水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）食用安全性毒理學評價

【摘 要】目的：評價水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）的食用安全性。方法：通過大鼠經口急性毒性試驗、遺傳毒性試驗及大鼠30天喂養試驗，評價Fruitflow?的食用安全性。結果：水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）對大鼠的急性經口最大耐受劑量大于20.0g/kg。Ames 試驗、小鼠骨髓微核試驗和精子畸形試驗結果均為陰性;大鼠30天喂養試驗各項指標也未見明顯的中毒癥狀，也無死亡。結論：水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）為無毒、無致突變作用的保健食品。

【關鍵詞】水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）;毒性試驗;安全評價

水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）是經物理工藝去除脂溶性成分后得到一種水溶性濃縮物，含有天然存在的抗血小板化合物，攝入后減少血小板聚集，從而將血液保持在流體和低凝狀態。這有助于防止在循環系統中形成微聚集體，以及防止血小板粘附到血管壁或脂肪斑上，從而保持健康的血液流通。但血小板功能沒有被完全抑制，并且保持在適當的水平，使得血小板在血管損傷時可以聚集[1]，國外對其功效進行了大量的人體試驗研究，但未對該濃縮物物進行毒理學評價。因此，本研究以GB15193.1-2014《食品安全性毒理學評價程序》為依據，對Fruitflow?進行毒理學研究，以評價其安全性，為Fruitflow?在保健食品、功能食品等領域的應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 藥物

水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）（批號：201701），由湯臣倍健股份有限公司提供，人體口服推薦劑量為0.15g/天，試驗時樣品均用蒸餾水配制和稀釋。

1.2 動物

SPF級ICR小鼠（體重18～22 g），雌雄各半，昆明小鼠（體重25～30 g）、SD大鼠（體重180～220 g）由廣東省醫學試驗動物中心提供，許可證號SCXK（粵）2013-002。動物飼養在屏障環境，飼養溫度為23～25℃，相對濕度在50%～70%之間，自然光照和黑暗交替12h/d，各組自由攝食和飲水，適應性喂養3-5天后隨機分組進行試驗。

1.3 試驗方法

1.3.1 急性毒性試驗

采用最大耐受量法，ICR小鼠，雌雄各半，采用最大耐受量 （MTD） 法。試驗前動物禁食16h。灌胃體積為0.2 ml/10g體重，折合劑量為20.0g/kg.BW，受試液混懸液經口灌胃2次。灌胃后連續觀察14d，觀察期間記錄小鼠的中毒癥狀、異常反應與死亡情況。

1.3.2 Ames試驗

采用經鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏茵組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株進行試驗。采用多氯聯苯（PCB）誘導的大鼠肝微粒體酶（S-9）作為體外代謝活化系統。試驗設立8、40、200、1000、5000?g/皿5個劑量，同時設立自發回變組、溶劑對照組和陽性對照組。按平板摻入法在加與不加代謝活化系統（±S9）的條件下進行，每組設3個平行皿，重復2次。

1.3.3 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗

昆明種小鼠，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，分別為陰性對照（植物油）、陽性對照（環磷酰胺40mg/kg）、fruitflow?（2.5g/kg，5.0g/kg和10g/kg）組。復合提取物用植物油配成相應劑量的受試液給小鼠灌胃。采用間隔 24h 兩次經口灌胃法進行試驗，按20 ml/kg體重灌胃，末次給樣后6小時處死動物，取胸骨骨髓制片。每只動物計數200個嗜多染紅細胞（PCE），計算嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比值 （PCE/NCE）;同時計數1000個PCE中含微核的細胞數，計算微核率。

1.3.4 小鼠精子畸形試驗

將雄性昆明小鼠隨機分為5組，每組5只，分別為陰性對照（植物油），陽性對照（環磷酰胺40mg/kg），fruitflow?（2.5g/kg，5.0g/kg和10g/kg）組，按20ml/kg體重灌胃給藥，每日灌胃一次，連續5d。末次灌胃后第30d處死動物，取雙側附睪，做精子涂片，伊紅染色，每只動物計數1000個完整精子，計算精子畸形率。

1.4 數據統計分析

采用SPSS22.0軟件進行數據統計。微核試驗采用Poisson分布U檢驗，精子畸形試驗采用卡方檢驗對數據進行統計處理，大鼠 30d喂養試驗各數據進行方差分析，以P<0.05作為顯著性水平。

2 結果

2.1 急性毒性試驗

由表1可見，以20.0g/kg劑量給兩種性別的ICR種小鼠灌胃后未見明顯中毒癥狀，觀察14天未出現死亡。觀察期末將動物處死進行解剖檢查，肝、脾、胃、腸、心、肺等主要臟器，未見明顯的異常改變。表明Fruitflow?對雌、雄ICR小鼠的最大耐受劑量均大于20.00g/kg，屬無毒級。

2.2 Ames試驗

由表2可見，在Ames試驗中無論是否加S9， Fruitflow?各劑量組的回變菌落數都沒有超過自發對照組的2倍，并且各劑量組之間未出現劑量—反應關系。說明Fruitflow?不具有致突變作用。

2.3 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗

由表3可見，與陰性對照組相比， Fruitflow?各劑量組的微核率未出現顯著性差異（P>0.05），而環磷酰胺陽性組的微核率差異顯著（P<0.05）。Fruitflow?各劑量組嗜多染紅細胞 （PCE）與成熟紅細胞 （NCE） 的比值未少于陰性對照組的20%，說明Fruitflow?未表現出細胞毒性。

2.4 小鼠精子畸形試驗

由表4可見，與陰性對照組相比， Fruitflow?各劑量組的小鼠精子畸形發生率未見顯著性差異（P>0.05），而環磷酰胺陽性對照組差異顯著（P<0.05）。說明Fruitflow?對小鼠精子無致畸作用。

3 結論

水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）是第一個獲得歐洲食品安全局（EFSA）13.5健康聲稱條款批準的天然健康安全配料，經多個科學研究證明可促進健康血液循環，可廣泛應用于保健食品、功能食品等健康產品領域。研究表明，血小板在動脈粥樣硬化的形成過程中起著非常重要的作用，可誘導、加速動脈粥樣硬化的發生和發展。炎癥等因素的刺激下，活化的血小板粘附血管內皮，釋放一系列生物活性物質，增強白細胞募集、活化和遷移，增加脂質在血管壁的沉積，誘導動脈粥樣硬化斑塊的形成，阻礙血流的正常運行[2]。對于已發生動脈粥樣硬化的患者而言，他們的血管壁上會出現許多斑塊，這些斑塊一旦破裂，生理性止血反應便會被“放大”，形成 病理性血栓[3]，堵塞血管，發生 腦缺血、 腦卒中、 心絞痛、 心肌梗塞等一系列嚴重的心血管事件。流行病學研究證據也表明，動脈粥樣硬化性心血管病（冠心病[4]、腦卒中[5]、周圍動脈疾病[6]）患者血小板聚集率、血小板活化后分泌的生物活性物質顯著升高。除此以外，動脈彈性的減弱也與血小板的異常活化有關[7]。因此，維持正常血小板功能（防止異常活化和聚集）是防治動脈粥樣硬化及心血管疾病的基礎。Fruitflow?具有“維持正常的血小板聚集，有助于血流健康”的功效，其安全性在動物試驗中也得到了進一步的驗證。

在本實驗室條件下， Fruitflow?對ICR小鼠的急性經口最大耐受量（MTD）大于20.00g/kg; Ames試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗和小鼠精子畸形試驗結果未見Fruitflow?有致突變作用。因此，本研究結果表明Fruitflow?未見明顯毒副作用，為水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）作為保健食品的研究開發提供了重要的毒理學科學依據。

參考文獻

[1]The EFSA Journal （2009）1101， 1-15.

[2]項榮等.血小板：動脈粥樣硬化的誘導者和推動[J].中國細胞生物學學報，2010，32（5）：777-780.

[3]李佳蓓，黃嵐.血小板在動脈粥樣硬化血栓形成中的作用[J].中華心血管病雜志，2014，42（2）：175-177.

[4]馬建林等.血小板膜糖蛋白和血小板凝集率變化與冠心病的臨床意義，2010，12（1）：34-36.

[5]張江山等.缺血性腦卒中患者血小板功能與缺血性血管事件復發的相關性研究，2016，49（6）：451-457

[6]Takashi Kudoh et al. Relation between platelet microaggregates and ankle brachial index in patients with

[7]peripheral arterial disease. Thrombosis Research， 2006，117，263-269.

作者簡介

汪玉芳（1982-），女，安徽省太湖縣人。碩士研究生學歷。職稱：執業中藥師、執業醫師。主要研究方向為藥品與保健食品研發。