2014年～2018年遼寧省兩種蝦苗中WSSV、TSV監測情況分析

陳靜，耿紅衛，李重實，李文杰，白鵬

（遼寧省農業發展服務中心，遼寧大連116015）

對蝦養殖業是遼寧省水產養殖業的重要組成部分，主要以中國對蝦、凡納濱對蝦（即南美白對蝦）養殖為主。近幾年，隨著海參養殖產業持續下滑，對蝦養殖呈上升趨勢。遼寧省蝦年產量由2014年的31572噸攀升到2018年的50000余噸；蝦類育苗數量也從2014年近140億尾上升到2018年180余億尾。影響對蝦養殖產量的主要因素之一是病害，為掌握對蝦病害情況，提高預警能力，為其防控提供參考。遼寧省水產苗種管理局自2014年起對中國對蝦和凡納濱對蝦苗種進行兩種病毒（WSSV、TSV）的監測，近五年監測情況如下。

1 .材料和方法

1.1 采樣

2014年～2018年每年5月中旬～6月中旬，分別從大連市、丹東市、營口市、錦州市、盤錦市、葫蘆島市等對蝦主要養殖區苗種生產場，采集中國對蝦仔蝦和凡納濱對蝦仔蝦樣品。具體采樣方法依據《水生動物產地檢疫采樣技術規范》（SC/T 7103-2008）的相關規定執行[1]。

1.2 方法

1.2.1 WSSV檢測

按照天根生化科技有限公司海洋動物組織基因組DNA提取試劑盒操作步驟，提取各待測樣品中的基因組總DNA，于-20℃下保存備用。按照《白斑綜合征（WSD）診斷規程 第2部分 套式PCR檢測法》（GB/T 28630.2-2012）檢測方法進行樣品WSSV檢測[2]。

1.2.2 TSV檢測

按照天根生化科技有限公司動物組織總RNA提取試劑盒操作步驟，提取各待測樣品中的基因組總RNA，于-20℃下保存備用。按照《對蝦桃拉綜合征檢疫技術規范》（SN/T 1151.1-2011）[3]檢測方法進行樣品TSV檢測。

2 結果分析

2.1 中國對蝦仔蝦中WSSV的檢測結果

2014年～2018年對中國對蝦仔蝦樣品中WSSV的檢測結果（見表1）顯示，WSSV年度總檢出陽性率呈現先下降后上升的現象。部分對蝦樣品WSSV的PCR檢測結果如圖1所示，第1次PCR產物經電泳后，陽性對照樣品及陽性檢出樣品在1447bp處出現1條特異性條帶，在第2次PCR結果顯示在941bp處有明顯條帶，而空白對照樣品和陰性對照樣品則在1447bp或941bp處均無條帶。

表1 中國對蝦仔蝦中WSSV的檢測結果

圖1 部分中國對蝦仔蝦樣品WSSV PCR電泳譜圖

2.2 凡納濱對蝦仔蝦中WSSV檢測結果

2014年～2018年對凡納濱對蝦仔蝦中WSSV檢測結果（見表2）顯示，年度陽性率呈現先下降后上升的趨勢。部分對蝦樣品PCR檢測結果如圖2所示。

表2 凡納濱對蝦仔蝦中WSSV的檢測結果

圖2 部分凡納濱對蝦仔蝦樣品WSSV PCR電泳譜圖

2.3 中國對蝦仔蝦中TSV的檢測結果

2014年～2018年對中國對蝦仔蝦中TSV的檢測結果（見表3）顯示，2014年和2018年有檢出，陽性率分別為2.0%和1.9%，其余年份均沒有檢出。部分對蝦樣品PCR檢測結果如圖3所示，陽性對照樣品和陽性檢出樣品的電泳譜圖在231bp處出現目的條帶，而空白對照樣品和陰性對照樣品均無條帶。

表3 中國對蝦仔蝦中TSV的檢測結果

圖3 部分中國對蝦仔蝦樣品TSV PCR電泳譜圖

2.4 凡納濱對蝦仔蝦中TSV檢測結果

2014年～2018年對凡納濱對蝦仔蝦中TSV的檢測結果（見表4）顯示，五年間TSV均有檢出，陽性率分別為13.6%、9.5%、6.7%、14.8%、11.1%。部分對蝦樣品PCR檢測后，電泳譜圖，如圖4所示。

表4 凡納濱對蝦仔蝦中TSV的檢測結果

圖4 部分凡納濱對蝦仔蝦樣品TSV PCR電泳譜圖

3 討論

從2014年～2018年五年間對中國對蝦仔蝦和凡納濱對蝦仔蝦中WSSV和TSV的監測結果看，我國對蝦仔蝦WSSV的陽性率明顯高于凡納濱對蝦；而凡納濱對蝦仔蝦TSV的陽性率明顯高于中國對蝦。這說明WSSV較易感染中國對蝦，而TSV較易感染凡納濱對蝦。

眾所周知，WSSV的感染力極強，是對蝦類危害較大的一種病毒。WSSV傳播速度較快，對蝦感染后死亡率可高達100%，在1993年爆發以來，其對全球對蝦養殖業危害嚴重，經濟損失巨大（Cavalli LS et al,2008；薛暉等，2010）[4,5]。在對WSSV陽性檢出的苗種場家跟蹤調查中也發現，中國對蝦仔蝦感染后，死亡速度較快，幾乎全部死亡；而且還發現前一年WSSV陽性檢出的苗種場家，下一年陽性檢出的幾率也較高。五年間凡納濱對蝦仔蝦中WSSV陽性率較低，危害較輕。馮亞萍等的研究結果顯示，中國對蝦野生群體對WSSV的敏感性高于凡納濱對蝦[6]；而且不同溫度下凡納濱對蝦耐受WSSV能力也要高于中國對蝦[7]。Tsai et al研究也顯示凡納濱對蝦對WSSV有一定的抵抗力，死亡率與養殖環境和管理水平呈現負相關，存活個體終生帶毒[8]。

TSV主要侵害凡納濱對蝦，1992年首次發現于厄瓜多爾桃拉河（Taura）地區，因此而得名。五年間對中國對蝦仔蝦和凡納濱對蝦仔蝦TSV監測結果顯示，凡納濱對蝦仔蝦TSV陽性率為6.7%～14.8%；而中國對蝦仔蝦TSV只在2014年和2018年各有1例陽性檢出。因此，說明TSV對凡納濱對蝦危害較大，這與馮東岳等的研究結論一致[9]。

中國對蝦是一種暖水性大型蝦類，經濟價值極高，是黃渤海主要捕撈對象和支柱產業，也是我國重要的土著海水養殖種類之一。為了保護這一資源，遼寧省從1984年開始實施大規模增殖放流工作。凡納濱對蝦俗稱南美白對蝦，于20世紀80年代從夏威夷引入我國。因其適應能力強、殼薄肉肥、味道鮮美，養殖地域和養殖規模不斷增大，屬于世界上養殖最多、產量最大的三大蝦類之一。近幾年，我國關于對蝦病害的報道屢見不鮮，不再是單一的病原，而呈現多樣化[10]。作為一名水產苗種管理工作者，對蝦養殖病害防控工作面臨巨大的挑戰。為有效地控制遼寧省對蝦病害的發生。一是要加大養殖對蝦流行疾病的監測力度，對已知病原進行普查，而及時有效地指導防控工作；二是要盡早全面開展水產苗種產地檢疫工作，防止水產苗種帶病流通，確保對蝦養殖健康可持續發展。