p53和CD56在甲狀腺微小癌合并轉移的表達及其相關性研究

馬 越,杜菲菲

(延安大學附屬醫院：1.內分泌科；2.老年病科，陜西延安 716000)

甲狀腺微小癌(TMC)是病灶小于或等于1 cm的甲狀腺癌，其來源于濾泡或濾泡旁的甲狀腺細胞[1]。TMC最有效的治療方法是選擇甲狀腺切除術，然后進行放射性碘消融和促甲狀腺激素(TSH)抑制治療，另外化學和放射療法也被利用于晚期和遠處轉移階段，經過治療后，患者5年生存率約為98.1%[2-3]。雖然上述方法治療效果明顯，但若能以指標水平表征TMC轉移發生過程的變化，則能更好地幫助臨床診斷和治療這種疾病。腫瘤蛋白p53和CD56均被證實在DNA損傷修復和自然殺傷細胞免疫調節中起作用[4-5]。故本文擬分析TMC轉移患者體內p53和CD56等指標水平變化，并分析其關聯性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1月至2018年12月于本院接受治療的甲狀腺癌患者，納入標準：年滿18周歲，經同一組操作人員超聲或X線檢查和細胞活檢確診為甲狀腺癌[6]，病灶直徑小于或等于1 cm，有或無淋巴結轉移，擬于本院進行手術治療或有手術病理檢查樣本，自愿參與研究；排除標準：患其他惡性腫瘤，參與本研究前有相關疾病手術史，參與本研究前3個月服用相關治療藥物。將符合標準的154例患者納入研究(觀察組)，其中男41例，女113例，年齡18～76歲，平均(48.53±12.12)歲，病灶直徑0.1～1.0 cm，平均(0.61±0.25)cm，病灶數量1～8個，單灶105例，多灶49例，單葉多灶21例，雙葉多灶28例。選擇同期同年齡段于本院行手術的甲狀腺增生(TH)且非甲狀腺癌患者50例作為對照組，納入標準：行相關手術，留取甲狀腺組織樣本，年齡超過18周歲，無惡性腫瘤，自愿參與研究。其中男11例，女39例，年齡19～74歲，平均(46.41±10.58)歲。對照組和觀察組患者一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經倫理委員會批準且在其監督下完成。

1.2樣本收集 對于擬進行手術患者，在手術進行中獲取病理樣本后快速冰凍；對于已行手術并保有病理樣本的患者，直接取樣本進行組織學檢查。另外，回顧全部患者臨床和病理資料，分析其一般資料、病灶數量、大小，淋巴結轉移情況和樣本組織病理特征以用于多因素分析。

1.3指標檢測 p53、CD56、CK19和PTEN均由同一組操作人員采用免疫組化實驗檢查，全部抗體均為鼠抗人單克隆抗體。其中空白對照使用1×PBS緩沖液替代一抗，其余操作不變。將手術中取得的病例組織和對照組樣品全部進行石蠟包埋，連續切約為4 μm厚片后脫蠟進行免疫組織化學染色。大致操作為消除酶活后加入一抗過夜靜置，滴加二抗后37 ℃孵育10 min，二氨基聯苯氨(DAB)顯色后，于鏡下觀察樣本染色情況。其中陽性p53為細胞核棕黃色著色，陽性CD56為細胞膜棕黃色著色，陽性CK19為細胞漿棕黃色(顆粒)著色。根據著色情況將陽性強度分為四級，分別是無著色(無色，計0分)、淡著色(淺黃色，計1分)、中度著色(黃色，計2分)和重著色(棕黃色，計3分)；再在同等倍鏡下單個視野內記陽性著色細胞數目，陽性細胞數超過一半計3分，不足一半但超過四分之一計2分，不足四分之一但超過5%計1分，其余計為0分；將上述兩計分相乘得到最終陽性評估分，其中不足1分為陰性，大于1分但不足3分弱陽性，大于3分但不足6分為陽性，大于6分為強陽性，分別以-、+、++和+++表示[7]。

2 結 果

2.1兩組p53和CD56表達水平比較 觀察組p53陽性表達合并轉移病例64例(69.57%)，非轉移病30例(48.39%)；CD56弱陽性表達合并轉移病例4例(4.35%)，非轉移病例陽性表達19例(30.65%)，其余均為陰性表達；CK19合并轉移病例全部陽性表達，其中強陽性73例(79.34%)，而非轉移病例陽性表達56例(90.32%)。對照組p53弱陽性表達4例(8.00%)，其余為陰性表達；CD56陽性表達32例(64.00%)；CK19陽性表達16例(32.00%)，其余為陰性表達。對比兩組p53、CD56和CK19表達情況發現，兩組上述3個指標表達水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1及圖1、2。

注：A為對照組、B為觀察組

圖1病理樣本切片HE染色(×100)

表1 兩組p53和CD56表達水平比較

注：與對照組相比，*P<0.05；與觀察組合并轉移相比，#P<0.05

注：A為p53陰性表達、B為p53陽性表達、C為CD56弱陽性表達、D為CD56陽性表達、E為CK19陰性表達、F為CK19陽性表達

圖2p53、CD56和CK19在組織中表達情況(×100)

2.2觀察組p53、CD56表達與TMC病理參數間的關系 將觀察組患者臨床資料根據年齡、性別等因素進行細分，其后分析p53、CD56表達與各因素之間的關系，結果顯示，p53表達與淋巴結轉移、TNM分期、組織分化程度密切相關(P<0.05)，與其他單因素無明顯關聯(P>0.05)，而CD56表達僅與淋巴結轉移呈明顯相關性(P<0.05)。見表2。

2.3p53和CD56診斷TMC發生和轉移的效能比較 將術前多普勒超聲和/或MRI和術后組織活檢結果作為本研究的診斷金標準，分別以p53、CD56、p53+CD56作為TMC發生和轉移的診斷指標進行效能分析。結果顯示,p53+CD56的診斷TMC發生具較高準確率(96.57%)，p53、CD56單獨應用時準確率明顯低于聯合檢測(P<0.05)。見表3、4。

表2 觀察組p53、CD56表達與TMC病理參數間的關系(n)

表3 p53和CD56診斷TMC發生的效能比較(%)

表4 p53和CD56診斷TMC轉移的效能比較(%)

3 討 論

甲狀腺癌可分為乳頭狀癌、濾泡癌、髓樣癌、分化差的甲狀腺和未分化癌，其中乳頭狀癌最為常見，經過治療后雖然其預后較好，但是極易發生中央區淋巴結轉移[8]。比較TMC和TH病例p53和CD56表達情況后發現，上述兩個指標在上述兩組病例中表達水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。然后又將TMC組病例分為合并淋巴結轉移和非轉移，再次對比他們之間的p53、CD56表達差異發現，p53在TMC合并轉移病例中69.57%陽性表達，明顯高于未轉移的48.39%；CD56在合并轉移病例中弱陽性表達4.35%，其余為陰性表達，而非轉移病例中陽性表達30.65%，差異有統計學意義(P<0.05)；CK19在合并轉移病例中全陽性表達，而在非轉移病例中90.32%陽性表達，其表達情況分布差異有統計學意義(P<0.05)。上述結果說明，p53和CD56在TMC合并轉移和非合并轉移病例中表達差異明顯，其可作為TMC合并轉移的特異性指標被利用與臨床。

現階段研究表明，在DNA持續受損時，腫瘤蛋白p53激活DNA修復蛋白以保護其穩定；當DNA損傷被認為不可修復時，p53可啟動細胞程序性死亡；p53還可以通過將細胞周期保持在DNA損傷識別的G1/S調節點以阻止細胞生長，這被認為是抗癌作用的一部分[9-10]。在腫瘤組織水平，其生長需要招募新的血管以供給，而p53通過干擾抑制血管生成促進因子的產生從而發揮作用[11]。因此，在TMC中p53陽性表達比例更高，與本研究結果一致。此外，p53的靶基因siva1是腫瘤轉移和上皮細胞-間質細胞轉化的重要調控因子，故其與腫瘤轉移發生密切相關，也與研究者發現的在合并轉移和非轉移TMC病例中p53表達存在差異的結果一致[12]。在先天免疫反應中自然殺傷細胞通過表達CD56以產生更多的細胞因子，諸如白細胞介素-10、干擾素γ和腫瘤壞死因子b等[13]。另外在巨噬細胞促進自然殺傷細胞的細胞因子分泌過程中，CD56陽性比CD56陰性表達自然殺傷細胞其產生量更多，因而CD56表達與腫瘤發生和遷移密切相關，與研究者分析結果一致[14]。

目前在臨床上，常以超聲診斷TMC和TH，但因病灶較小故血液信號較弱，加之超聲下回聲稍高或等回聲，常被誤診[15]。上述研究發現，p53和CD56在TMC和TH病例中出現明顯的表達差異，因而推測這兩個參數可輔助TMC和TH的鑒別。結果顯示，p53、CD56單獨應用時準確率分別為85.78%和70.59%，兩參數聯合使用時其診斷準確率為96.57%。因此，p53和CD56單獨或聯合輔助超聲或MRI等常規檢測能夠幫助準確診斷與區分TMC和TH。另外，因為p53和CD56表達與TMC淋巴結轉移密切相關，又推測其可以幫助診斷TMC的淋巴結轉移。效能比較結果顯示，p53和CD56單獨或聯合使用診斷TMC合并轉移的準確率均不超過70.00%，故不建議單獨使用p53、CD56及p53+CD56檢測應用于臨床診斷TMC轉移，而可輔助現有常規檢測手段，以達到更精準和快速的目的。

4 結 論

綜上所述，在TMC合并轉移病例中p53多陽性表達，CD56陰性表達；在非轉移TMC中p53更趨于陰性表達，CD56陰性表達比例更低，兩者均與淋巴結轉移明顯相關，可輔助診斷TMC的發生和轉移。