綜上所述，尋常型白癜風與自身免疫，尤其是細胞免疫功能紊亂密切相關，而BCG-PSN可以通過增加Treg細胞水平提高患者細胞免疫功能，臨床療效確切，安全性高，不良反應少，值得在臨床 應用。

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收稿日期：2019-7-31;修回日期：2019-8-10

編輯/宋偉