羥苯磺酸鈣對干化學和濕化學酶法檢測肌酐的干擾分析

張錫波 何慧君 葉旭鑫 吳志鋒 張鳳宜 萬志鵬

（東莞市人民醫院檢驗科 廣東 東莞 523000）

1.資料與方法

1.1 標本來源

收集無溶血、黃疸和脂血的病人及健康體檢者的新鮮血清制作成5種不同肌酐濃度的混合血清樣本。

1.2 干擾物

羥苯磺酸鈣膠囊廠家為上海朝暉藥業有限公司，包裝規格為10粒/板/盒，每粒含羥苯磺酸鈣0.5g（按C12H10CaO10S2計）。

1.3 儀器試劑

儀器使用Beckman Coulter的AU5831生化分析儀，試劑為配套的Beckman Coulter公司肌氨酸氧化酶法試劑，貨號OSR61204，規格為4×45mL R1,4×15mL R2。干化學使用儀器為強生Ortho-Clinica Diagnostics VITROS 5600生化分析儀(以下簡稱強生V5600),試劑使用配套的試劑（300測試/盒）。校準品使用配套校準品，Beckman Coulter質控是原廠質控，強生V5600使用第三方朗道質控。

待測樣本配制：根據羥苯磺酸鈣藥物特性，峰值濃度一般為8～15μg/ml[2]，因此配制時應包含該濃度范圍。先配制3種不同藥物濃度的貯存液A（400μg/ml）、貯存液B（1000μg/ml）、貯存液C（2000μg/ml），收集5種肌酐濃度的混合血清，并配制成一系列不同藥物濃度的待測血清，盡可能不影響基質情況下，加入物應小于5%，各種肌酐濃度樣本配制方法相同，最終配制40個檢測樣本。

1.4 重復次數確定

首先參考美國CLIA’88能力比對檢驗的分析質量要求肌酐的可接受范圍為15或%26.5μmol/L（取大者），因此設定實驗的最大允許干擾值dmax為對照均值的7.5%或13.25μmol/L（取大者）。重復測定10次對照樣本得出批內標準差s，計算各濃度樣本的dmax/s均大于3，查表可確定應重復檢測的次數為3次。

表1 AU5800上羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾值dobs

表2 強生V5600上羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾值dobs

1.5 方法

根據CLSI EP7-A2文件的實施方案要求，分別進行配對試驗和劑量效應試驗。分別在AU5800和強生V5600上對配制好的樣本進行檢測，各測定3次，取平均值。

1.6 數據分析

計算干擾值dobs和干擾效應的95%可信區間(CL),dobs為測試樣本均值和對照樣本均值之間的差值,計算dobs±t0.975,n-1s√￣2/n,如果其范圍不包括0，則可判斷對檢測結果有干擾，如dobs大于dmax則存在明顯干擾。

2.結果

2.1 BECKMAN AU5800低濃度樣本（70.3μmol/L）受干擾嚴重，不同濃度羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾值見表1、表2。

圖1 AU5800上羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾效應曲線

圖2 強生V5600上羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾效應曲線

3.討論

目前，我國檢測肌酐的主要方法有堿性苦味酸法和肌氨酸氧化酶法[3]，但由于堿性苦味酸法的特異性不好，試劑穩定性差，定標周期短等缺點，因此現在多數檢驗科都選擇肌氨酸氧化酶法作為檢測肌酐的常規方法，其具備特異性高和干擾因素少、不會產生有毒物質等優點，有利于快速自動化分析儀的檢測。它的原理是肌酐被肌酸酐酶水解為肌酸。生成的肌酸被肌酸酶水解為肌氨酸和尿素。肌氨酸氧化酶促進肌氨酸的氧化性脫甲基作用，產生氨基乙酸、甲醛和過氧化氫。過氧化物酶(POD)的出現，使已產生的過氧化氫和N-（3-磺丙基）-3-甲氧基-5-甲基苯胺(HMMPS)以及4-氨基安替吡啉起定量氧化縮合反應，產生藍色色素，肌酐濃度與在600/700nm處吸光率的變化成比例。干化學法與其不同的是色原不同。

羥苯磺酸鈣是一種改善微循環的血管保護藥，化學名稱為2，5一二羥基苯磺酸鈣一水合物，常用于治療糖尿病視網膜病變、糖尿病腎病、其他原因所致的慢性腎功能衰竭及冠心病等疾病。其機制是可降低毛細血管通透性，增強抗氧化能力，改善淋巴回流，減少血管內膜損傷；降低血液黏稠度，調節纖溶系統和凝血系統等機制，防止血栓形成，從而保護血管[4-5]。健康人單次服用500mg羥苯磺酸鈣后血藥濃度達峰時間為3～6小時，峰值濃度約8～15μg/ml,消除半衰期約在5小時左右。正常用量（每天1.0～1.5mg/日，分2～3次），6小時血藥濃度穩定，GFR正常的病人24小時血藥濃度均在6μg/ml以上。