血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平檢測在診斷子宮腺肌病中的應用

陳新元,黃 勝，王同利

(浙江省溫州市中心醫院檢驗科 325000)

子宮腺肌病是由子宮內膜腺體、間質等侵入子宮肌層導致的，是30～50歲經產婦的常見疾病類型，雖然子宮腺肌病不會導致患者死亡，但患病過程中會有不同程度的痛經，嚴重影響患者生理及心理健康[1]。臨床上子宮腺肌病的診斷主要依賴于超聲、CT等影像學檢測手段，但上述方法均存在一定的局限性，且子宮腺肌病常被誤診為子宮肌瘤，仍需要手術后病理檢測確診。因此，尋求早期、靈敏、高效的血清標記物應用于臨床檢測，對于子宮腺肌患者有十分重大的意義[2]。近幾年，隨著血清miRNA的研究發展，發現血清miRNA可用于分子診斷[3]，本研究旨在評估血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平檢測在子宮腺肌病中的診斷效能，并分析血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平與痛經程度的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2017年2月至2018年2月本院收治的子宮腺肌病患者216例納入觀察組，同時招募同時間于本院體檢的60名健康者作對照組。觀察組年齡35～49歲，平均(43.62±9.41)歲；體質量指數(21.56±2.37)kg/m2；孕次(1.69±0.52)次；月經周期(30.54±3.62)d。對照組年齡34～50歲，平均(42.74±10.21)歲，體質量指數(22.17±2.69)kg/m2；孕次(2.15±0.68)次；月經周期(29.75±4.16)d。兩組受試者一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經本院倫理委員會審核批準。

1.2 納入標準與排除標準 納入標準：子宮肌腺患者術后經病理檢測確診；年齡大于或等于30歲；依從性好；簽署知情同意書；對照組受試者身體健康，實驗室檢查各項指標均正常。排除標準：心、肝、腎等器質性病變；嚴重感染；合并糖尿病、甲狀腺功能亢進等內分泌疾病；先天性免疫疾病；血液系統疾病；就診前接受抗感染治療、激素治療；精神障礙。

1.3 試劑與儀器 Trizol試劑購買于日本Takara公司，逆轉率試劑盒、熒光染料SYBR Green Mix、熒光定量PCR試劑盒購買于美國Sigma公司，PCR引物由蘇州金唯智生物科技有限公司提供，熒光定量PCR儀購買于美國BioRad公司。

1.4 qRT-PCR檢測血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平 于清晨空腹抽血5 mL，收集上層血清，采用Trizol試劑盒提取血清中總RNA,經逆轉率為cDNA模板，采用實時熒光定量PCR儀擴增血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p。程序設置條件為：95 ℃預變性90 s，95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，共40個循環。采用2-△△CT法進行半定量分析，以GADPH為內參，計算hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p的表達，其引物序列[4-5]見表1。上述檢驗均由金域醫學檢驗中心檢測完成。

表1 引物序列表

1.5 方法 比較兩組受試者血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p的表達，分析hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p表達與子宮腺肌患者臨床病理參數的關系，并觀察hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p診斷子宮腺肌病的診斷效能。

1.6 痛經評分 參照子宮肌瘤癥狀及健康相關生活質量問卷(UFS-QOL)[6]，對子宮腺肌患者痛經現象進行疼痛程度評分，分值1～5分，完全不痛計為1分，偶爾痛計為2分，比較痛、偶爾口服藥物計為3分，非常痛、經常口服藥物計為4分，極度痛計為5分。

2 結 果

2.1 兩組血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p表達的比較 與對照組比較，子宮肌腺患者血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p的表達均顯著增高(P<0.05)，見表2。

表2 兩組血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p表達的比較

2.2 血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平診斷子宮腺肌的臨床價值 ROC曲線如圖1所示，血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平可有效區分子宮腺肌患者和健康者，當血清hsa-miR-22-3p/U6≥1.17時，診斷子宮腺肌的靈敏度為93.3%，特異度為64.8%(P<0.05)；當血清hsa-miR-103a-3p/U6≥2.46時，診斷子宮腺肌的靈敏度為93.3%，特異度為77.8%(P<0.05)。見表3。

圖1 血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平對子宮腺肌診斷的ROC曲線分析

指標AUC靈敏度特異度95%CIhsa-miR-22-3p0.86693.3%64.8%0.820～0.911hsa-miR-103a-3p0.92093.3%77.8%0.886～0.954

2.3 血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平與痛經程度的相關性分析 Pearson相關分析顯示，血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平分別與子宮腺肌患者痛經程度呈正相關，相關系數為r=0.57、0.64，P=0.032、0.014。

3 討 論

子宮腺肌病病理變化表現為子宮內膜腺體、間質的移位，且伴隨著周圍細胞的增殖[7]。子宮腺肌病多發于產后、人工流產后，具體發病機制尚不明確；臨床表現繼發性痛經，月經過多，慢性盆腔痛等，多采用保守性治療，但其復發率極高，手術切除子宮仍是最有效的根治手段，但對于仍有生育需求的女性來說是不能接受的[8]。但子宮腺肌病早期并無明顯的病癥，確診時病情已經開始進展，因此早期診斷子宮腺肌意義重大[9]。目前主要應用影像學檢測診斷子宮腺肌病，但仍有一定的漏診、誤診概率[10]。因此，開發檢測靈敏度、特異度高的子宮腺肌標志物，輔助其他診斷方法提高子宮腺肌病的確診率成為研究熱點。

mi RNAs是一類內源基因編碼的小分子非編碼單鏈RNA分子，大多數以單拷貝、多拷貝或基因簇的形式存在于基因組中，參與調節體內多種基因[11]。mi RNAs廣泛存在于人體血清及組織中，其序列具有高度的保守性，據報道，mi RNAs介導多種分子途徑參與腫瘤的發生、發展過程，且不同的腫瘤類型其表達譜不同[12-13]，故mi RNAs的不同表達可能對疾病的病理表征有一定的區分作用，此外，血清mi RNAs適用于常規檢測，有成為血清標志物的潛能。研究發現，mi RNA可能參與子宮內膜異位癥的發生、發展，子宮內膜異位癥是指子宮內膜組織種植與子宮內膜以外的位置[14]。盡管子宮腺肌病和子宮內膜異位癥是兩種不同的婦科疾病，但二者在主要癥狀和病理機制等方面有相似之處，但mi RNAs 與子宮腺肌病的相關研究鮮少報道，故本研究擬探究血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平檢測在診斷子宮腺肌病中的應用。

研究表明，血清中檢測到的mi RNA有兩種來源：一種是直接由細胞分泌的，另一種是機體選擇性包裹mi RNA在外泌體、微小體等膜性結構中，運輸至胞外后進入血液循環，提示細胞生長的不同階段會分泌不同的mi RNA，可能產生不同的功能和作用[15]。血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平應用于子宮腺肌病診斷研究較少，但在其他疾病中研究較多。孫月玲等[16]研究顯示外周血miR-22-3p在重癥急性胰腺炎患者中呈高表達，其診斷重癥急性胰腺炎的AUC為0.729，靈敏度為57.41%，特異度為83.70%，且與重癥急性胰腺炎的CT分級、胸水情況等病理參數有關。張亞珍等[17]研究顯示miR-103a-3p在乳腺癌組織和血清中呈低表達，可能通過調控PDK4下調機體糖酵解過程，從而抑制乳腺癌細胞的增殖。

本研究通過實時熒光定量PCR檢測子宮腺肌患者與健康者血清中hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平，發現子宮腺肌患者血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平顯著高于健康者，表明hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p可能參與調控子宮腺肌病的發生、發展。ROC曲線顯示，hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p對子宮腺肌病診斷的AUC分別為0.866、0.920，表明通過檢測血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平可以有效區分子宮腺肌患者和健康者，能較準確的診斷，且hsa-miR-103a-3p的診斷價值更高，與徐愛云等[18]報道一致。80%的子宮腺肌患者均存在痛經的癥狀，本研究通過Pearson相關分析顯示，血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平分別與子宮腺肌患者痛經程度呈正相關，表明血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p水平還可一定程度上預測子宮腺肌病的嚴重程度。然而hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p參與子宮腺肌病的發生、發展的具體分子機制還有待研究。

綜上所述，血清hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p在子宮腺肌患者血清中高表達，且對子宮腺肌病有較高的診斷價值，且與子宮腺肌患者痛經程度呈正相關，可作為子宮腺肌病潛在的血清標志物，應用于子宮腺肌病的早期診斷。后期還需要擴大樣本量作進一步驗證，此外，還可繼續探討hsa-miR-22-3p、hsa-miR-103a-3p參與子宮腺肌病的發生、發展過程的分子途徑，使得研究結果更加完善。