老年乳腺癌組織IL-15與IL-5Ra表達的相關性及CD8+細胞浸潤程度

劉慶玲

(淄博市婦幼保健院檢驗中心，山東 淄博 255000)

白細胞介素(IL)-15是1994年被發現的一種由多種細胞產生的細胞因子，研究顯示，IL-15與IL-2生物學作用極為相似〔〕。IL-15靶細胞分布和細胞來源分布較IL-2廣，但IL-2已被證實在臨床腫瘤免疫上具有良好的治療效果〔1,2〕。據推測，IL-15也應在免疫腫瘤中具有良好的治療效果。目前關于IL-15與乳腺癌、肺癌的研究多選用體外及裸鼠試驗，IL-15在人體乳腺癌和肺癌中的治療作用結果尚不得知〔3〕。本研究擬分析老年乳腺癌與肺癌組織中IL-15的表達及與臨床病理因素的相關性。

1 材料與方法

1.1臨床資料 選取2015年3月至2018年3月經淄博市婦幼保健院確診為肺癌與乳腺癌的患者80例。乳腺癌患者51例，男28例，女23例，年齡61～87歲，平均(64.8±5.6)歲；臨床分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期22例，Ⅲ15例，Ⅳ7例；病理類型：腺癌6例，浸潤性導管癌23例，浸潤性小葉癌18例，髓樣癌4例。肺癌患者29例，年齡62～85歲，平均(65.3±5.2)歲；男18例，女11例；臨床分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期10例，Ⅲ8例；病理類型：腺癌11例，鱗癌15例，小細胞肺癌2例，大細胞肺癌1例。80例患者經病理證實術前均未接受放療或化療。

1.2研究試劑與切片制作 兔抗人IL-15Ra多克隆抗體與小鼠抗人IL-15單克隆抗體均購自美國Molecular Innovations公司。小鼠抗人單抗克隆體CD8、小鼠抗人〔自然殺傷(NK)細胞表面標志〕CD57及二氨基聯苯胺(DAB)與SP試劑盒均購自上海佑隆生物科技有限公司。腫瘤組織標本采用40 g/L多聚甲醛進行固定，然后進行梯度酒精兌水、浸蠟、透明、包埋制成蠟塊4 cm，連續切片。

1.3免疫組化染色 選取5張切片，4張切片分別用于IL-15、IL-15Ra、CD8、CD57的免疫組化學染色，抗人IL-15、IL-15Ra抗體稀釋為1∶20，CD8與CD57抗體稀釋為1∶40，另一張切片采用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗孵育進行陰性對照。常規免疫組化染色，DAB顯色采用光鏡觀察。

1.4觀察結果 陽性著色顯示棕黃色，IL-15、IL-15Ra陽性著色采用NikunE800光學顯微鏡圖像分析系統測定陽性染色密度(PSD)；CD8與CD57通過計滿每張切片7 mm×7 mm面積內所有陽性細胞個數，并同時計算出每平方毫米陽性細胞個數，并作為陽性細胞密度(PCD)。

1.5統計學方法 采用SPSS11.0統計學軟件進行t檢驗、單因素方差分析和Pearson相關分析。

2 結 果

2.1乳腺癌與肺癌組織中IL-15及IL-15Ra免疫組化染色 少量浸潤淋巴細胞與腫瘤細胞的胞質、胞膜有著色，余下無著色。乳腺癌組織中IL-15及IL-15Ra PSD分別為779.1±305.1和982.8±375.9；肺癌組織分別為1 179.9±658.8和1 248.7±603.1。見圖1。

圖1 乳腺癌與肺癌組織中IL-15及IL-15Ra免疫組化染色(DAB，×400)

2.2乳腺癌與肺癌組織中CD8與CD57的染色 胞膜陽性著色細胞僅在浸潤淋巴細胞中顯示，呈片狀聚集分布。乳腺癌與肺癌在臨床分期早期中無淋巴結轉移，CD8+與NK細胞浸潤較多；臨床分期晚期顯示，或有患者發生淋巴結轉移，CD8+與NK細胞浸潤較少。乳腺癌組織中NK細胞及CD8+PCD為(12.3±3.8)和(13.7±3.5)個/mm2；肺癌組織分別為(12.7±7.0)和(25.2±4.7)個/mm2。見圖2。

圖2 乳腺癌與肺癌組織中CD8與CD57染色(DAB,×400)

2.3IL-15與腫瘤臨床病理類型、臨床分期的關系 IL-15在不同病理類型乳腺癌與肺癌組織中表達差異無統計學意義(F=4.387、5.270，P=0.210、0.106)。乳腺癌與肺癌伴隨著臨床分期的增加，腫瘤組織中IL-15表達顯著降低(肺癌：Ⅰ期PSD 1 425.9±660.9，Ⅱ期1 148.1±593.1，Ⅲ期518.7±324.0；乳腺癌：Ⅰ期PSD 1 314.3±152.8，Ⅱ期863.6±146.2，Ⅲ期532.4±139.3，Ⅳ期507.2±183.4)。

2.4IL-15與肺癌、乳腺癌腫瘤直徑的關系 乳腺癌與肺癌病例中，腫瘤直徑<3 cm組IL-15表達(PSD：1 938.6±285.4、1 899.2±722.7)顯著高于腫瘤直徑≥3 cm組(1 276.9±264.7、1 193.6±519.7，P<0.05)。

2.5IL-15與肺癌、乳腺癌腫瘤淋巴結轉移的關系 乳腺癌及肺癌患者無淋巴結轉移組IL-15表達(PSD：1 898.8±6 265.7、1 855.1±717.1)顯著高于有淋巴結轉移組(1 316.7±290.7、1 237.7±512.2，P<0.05)。

2.6IL-15與浸潤在腫瘤組織中CD8+、NK細胞的關系 乳腺癌與肺癌組織中IL-15的表達與CD8+(r=0.61、0.39，P<0.05)、NK細胞(r=0.59、0.76，P<0.05)呈正相關。IL-15Ra的表達與腫瘤直徑大小、臨床分期及淋巴結轉移無相關性(P>0.05)。

3 討 論

本實驗結果顯示，乳腺癌與肺癌組織中IL-5表達高的患者均處于腫瘤分期早期，腫瘤體積較小，伴有少量的淋巴結轉移；IL-15表達較低的患者均處于腫瘤分期晚期，腫瘤體積明顯較大，伴有淋巴結轉移，研究表明，IL-15的表達顯示有某種抑制乳腺癌與肺癌的作用〔4〕。人體免疫抗腫瘤細胞中NK、CD8+屬于主體細胞，臨床研究顯示，IL-15可有效促進CD8+、NK細胞的繁殖，IL-15還可對CD8+細胞進行趨化，還包括CD8+CTL細胞特異的趨化〔5〕。相關資料顯示，IL-15在腫瘤微環境下可有效調節Th1與Th2細胞因子的分泌〔6,7〕。有學者指出，在表皮T淋巴細胞瘤與急性T淋巴細胞白血病中，IL-15的表達與腫瘤細胞中的IL-Ra有效結合，從而促進腫瘤細胞的繁殖〔8,9〕。

研究顯示，乳腺癌與肺癌切片中，腫瘤細胞組織中IL-15存在受體表達，但綜合表現顯示，IL-15對肺癌與乳腺癌具有遏制作用，據分析發生遏制作用可能是在IL-15的作用下，造成NK、CD8+細胞繁殖影響腫瘤組織，從而造成大量浸潤和激活，并起到了殺傷腫瘤細胞的作用，超過了IL-15抗腫瘤抗體的繁殖，從而造成腫瘤細胞分裂〔10,11〕。研究顯示，對沒有IL-15受體的表達不分泌IL-15的腫瘤組織來說，如給予IL-15會促進NK、CD8+細胞繁殖分裂的作用，增加IL-15在腫瘤組織中浸潤的數量和激活，并有效促進NK、CD8+細胞對腫瘤細胞的殺傷〔12,13〕。對無受體表達的IL-15腫瘤組織通過外界因素給予IL-15，也可達到抗腫瘤的效果，通過外部因素給予IL-15，可與腫瘤組織中IL-15受體表達相結合，從而促進腫瘤生長，也可有效激活NK、CD8+細胞的繁殖對腫瘤細胞起到殺傷作用〔14,15〕。針對腫瘤組織的研究，應擴大樣本量，合理應用IL-15對抗腫瘤治療具有重要意義。