云南春燥證動物模型的評價指標選擇

魏寧頤，杜玲玉珊，楊 梅

(云南中醫學院，昆明 650500)

云南春燥證動物模型的研制已經開展一段時間，課題組成員在采用人工氣候箱的辦法下，結合致病外因-氣候、內因-飲食模擬云南春燥氣候環境并給予香燥食物制作小鼠模型，采用“以方測證”對比臨床常見癥狀的變化，確認復制模型小鼠符合云南春燥證的臨床特征[1]。現課題組在已研制的模型小鼠上選取與云南春燥證候相關的生化指標進行測量，從而揭示云南春燥證生理變化的實質，進一步完善對云南春燥小鼠模型評價指標的選擇。

1 氣道內分泌型免疫球蛋白A(sIgA)

近年來，在外燥證動物實驗研究中，有學者發現[2-3]動物模型氣道內分泌型免疫球蛋白A(sIg A)等免疫分子及活性物質的變化同外燥證動物模型有密切的相關性，在一定程度上可以反映出外燥證動物模型肺氣衛外功能變化的規律。免疫球蛋白A(sIgA)主要存在于上呼吸黏膜，是上呼吸道防御病原微生物侵害極為重要的免疫球蛋白，在氣道內對抗外來邪氣起著重要的作用，反映出了呼吸道的免疫防御情況。機體sIgA的水平可以提高呼吸道黏膜局部抗感染能力[4]， sIgA含量升高，則提示邪氣盛而正不虛，機體鼓動正氣衛外抗邪；sIg A含量降低，則提示正虛邪湊，燥邪傷肺，會損傷肺氣衛外的功能[5]。選用該指標可以直接反映出云南春燥證小鼠的呼吸道免疫防御情況。除了各類燥證模型研究選擇該指標作為特異性指標外，國內諸多對肺臟疾病的研究也將該指標作為觀察指標之一。

2 氣道內分泌型免疫球蛋白G(IgG)

IgG對病原微生物具有一定的吞噬作用，是氣道內廣譜、高效的抗體球蛋白，在疾病早期發揮防御功能。免疫球蛋白G水平增高可能與某些外來抗原或自身抗原有關，這些抗原刺激了淋巴系統，引起免疫球蛋白G合成。有研究發現，痰熱壅肺證、痰濕阻肺證、痰蒙神竅證等IgG均值逐漸偏低[6]。在臨床研究時期，總結出云南春燥證的主要證型有：肺衛皮孔燥證、風燥犯肺證、肝熱肺燥證、脾濕胃燥證這四證。由此可見，痰、濕等病因是構成云南春燥證的主要因素，從一定層面影響了機體。故課題組借鑒其他研究辦法，選取免疫球蛋白G作為云南春燥證的觀察指標之一。

3 肺表面活性物質相關蛋白 A(SP-A) 、D(SP-D)

現代研究發現，相關蛋白 A(SP-A)、相關蛋白 D(SP-D)是肺表面活性物質的中重要成分，其主要分布于肺泡上皮內側，由肺泡Ⅱ型上皮細胞和呼吸性細支氣管上皮Clara細胞合成及分泌，具有降低肺泡表面張力、維持肺泡穩定性等作用，是肺部重要的天然免疫防御分子。兩者可以通過調理吞噬、結合過敏原與多種免疫分子互相作用來調節急慢性炎癥反應[7-8]。由此把SP-A、SP-D對機體的功能看作是中醫中正氣的一種表達。正氣強則機體雖然感受春燥之邪氣，但是臨床表現會不同。SP-A的劑量用于調節炎細胞因子的合成與釋放，從而抑制炎癥反應，但其是增強還是減弱炎性反應則主要取決于病原菌、反應細胞及細胞因子微環境。SP-D能抑制淋巴細胞的增殖，而且與肺泡巨噬細胞有高親和力，能增加它的活性，從而達到抑制過敏反應和殺滅微生物的作用[9]。課題組試圖用表面活性蛋白指標參數來解釋云南春燥證在發生過程中機體正氣抗邪的變化。如果取得相關規律性數據，將選擇其為云南春燥證特異性指標。

4 氣道黏液中黏蛋白Muc5ac

研究表明，小鼠氣道黏液層中凝膠層和溶膠層的變化可以在一定程度上反映出吸入空氣對氣道津液代謝的影響規律。至今已發現19氣道黏蛋白，但只有Muc5ac和Muc56的基因產物構成了正常人體氣道分泌物中的黏蛋白[10]。在受到外界因素刺激時，小鼠氣道表皮細胞 Muc5acmRNA表達豐富且定位于致敏源誘導的杯狀細胞[11]，故考慮采用Muc5ac的測定來檢測模型組小鼠中氣道發生的微觀改變，進一步解釋云南春燥證機體病理的改變。

5 細胞膜選擇性水通道蛋白(AQPs)

水是氣道黏液的另一重要成分，其運轉通過細胞膜選擇性水通道蛋白(AQPs)來進行。研究顯示，AQP5基因剔除的小鼠，其氣道黏膜上下腺分泌液體的功能明顯減低，而且肺部感染病毒的小鼠在第7天、第14天均出現AQP5mRNA及蛋白表達下降。由此可見，氣道Muc5acmRNA及其蛋白的表達可反映出氣道黏液黏度的變化。而氣道AQP5 mRNA機器蛋白的表達可以提示氣道水分的變化，故本課題預觀察云南春燥證小鼠肺臟津液代謝的規律。

6 結語

結合云南春燥證的定義及在臨床研究中的主要證型肺衛皮孔燥證、風燥犯肺證、肝熱肺燥證、脾濕胃燥證四證，可見鼻腔干燥、干咳的臨床表現[12]。擬對云南春燥證動物模型在呼吸系統選擇以上5種呼吸道相關指標進行檢測，意在從另一個角度解釋云南春燥證小鼠機體免疫活性物、免疫功能、津液分布規律等病理改變情況。獲得相關數據后，對小鼠該指標與對應的中醫學癥狀科學進行對比分析，解釋云南春燥證模型小鼠機體產生變化和中醫邪氣入侵、正氣抗邪等理論的關系，為云南春燥證模型特異性指標的篩選奠定基礎。