槐樹不同部位蘆丁含量的比較研究

雷燕妮,張小斌

(1.商洛學院 生物醫藥與食品工程學院,陜西 商洛 726000；2.商洛學院 健康管理學院、中國中醫科學院商洛中藥材GAP科研工程中心,陜西 商洛 726000)

伴隨著現代化生活的步伐，人們心腦血管疾病的發病急劇攀升。故預防及治療心腦血管疾病的藥品被廣泛關注，其中黃酮類化合物是治療該類疾病的代表藥物。蘆丁作為槐樹花蕾槐米的重要組成成分，其功能主要包括抗菌作用和止血作用[1]，其對紫外線的吸收功能，讓它作為天然防曬劑而被廣泛應用[2，3]。

蘆丁的維生素P樣具備改善毛細血管的透通性，不僅擁有一定抗過敏和抗炎性，而且還可以防范血小板積聚等功能[4]。目前臨床上蘆丁廣泛應用于高血壓病的防治，以及部分出血性疾病，并且對于糖尿病及并發病癥的預防和治療也有應用[5]。總之，蘆丁開發潛力巨大，它被廣泛的用于預治心腦血管病和高血壓、糖尿病等疾病，蘆丁需求量每日劇增，原料供不應求，原料短缺，而陜西商洛為槐花、槐米的主要生產區，面對緊張的供應需求，本實驗的研究為進一步發掘槐樹其它部位蘆丁的含量，擴大蘆丁藥源，擴大槐樹其他部位的利用率提供理論依據。

1 材料與儀器

1.1 實驗材料

采集地點：秦嶺南坡槐樹(國槐)；

采集時間：槐米：4.10-4.28；

槐花、花梗：4.29-5.15；

槐角：9.10-10.20。

1.2 實驗試劑

蘆丁對照品(石家莊啟迪科技有限公司，批號100080-201408,含量92.8%)，甲醇為分析純，色譜純甲醇，純凈水，硼酸，冰醋酸等。

1.3 實驗儀器

MS220電子天平(Radwag)；HH-M6電熱恒溫水浴鍋(上海赫田科學儀器有限公司)；高效液相色譜儀包括LC-20AT泵、SPD-20A檢測器 (日本島津制作所)；SHB-IIIG臺式循環水式多用真空泵(鄭州長城)；KQ2200系列臺式超聲波清洗器(上海精密儀器有限公司)；移液槍，移液管，吸液球，容量瓶等。

2 實驗方法

2.1 樣品制備

將采集的不同部位槐米、槐花、槐花花梗、槐角晾干；60℃恒溫箱保存6 h；稱取上述干燥原料各100 g，并將其進行粉碎，過篩(3號50目)，編號備用。

2.2 提取方法考察

通過蘆丁性質，對諸多提取方法綜合考察，結果表明超聲法效果顯著[6，7]。

超聲法主要是利用超聲波的空化作用[8]，它是通過固有頻率的超聲波使液體中大小尺寸合適的氣泡共振，將細胞壁振破，從而使有效成分分離。

2.3 線性關系考察

重在考察被測組分濃度與峰面積間的線性范圍。準確稱取60攝氏度下干燥的蘆丁5.0 mg，并給其加入25 mL的70%甲醇，加水至50 mL，其濃度為100 ug·mL-1。準確吸取1.0 、2.0、3.0、4.0、5.0 μL分別置于10 mL量瓶中，加入甲醇，使蘆丁含量分別為10、20、30、40、50 ug·mL-1；按上述色譜條件測定，縱坐標和橫坐標分別為峰面積、對照品濃度，進行回歸，并計算出曲線方程和相關系數。

結果：曲線方程為y=4 981.2x+5 243.5，相關系數R=0.9989；表明蘆丁在(10 ～50 ug·mL-1)的濃度間與峰面積線性關系良好。

表1 標準品配制濃度與峰面積

2.4 精密度考察

進行重現性實驗。精密吸取濃度為30 μg·mL-1蘆丁標準溶液10 μL進行液相色譜測定，重復進樣5次，記錄其峰面積，并計算RSD%(相對標準偏差)。

結果：蘆丁峰面積平均積分值為：153 769.5，RSD為2.2%，表明精密度良好。

表2 精密度測試結果(n=5)

2.5 樣品中蘆丁含量測定

參考相關文獻資料[9，10]，筆者對槐樹上槐米、槐花、槐花花梗、槐角等不同部位的蘆丁用HLPC，并分別對其內在含量進行相應的測定。

2.5.1 色譜條件與系統適應性 色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1%冰醋酸(32∶68)為流動相；檢測波長為257 nm；柱溫為室溫；流速：1.0 mL·min-1;進樣量：10 uL。

2.5.2 供試品溶液配制 精密稱取槐花、槐米、槐角、花梗各7.5 g(各6份)。

將硼酸0.08 g置于150 mL的三角瓶中，加入70%甲醇30 mL,并給予超聲波提取，得到濾液；將濾渣再次超聲提取兩次，將這三次的濾液定容至100 mL。精密量取1 mL于25 mL量瓶中，加水至刻度，得到0.3 mg·mL-1的供試品溶液，備用。

2.5.3 測定法 針對對照和供試品溶液各10 μl進行吸取，并將其注入液相色譜儀進行測定，對兩者在溶液中蘆丁的峰面積進行詳細記錄，并根據以下公式對試品溶液中蘆丁的含量進行計算：

式中：供試品峰面積為AX；

供試品深度為CX；

對照品的峰面積為AR為；

對照品的濃度為CR；

稀釋倍數為S；

稱樣量為W。

3 結果與分析

依據以上設置條件和方法，分別測試槐樹各個不同部位中蘆丁的含量，重復3次，分別計算平均值，結果見表1、圖1、圖2、圖3、圖4、圖5。

表1 不同部位蘆丁的濃度、峰面積、含量

圖1 蘆丁對照品色譜

圖2槐米中蘆丁含量色譜

圖3 槐花中蘆丁含量色譜

圖4 花梗中蘆丁含量色譜

圖5槐角中蘆丁含量色譜

通過對表1、圖1、圖2、圖3、圖4、圖5的結果進行綜合分析可知在相同條件下，對采集不同時期槐樹不同部位的蘆丁進行提取并測定含量，其含量從高到低依次為：槐米(16.48%)>槐花(13.06%)>槐花梗(7.83%)>槐角(1.99%)，其中槐米中蘆丁含量16.48%為最高。依據實驗結果分析槐樹四種不同部位的蘆丁含量的不同，可能與產地種植條件、存放時間、干燥方法，以及該品種類型、采集期等相關因素，有著密切聯系。

4 討論

蘆丁在我國主要以槐米的形式提取，需求量極大，約1 000 t·a-1，國際上則以法國、比利時為消費大國，需求量在500 t左右[11]，而槐米的資源仍不充分，很難滿足人類需要，故急需尋求更多增加蘆丁產量的方法，緩解供需緊張，可見，加大心血管藥物的來源就顯得尤為重要。

采用超聲波提取法對槐樹上槐米、槐花、槐花花梗、槐角等不同部位的蘆丁進行提取，用HLPC對其含量分別進行測定。結果表明其含量分別為：槐米16.48%，槐花13.06%，槐角1.99%，槐花梗7.83%。從各部位含量以及與生物總量的關系綜合考慮，以采集槐米提取蘆丁為好，如果采集時間已過，亦可采集槐花、花梗以擴大藥源。過去藥農采收槐米或槐花時，常用的方法是剪掉槐米或槐花的整個花序，干燥，它的花蕾就會脫落，花梗棄去不用，通過筆者試驗，測出花梗中蘆丁含量為7.8%，而且總重量可以達到槐米的3倍，因此今后槐花采集加工無需剪掉花梗直接采摘，工廠無特殊要求可直接帶花梗提取蘆丁，既節省人力又節約了資源，變廢為寶。