淋巴細(xì)胞亞群在腦炎診斷中的臨床研究*

劉淑靜，魏方澤，鄭光輝，劉 杰，司學(xué)眾，康熙雄，張國軍△

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院檢驗(yàn)科,北京 100070;2.北京市免疫試劑臨床工程技術(shù)研究中心，北京100070;3.首都醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)系，北京 100070)

腦炎是常見中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，以病毒性腦炎和細(xì)菌性腦炎最常見。病毒性腦炎發(fā)病率為每10萬人1～17例，細(xì)菌性腦炎發(fā)病率為每10萬人1～2例[1]。這兩種腦炎的發(fā)病與病原體及其釋放的毒素直接對(duì)中樞神經(jīng)組織和細(xì)胞造成損害及機(jī)體在病原體刺激下產(chǎn)生強(qiáng)烈持久的免疫應(yīng)答而產(chǎn)生的炎性反應(yīng)有關(guān)。淋巴細(xì)胞作為機(jī)體重要的免疫細(xì)胞在病毒和細(xì)菌性腦炎中起著重要的作用，包括T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞3種。通過對(duì)淋巴細(xì)胞的監(jiān)測(cè)，研究在不同病原體感染狀態(tài)下患者細(xì)胞的免疫功能，對(duì)輔助診斷疾病及了解疾病發(fā)生機(jī)制起著重要的作用。

傳統(tǒng)診斷病毒性腦炎和細(xì)菌性腦炎依賴于找到致病的病原體。目前常用的方法是細(xì)菌培養(yǎng)、病毒分離和特異性抗原抗體檢測(cè)等，這些檢測(cè)方法耗時(shí)長、易污染[2-3]。本研究通過測(cè)定病毒性腦炎和細(xì)菌性腦炎患者血細(xì)胞及淋巴細(xì)胞亞群，探討淋巴細(xì)胞亞群在病毒性腦炎和細(xì)菌性腦炎中的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年1月至2019年2月在北京天壇醫(yī)院確診的住院患者。

1.2入組標(biāo)準(zhǔn) 具有神經(jīng)系統(tǒng)感染臨床表現(xiàn)，體溫大于38.3 ℃，頭疼，頸部強(qiáng)直等；經(jīng)抗病毒治療有效且病毒性抗體檢測(cè)陽性作為病毒性腦炎組；患者腦脊液培養(yǎng)陽性，有明確的病原體診斷作為細(xì)菌性腦炎組。排除存在腫瘤、自身免疫性疾病、嚴(yán)重肝病、腎病和其他感染性疾病的患者。

1.3儀器與試劑 血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞所用儀器為MINDRAY公司的血細(xì)胞分析儀CAL8000，試劑為配套試劑。血淋巴細(xì)胞使用儀器為BD公司的免疫熒光FACSC CantoⅡ流式細(xì)胞儀，試劑為BD MultitestIUIMK kit試劑盒。

1.4方法 血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞使用多通道組合分析技術(shù)，通過逐一捕獲標(biāo)本中單個(gè)細(xì)胞的光電信號(hào)迅速檢測(cè)標(biāo)本中各細(xì)胞的水平，并根據(jù)各血細(xì)胞計(jì)數(shù)及總細(xì)胞數(shù)計(jì)算各血細(xì)胞所占百分比。血淋巴細(xì)胞亞群分析采用免疫熒光標(biāo)記方法，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定熒光信號(hào)強(qiáng)度來確定血液中B細(xì)胞百分比、自然殺傷細(xì)胞百分比、T細(xì)胞百分比、輔助性T細(xì)胞百分比、抑制性T細(xì)胞百分比、CD4+CD8+雙陽細(xì)胞百分比、CD4-CD8-雙陰細(xì)胞百分比、輔助性T淋巴細(xì)胞與抑制性T淋巴細(xì)胞之比。根據(jù)淋巴細(xì)胞亞群的百分比和淋巴細(xì)胞總數(shù)，估算淋巴細(xì)胞亞群的絕對(duì)計(jì)數(shù)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)采用中位數(shù)表示。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，將P<0.05的項(xiàng)目繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線)，并計(jì)算每一檢查項(xiàng)目的ROC曲線下面積(AUC)、靈敏度、特異度、截?cái)嘀档取UC的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)為優(yōu)異(0.90～1.00)、良好(0.80～0.89)、適中(0.70～0.79)、較差(0.60～0.69)，失敗(0.50～0.59)。

2 結(jié) 果

2.1基本情況 患者基本情況其中病毒性腦炎組患者共99例，其中女39例，男60例，年齡14～76歲，中位數(shù)為33歲。細(xì)菌性腦炎組患者21例，其中女11例，男10例，年齡16～82歲，中位數(shù)為45歲。

2.2血細(xì)胞結(jié)果分析 將兩組腦炎的血細(xì)胞進(jìn)行比較分析，見表1。病毒性腦炎組的白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)水平較細(xì)菌性腦炎組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。病毒性腦炎組的單核細(xì)胞百分比與細(xì)菌性腦炎組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3血淋巴細(xì)胞分析

2.3.1血淋巴細(xì)胞亞群百分比計(jì)數(shù)分析 將兩組腦炎的血淋巴亞群細(xì)胞百分比進(jìn)行比較分析，見表2。病毒性腦炎組中自然殺傷細(xì)胞百分比與細(xì)菌性腦炎組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3.2血淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)計(jì)數(shù)分析 將兩組腦炎的血淋巴亞群細(xì)胞數(shù)進(jìn)行比較分析，見表3。病毒性腦炎組中B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、抑制性T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)與細(xì)菌性腦炎組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 腦炎患者血細(xì)胞計(jì)數(shù)和百分比

2.4指標(biāo)的診斷效能 在兩組腦炎中共8項(xiàng)指標(biāo)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，將有顯著差異項(xiàng)目進(jìn)行ROC曲線分析，結(jié)果見表4。指標(biāo)的靈敏度和特異度差異較大，其中T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)和抑制性T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)的靈敏度較好,T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)值，白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)及單核細(xì)胞百分比的特異度較好，其中B淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)值特異度最高。

將診斷指標(biāo)進(jìn)行組合，進(jìn)行聯(lián)合診斷，結(jié)果見表5。其中抑制性T細(xì)胞數(shù)與淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)聯(lián)合、B淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)聯(lián)合、B淋巴細(xì)胞與抑制性T細(xì)胞數(shù)聯(lián)合、淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)與白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)聯(lián)合診斷效能，效能適中(AUC>0.7)。B淋巴細(xì)胞與白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、抑制性T細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)四項(xiàng)聯(lián)合；B淋巴細(xì)胞與抑制性T細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)三項(xiàng)聯(lián)合，B淋巴細(xì)胞與自然殺傷細(xì)胞百分比、T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、抑制性T細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞百分比和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)共8項(xiàng)聯(lián)合，以及自然殺傷細(xì)胞百分比與T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞百分比、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)四項(xiàng)聯(lián)合診斷效能，效能較好(AUC>0.8)。

表2 腦炎患者血淋巴細(xì)胞亞群百分比

續(xù)表2 腦炎患者血淋巴細(xì)胞亞群百分比

表3 腦炎患者血淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)(×108/L)

表4 腦炎患者單個(gè)項(xiàng)目診斷效能分析

表5 腦炎患者多項(xiàng)目聯(lián)合診斷效能分析

續(xù)表5 腦炎患者多項(xiàng)目聯(lián)合診斷效能分析

注：1為抑制性T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)；2 為B淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合白細(xì)胞計(jì)數(shù)；3為 B淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合抑制性T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)；4為 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)聯(lián)合白細(xì)胞計(jì)數(shù)；5 為B淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、抑制性T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)四項(xiàng)聯(lián)合；6 為B淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、抑制性T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)三項(xiàng)聯(lián)合；7為全部指標(biāo)聯(lián)合；8為自然殺傷細(xì)胞百分比與T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞百分比及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)四項(xiàng)聯(lián)合

3 討 論

病毒性腦炎和細(xì)菌性腦炎是由各種病毒和細(xì)菌等感染引起的軟腦膜急性彌漫性炎癥，病死率很高且臨床表現(xiàn)不典型[4-5]。一年四季均可發(fā)病，可累及腦膜和腦實(shí)質(zhì)，首發(fā)癥狀為發(fā)熱、頭痛、嘔吐等腦膜刺激征。病毒性腦炎急性發(fā)病時(shí)病死率高達(dá)70%，幾乎所有的病毒均可致病，其中大多數(shù)為腸道病毒。細(xì)菌性腦炎病原體以腦膜炎球菌最多，其他病原體還可見流感桿菌、肺炎球菌、大腸桿菌及其他革蘭陽性桿菌、葡萄球菌等[1]。目前，對(duì)于病毒性腦炎和細(xì)菌性腦炎診斷的金標(biāo)準(zhǔn)仍是微生物培養(yǎng)，但培養(yǎng)的時(shí)間較長[6]。血常規(guī)和淋巴細(xì)胞亞群中各項(xiàng)指標(biāo)在診斷腦膜炎與控制抗菌藥物使用發(fā)揮著重要的作用。特別是淋巴細(xì)胞亞群在腦炎病程中發(fā)揮著重要的作用，但相關(guān)研究較少。本研究通過對(duì)淋巴細(xì)胞亞群的監(jiān)測(cè)，了解在不同病原體感染狀態(tài)下患者細(xì)胞的免疫功能，以輔助診斷腦炎的類型。

本研究分為病毒性腦炎和細(xì)菌性腦炎兩組，通過對(duì)本院的99例病毒性腦炎和21例細(xì)菌性腦炎的血細(xì)胞和淋巴細(xì)胞亞群回顧性分析，找出8項(xiàng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異標(biāo)志物。病毒性腦炎組的白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)水平較細(xì)菌性腦炎組升高。

本研究中病毒組白細(xì)胞數(shù)高于細(xì)菌組可能是淋巴細(xì)胞高所致。由于病毒可直接損傷神經(jīng)元與膠質(zhì)細(xì)胞，并誘導(dǎo)免疫炎性反應(yīng)，使機(jī)體出現(xiàn)免疫活性細(xì)胞，出現(xiàn)混合細(xì)胞反應(yīng)和淋巴細(xì)胞反應(yīng)，故病毒性腦炎組淋巴細(xì)胞或單核細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)[7]。而細(xì)菌性腦炎由于細(xì)菌入侵，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞產(chǎn)生和釋放前列腺素E2刺激中性粒細(xì)胞數(shù)升高，淋巴細(xì)胞數(shù)下降。故兩組腦炎患者的淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

中性粒細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的51%～75%，內(nèi)含吞噬素，溶菌酶等，具有趨化作用、殺菌作用和吞噬作用，來源于造血干細(xì)胞，在骨髓中分化發(fā)育后進(jìn)入組織或血液[8-9]。中性粒細(xì)胞在非特異性細(xì)胞免疫系統(tǒng)中有重要作用，在機(jī)體抵御微生物病原體，炎癥發(fā)生時(shí)，它們被趨化性物質(zhì)吸引到炎癥部位。有研究表明白細(xì)胞明顯增高，且中性粒細(xì)胞增高為主時(shí)提示細(xì)菌性感染[10-11]。但也有研究表明部分病毒性腦炎早期的中性粒細(xì)胞也可升高且占優(yōu)勢(shì)[12-13]，這與本研究結(jié)果一致。

對(duì)淋巴細(xì)胞亞群分別所占百分比及絕對(duì)計(jì)數(shù)進(jìn)行分析比較顯示，病毒性腦炎組中B淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、抑制性T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)高于細(xì)菌性腦炎組。淋巴細(xì)胞作為人體外周血中重要的免疫細(xì)胞，在外周血細(xì)胞中占20%～40%，主要分為T淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞[14]。淋巴細(xì)胞中B淋巴細(xì)胞主要參與人體的體液免疫，通過向T淋巴細(xì)胞呈遞抗原，T淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原并表達(dá)產(chǎn)物使B淋巴細(xì)胞激活轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生特異性的抗體來實(shí)現(xiàn)免疫功能。病毒性腦炎組的B淋巴細(xì)胞顯著高于細(xì)菌性淋巴細(xì)胞，可能是由于病毒進(jìn)入細(xì)胞后在宿主細(xì)胞中快速增殖，不僅可以使人體細(xì)胞凋亡，還可以誘發(fā)免疫病理反應(yīng)的抗原。而細(xì)菌感染主要取決于菌種的毒力和數(shù)量，當(dāng)細(xì)菌侵入人體后會(huì)釋放毒素和酶，其致病速度沒有病毒的在宿主細(xì)胞中復(fù)制快，因此病毒性腦炎組的B淋巴細(xì)胞比細(xì)菌性腦炎組高。淋巴細(xì)胞中T淋巴細(xì)胞亞群非常重要，T淋巴細(xì)胞主要分為輔助性T細(xì)胞，細(xì)胞毒性T細(xì)胞，抑制性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。抑制性T淋巴細(xì)胞其主要功能為抑制B淋巴細(xì)胞分化和抑制抗體合成。毒性T細(xì)胞作用是介導(dǎo)反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞[15]。因此病毒性腦炎組的Ts細(xì)胞水平高于細(xì)菌性腦炎組。

血細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的分析中白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞百分比、中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、B淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、自然殺傷細(xì)胞百分比、T細(xì)胞數(shù)絕對(duì)計(jì)數(shù)及抑制性T細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)對(duì)于病毒性和細(xì)菌性腦炎的鑒別診斷差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中B淋巴細(xì)胞、抑制性T細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)共四項(xiàng)，診斷效能適中(AUC>0.7)。但診斷的靈敏度和特異度差異較大，因此并不能單獨(dú)診斷腦炎的類型。

將診斷指標(biāo)進(jìn)行組合，進(jìn)行聯(lián)合診斷，其中抑制性T細(xì)胞數(shù)與淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)聯(lián)合、B淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)聯(lián)合、B淋巴細(xì)胞與抑制性T細(xì)胞數(shù)聯(lián)合、淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)與白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)聯(lián)合診斷，效能適中(AUC>0.7)。B淋巴細(xì)胞與白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、抑制性T細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)四項(xiàng)聯(lián)合；B淋巴細(xì)胞與抑制性T細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)三項(xiàng)聯(lián)合聯(lián)合，B淋巴細(xì)胞與自然殺傷細(xì)胞百分比、T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、抑制性T細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞百分比、和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)共8項(xiàng)聯(lián)合，以及自然殺傷細(xì)胞百分比與T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞百分比、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)四項(xiàng)聯(lián)合診斷，效能較好(AUC>0.8)。其中8項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷效能最好。

4 結(jié) 論

B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞百分比、T細(xì)胞數(shù)、抑制性T細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)及單核細(xì)胞百分比、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于病毒性和細(xì)菌性腦炎的鑒別診斷是有意義的，8項(xiàng)聯(lián)合診斷效能最好。