結核桿菌核酸定量檢測與T-SPOT.TB檢測在肺外結核病診斷中的應用分析

王慧

吉林省疾病預防控制中心結核病實驗室，吉林長春 130000

結核病是一種傳染性疾病，包含肺外結核與肺結核，發病率較高，嚴重威脅人們的健康安全。常見的肺外結核疾病有結核性腦炎、結核性胸膜炎、腎結核等，病因復雜，如結核性胸膜炎的病因包括淋巴引流障礙、胸膜受感染病原體侵入、感染病原體由血液與淋巴侵入胸膜等[1]。結核病的傳統這怒單方法為涂片鏡檢、結核桿菌培養、血清結合抗體檢驗等，而肺外結核疾病在診斷時受到很多因素影響，如自身因素等，在短時間內無法明確診斷。近年來，隨著我國的醫療技術發展迅猛，更多的肺外疾病診斷方法應用于臨床，如結核桿菌核酸定量檢測、T-SPOT.TB等，均具有顯著的診斷效果。該文將以2018年2月—2019年2月的200例患者為對象，探究結核桿菌核酸定量檢測與結核感染T細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）在肺外結核病診斷中的應用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究涉及對象為肺外感染患者200例。所有患者中，男、女患者分別為122例與78例；年齡在18～80歲之間，平均年齡為（43.85±6.71）歲；結核性腦炎、結核性胸膜炎、腎結核分別為46例、116例、38例。納入標準：資料齊全；以《臨床診療指南：結核病分冊》為診斷標準；胸腔積液、尿液、腦脊液中可見結核分枝桿菌；病理活檢可見干酪性肉芽腫；影像學診斷具備肺外感染疾病特征；臨床特點與肺外感染疾病相符合。排除標準：惡性腫瘤；精神障礙；不配合研究者[2]。研究組和參照組患者的基本信息組間差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 設備選擇 T-SPOT．TB試劑盒 (生產廠家：英國Immunotec公司)，DA-7600PCR擴增儀及配套試劑 （生產廠家：中山大學達安基因股份有限公司）。

1.2.2 T-SPOT.TB 樣本處理：取40～50 mL胸腹水、尿液、腦脊液，加入0.2 mL肝素進行抗凝；富集T淋巴細胞，使用1640培養液將其調整至7 mL，隨后洗滌，并調整技術后細胞濃度為1.0×106個／mL[4]。判斷標準：陽性：空白對照孔斑點數0～5個，抗原A（抗原B）斑點數超過空白對照孔斑點數6個及以上；空白對照孔斑點數6～10，抗原A（抗原B）斑點數超過超過空白對照孔斑點數的2倍及以上。陰性：不符合陽性判斷標準，陽性質控對照孔正常[5]。

1.2.3 結核桿菌涂片鏡檢 樣本處理：取尿液、胸腹水、腦脊液標本置入1.0～1.5 mL離心管，進行離心操作，將上清液去掉，待沉淀以后加入DNA提取物50 μL充分混勻，在100℃的恒溫水中，水浴10 min，隨后離心操作5 min，使用50 uL陰性質控品與50 μL陽性質控品，加入等量的DNA提取液混合均勻。在鏡檢之前，取標本離心處理，20 mL離心操作5 min，取沉淀物進行涂片操作，應用抗酸染色液進行染色。

PCR結果若超過50copies則表示診斷有意義；抗酸染色結果：1 000倍顯微鏡下對100個視野進行觀察，可見抗酸桿菌1～9條即為陽性。

1.3 觀察指標

對比T-SPOT.TB、結核桿菌涂片、結核桿菌核酸定量檢測的檢測結果，進行統計學分析。

1.4 統計方法

將研究中的各項數據結果輸入SPSS 19.0統計學軟件進行分析，計量資料用（±s）表示，用t檢驗，計數資料以[n(%)]表示，用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 T-SPOT.TB、結核桿菌涂片陽性率比較

T-SPOT.TB檢測陽性率（90.50%）明顯高于結核桿菌涂片陽性率（21.00%），組間差異有統計學意義（χ2=195.799，P＜0.05）。 見表 1。

表1 T-SPOT.TB、結核桿菌涂片陽性率比較

2.2 結核桿菌核酸定量、結核桿菌涂片陽性率比較

結核桿菌核酸定量檢測陽性率（94.00%）明顯高于結核桿菌涂片陽性率（21.00%），組間差有統計學意義（χ2=221.4094，P＜0.05）。 見表 2。

表2 結核桿菌核酸定量、結核桿菌涂片陽性率比較

2.3 T-SPOT.TB、結核桿菌核酸定量陽性率分析

T-SPOT.TB檢出陽性率（90.50%）與結核桿菌核酸定量檢測（94.00%）相比，組間差異無統計學意義（χ2=2.306，P＞0.05）。 見表 3。

表3 T-SPOT.TB、結核桿菌核酸定量陽性率分析

3 討論

T-SPOT.TB診斷所運用的技術為酶聯免疫斑點技術，是對效應T淋巴細胞數量進行測定，結核性胸膜炎患者由于受到結核分枝桿菌的特異性抗原的刺激[3]，從而造成IFN-γ釋放效應T淋巴細胞。大量臨床實踐表明，TSPOT.TB診斷具有較高的敏感度，約為90%[4]，可在臨床中推廣使用。在肺外結核患者中，伴隨胸腔積液、腦脊液等產生，在發病期間，結核分枝桿菌對局部感染容易產生隔室效應，效應T淋巴細胞由血液進入至胸腔積液、腦脊液，發揮其免疫學效應[5]，而結核分枝桿菌的潛伏感染對肺外積液內的效應T淋巴細胞影響小，因此肺外積液TSPOT.TB診斷在結核性胸膜炎的診斷價值更高。有學者[6]對T-SPOT.TB的胸腔積液與外周血分別進行檢測，結果表明前者特異性T淋巴細胞數量為后者的4.6倍，證實了特異性T淋巴細胞在發生結核性胸膜炎時由外周血遷移至胸膜腔，以及胸腔積液T-SPOT.TB診斷在結核性胸膜炎患者中具有較高的診斷價值。由此可見，胸腔積液、腦脊液中行T-SPOT.TB診斷的肺外結核病檢出率較高。該次研究結果可見，T-SPOT.TB檢測陽性率（90.50%）明顯高于結核桿菌涂片陽性率（90.50%），組間差異有統計學意義（χ2=195.799，P＜0.05）。 與張忠原[7]學者研究結果:非結核病 64例，其中陽性 5例，占7.81%，陰性 59例，占92.19%。熒光定量核酸擴增技術檢查結核病陽性率比較，差異有統計學意義(P＜0.005)，保持一致。

大量臨床實踐表明[8]，結核桿菌核酸具有良好的特異性，且敏感度較高，在胸腹、腦脊液、尿液、痰液等標本均可行PCR診斷，若結果為陽性，則可歐威結核病診斷重要依據。該次研究結果可見，結核桿菌核酸定量檢測陽性率明顯高于結核桿菌涂片陽性率，組間差異有統計學意義(P＜0.05)。有學者[9]選取109例肺外結核病患者進行研究，結核桿菌涂片診斷陽性率為20.1%，全血T-SPOT診斷陽性率為99.10%，結核桿菌核酸定量結果陽性率為95.4%，組間差異有統計學意義(P＜0.05)。該次研究中，T-SPOT.TB檢出陽性率與結核桿菌核酸定量檢測相比，組間差異無統計學意義（P＞0.05）。

綜上所述，結核桿菌核酸定量檢測與T-SPOT.TB均可用于肺外結核病的診斷中，具有較高的檢出率，有利于肺外結核疾病患者的治療，值得臨床上推廣及使用。