PRG凝膠在兔LARS人工韌帶重建前交叉韌帶術后骨韌帶愈合中的應用及安全性研究

朱艷玲

廣東省佛山市第五人民醫院外一科，廣東 佛山 528211

關節鏡下前交叉韌帶(Anterior Cruciate Ligaments,ACL)重建術是臨床上常用的治療廣泛，廣泛用于ACL損傷、糾正膝關節不穩及延緩膝關節退行性病變中。手術過程中常用的移植物包括：自體肌腱、同種異體肌腱、人工韌帶等。自體骨雖然能滿足臨床治療需要，但是遠期療效欠佳，并發癥發生率較高；而同種異體肌腱則受到取材的影響，導致異物排斥反應發生率較高，容易增加感染傳染性疾病發生率。而前交叉韌帶則能恢復膝關節穩定性、功能，避免關節及其他結構繼發性損傷[1]。因此，手術過程中選擇合適的移植物對提高生物相容性、可靠的力學性能具有重要的作用。臨床研究表明[2]：在富血小板血漿中加入激活劑后能形成膠凍狀半固體，其主要結構為纖維蛋白網和血小板等，能通過脫顆作用，釋放多種對細胞趨勢、增殖及多向分化作用的生長因子。因此，本文以病例隨機對照展開，探討PRG凝膠在兔LARS人工韌帶重建前交叉韌帶術后骨韌帶愈合中的應用效果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選擇家兔30只作為對象，所有家兔均完成前交叉韌帶動物模型建立，隨機數字表分為對照組(n=15)和觀察組(n=15)。入組健康成年家兔檢疫合格，雌雄不限，體重(2.5～3.6)kg，平均(2.94±0.56)kg。動物合格證號：SCXK-(吉)2007-0003，所選動物均由醫學動物實驗中心提供，健康成年家兔常規飼養，自由攝食、飲水，光照12h，建模前12h禁食。

1.2 儀器與設備本研究中所需儀器、設備及試劑見表1。

表1 儀器與設備

1.3 方法所有家兔均完成前交叉韌帶動物模型建立：①手術入路。采用單側膝關節髕旁內側入路，逐層切開到關節腔，切除髕下脂肪，充分暴露前交叉韌帶脛骨部位。對照組僅植入LARS人工韌帶，觀察組在對照組基礎上聯合PRG凝膠治療，將上、下止點之間全部韌帶組織、表面覆蓋滑膜組織切除；②建立脛骨隧道。選擇脛骨平臺內、外側8mm作為進入點，以交叉韌帶足印后方內側踝間嵴前側作為手術出口，借助LARS人工韌帶專用脛骨定位器完成定位，給予克氏針1.8mm構建隧道，采用LARS人工韌帶專用平頭空心鉆沿著克氏針鉆完成脛骨隧道構建[3]；③確定股骨隧道。結合家兔情況在踝間窩后方5mm部位，在10:30～11:00部位保持膝關節90°屈曲，利用克氏針將股骨鉆通，沿著克氏針方向依次切開皮膚，套入LARS人工韌帶，并完成軟組織、股骨骨皮質分離，構建股骨隧道[4]。④LARS人工韌帶的安裝。上述手術操作完畢后，利用LARS人工韌帶將LARS人工到從脛骨隧道傳入，并從股骨隧道穿出，利用引導鋼絲將LARS從脛骨隧道向股骨隧道拉出，結合每一位家兔情況調整關節腔內韌帶纖維長度，保持自由纖維旋轉。手術完畢后利用LARS金屬鈦固定螺釘進行固定，切除多于的人工韌帶。

1.4 觀察指標①掃描電鏡觀察纖維組織。兩組家兔處理30個月后取韌帶植入部位，放置在3%甲醛溶液中，連續進行48h固定，經蒸餾水沖洗后放置在CO2臨界點干燥易的壓力腔內完成干燥，噴金后掃描電鏡下觀察組織形態[5]。②組織學。兩組家兔處理30個月后取韌帶植入部位，放置在3%甲醛溶液中，連續進行48h固定，石蠟包埋后制備5um切片，行HE染色[6]。③安全性。記錄兩組家兔治療過程中安全性。

1.5 統計分析采用SPSS18.0軟件處理，計數資料采用[例(%)]表示，進行χ2檢驗；計量資料采用(±s)表示，進行t檢驗，P＜0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組掃描電鏡觀察纖維組織比較兩組家兔均完成手術治療，且掃描電鏡下均可見明顯致密的纖維組織，觀察組LARS人工韌帶表面覆蓋較多自體組織，且高放大倍率下可見人工韌帶自體纖維組織緊密、均勻排列；而對照組自體纖維組織相對較少，排列缺乏規律性，見圖1。

圖1 兩組掃描電鏡結果(×200)

2.2 兩組組織學結果比較兩組處理30個月后，兩組LARS人工韌帶關節腔內游離的部分與骨隧道內部均被自體組織包繞，且多為長梭形排列，存在少許纖維組織；HE染色下觀察組排列具有一定的規律性，存在少許毛細血管浸潤生長，未見壞死組織；對照組排列缺乏規律性，可見少許壞死組織，見圖2。

圖2 兩組HE染色比較(×100)

2.3 兩組安全性比較兩組家兔手術后切口未見感染，家兔均未出現發熱癥狀，切口良好，膝關節無腫脹、積液；術后3周家兔均能正常負重行走，步態、步速正常。

3 討論

前交叉韌帶重建是前交叉韌帶斷裂主要方法，通過手術能完成韌帶的重建，但是術后并發癥發生率較高，難以達到預期的修復效果[7]。本研究中，以家兔作為對象，借助LARS人工韌帶完成前交叉韌帶重建，并給予PRG凝膠進行干預，結果表明：家兔經PRG凝膠干預后活動度恢復正常，且術后4周能爬坡，是相對理想的治療方法。PRG凝膠最早于1984年由國外學者從血漿中提取獲得，且經激活后能誘導血小板釋放多種生長因子[8]。國內學者[9]對PRG成分進行分析，結果表明：PRG中含有機體損傷修復所需的多種生長因子，包括：血小板衍生生長因子、血管內皮生長因子及成纖維細胞生長因子的。本研究中，將PRG用于兔LARS人工韌帶重建前交叉韌帶術后骨韌帶愈合中有助于促進家兔韌帶部位修復，能獲得良好的修復效果。本研究中，兩組家兔均完成手術治療，且掃描電鏡下均可見明顯致密的纖維組織，觀察組LARS人工韌帶表面覆蓋較多自體組織，且高放大倍率下可見人工韌帶自體纖維組織緊密、均勻排列；而對照組自體纖維組織相對較少，排列缺乏規律性。國內學者研究表明：在PRG中加入促凝劑后，不僅能激活血小板釋放大量生長因子，亦可激活纖維蛋白使其形成具備三維網狀結構的凝膠，更加有助于細胞的增殖、分化及黏附，從而發胡良好的生物學作用[10]。本研究中，兩組處理30個月后，兩組LARS人工韌帶關節腔內游離的部分與骨隧道內部均被自體組織包繞，且多為長梭形排列，存在少許纖維組織；HE染色下觀察組排列具有一定的規律性，存在少許毛細血管浸潤生長，未見壞死組織；對照組排列缺乏規律性，可見少許壞死組織。

綜上所述，將PRG凝膠用于兔LARS人工韌帶重建前交叉韌帶術后骨韌帶愈合中能促進纖維組織誘導能力，可促進骨組織愈合，安全性較高，值得推廣應用。