DHA藻油與阿爾茨海默病相關性研究

李 迅，陳 濤

(1.華中科技大學同濟醫學院附屬武漢中心醫院 檢驗科，武漢430014； 2.中國科學院 武漢病毒研究所，武漢 430071)

我國擁有豐富的油料資源，利用特種油料生產的功能性食用油含有豐富的不飽和脂肪酸和多種生理活性物質，具有很高的營養價值。依靠特種油料開發的食用油品種繁多，但對于某些特定的營養成分，尤其是ω-3系的二十二碳六烯酸(DHA)多不飽和脂肪酸，含量很少[1]。DHA是大腦皮層的主要脂肪酸，占人體大腦皮層的20%，是大腦皮層中不可缺少的基本組成物質。DHA對人體健康有著特殊的功能，被譽為“腦黃金”。一般魚油中DHA的含量很少，而深海魚油中所含的DHA是魚長期食用含有DHA的藻類在脂肪中積累的[2]。應用生物工程技術可以通過海洋微藻合成DHA，現已從培養的微藻中生產出DHA藻油[3]。

阿爾茨海默病是一種漸進性神經退化失調癥，阿爾茨海默病患者的病理改變為神經元缺失、神經纖維纏結(NFTs)和老年斑(SP)的出現。阿爾茨海默病的發病機制復雜，目前較能被接受的病理為膽堿能缺失學說，該學說認為阿爾茨海默病患者大腦內的神經遞質——乙酰膽堿(ACh)的缺失是致病的關鍵原因[4]。乙酰膽堿是一種神經遞質，能特異性作用于各類膽堿受體。乙酰膽堿對記憶力十分重要，如果大腦缺乏這種物質，大腦就無法儲存新信息(記憶)，無法正常運轉。研究表明，乙酰膽堿在大腦皮層內含量增加與阿爾茨海默病癥狀改善明顯相關[5]。

DHA藻油對阿爾茨海默病有較好的預防作用[6]。DHA藻油不僅為人體提供營養元素，還可延緩阿爾茨海默病和防治心腦血管疾病[7]。本文以花生營養調和油、DHA藻油及微生物ARA油調配，飼喂SD大鼠，檢測其腦組織的乙酰膽堿水平，研究DHA藻油對SD大鼠大腦皮層的影響，以期為DHA藻油的開發利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

SD大鼠，來源于湖北省實驗動物研究中心，采用18個月中老年SD大鼠(相當于人類年齡60歲左右)。

花生營養調和油來源于油谷生物科技(南京)有限公司，由花生油、核桃油、亞麻籽油、橄欖油等植物油組成。花生營養調和油脂肪酸組成為棕櫚酸10.5%、硬脂酸3.30%、油酸40.9%、亞油酸29.9%、α-亞麻酸6.52%、ARA 0.89%、DHA 1.07%，其ω6/ω3約為4∶1，符合《中國居民膳食營養素參考攝入值》中建議的推薦值。

DHA藻油(DHA含量40%)、微生物ARA油(ARA含量40%)，由嘉必優生物技術(武漢)股份有限公司提供。

科研用大鼠乙酰膽堿檢測試劑盒(南京金益柏)，UV-2550 型分光光度計(日本島津)，MK3酶標儀(Thermo)，MK2洗板機(Thermo)，BY-LR320型低速離心機(白洋)，旋渦VORTEX 2混勻器(IKA)，移液器(Thermo)，37℃恒溫水浴箱等。

1.2 試驗方法

1.2.1 動物試驗

將SD大鼠在室內分籠飼養，觀察其正常，進行試驗。將SD大鼠分為5組，每組7只，將花生營養調和油、DHA藻油、微生物ARA油按表1調配，灌胃大鼠，每只灌胃劑量3 mL/d，連續8周，每周5 d(周六、周日除外)，每天按養鼠標準提供普通飼料。

表1 SD大鼠的分組

1.2.2 乙酰膽堿水平的測定

采用水合氯醛對大鼠實施麻醉后處死斷頭，迅速開顱取出腦組織并稱重，在冰浴條件下用勻漿器勻漿，用0.9%生理鹽水稀釋配成10%的勻液，放入離心機于3 500 r/min離心10 min，取上清液，4℃冰箱保存備用。

根據酶聯免疫吸附法(ELISA)原理按照乙酰膽堿檢測試劑盒測定乙酰膽堿水平。以乙酰膽堿標準品550 nm處的OD值(x)為橫坐標，乙酰膽堿標準品的質量濃度(y)為縱坐標，繪制標準曲線，并得到回歸方程為y=1 158.9x-122.53(R2=0.997 6)。

乙酰膽堿水平=乙酰膽堿的質量濃度/蛋白定量

1.2.3 數據統計

2 結果與討論

2.1 SD大鼠腦組織乙酰膽堿水平的比較(見表2)

從表2可以看出，陰性對照組與治療低、中、高劑量組和陽性對照組的乙酰膽堿水平有極顯著差異，而陽性對照組與治療低、中、高劑量組之間也存在極顯著差異。陰性對照組乙酰膽堿水平最低，為29.47 μg/mg，陽性對照組最高，為159.05 μg/mg，治療組乙酰膽堿水平從低到高依次為治療低劑量組、治療中劑量組、治療高劑量組，與DHA藻油添加量呈正相關。

表2 SD大鼠腦組織乙酰膽堿水平的比較 μg/mg

2.2 討論

阿爾茨海默病誘發病因多樣,已形成膽堿能假說[8]、淀粉樣蛋白假說[9]等多類學說。阿爾茨海默病患者中樞神經系統膽堿神經功能明顯下降，并且其臨床癥狀的嚴重程度和膽堿能系統的活性密切相關,這是膽堿能假說的核心[10]。乙酰膽堿是人類記憶的痕跡，膽堿能系統受損，則全面影響人類的學習和記憶等功能[11]。而阿爾茨海默病患者膽堿能缺陷，膽堿能神經元丟失，膽堿能相關合成酶活性降低，乙酰膽堿的合成、存儲以及釋放減少，且乙酰膽堿受體數目減少，這些都使其產生學習、記憶、認知方面的多種障礙[12-14]。

本文通過以上試驗結果可以得出，添加DHA藻油的花生營養油調和可以提高中老年SD大鼠腦組織中的乙酰膽堿水平，而且隨著DHA藻油的添加量增加，乙酰膽堿水平升高，這在一定程度上能夠提高中老年SD大鼠的記憶能力，延緩智力下降，說明DHA可以延緩大腦細胞的凋亡，對預防阿爾茨海默病有著重要的作用。

3 結 論

通過檢測SD大鼠腦組織乙酰膽堿水平，研究DHA藻油與阿爾茨海默病的相關性。結果表明，灌胃含有DHA藻油的花生營養調和油可使中老年SD大鼠腦組織中乙酰膽堿水平上升，且DHA藻油添加量與乙酰膽堿水平呈正相關，各治療組與陰、陽性對照組比較差異極顯著(P<0.01),從而推測DHA藻油對阿爾茨海默病患者的癥狀有一定改善作用。