瑤藥蘆山藤化學(xué)成分初步研究

黃穎　蔣艷華　楊小良　李兵

【摘 要】 目的：對(duì)蘆山藤的化學(xué)成分進(jìn)行研究。方法：采用系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)法對(duì)蘆山藤藥材化學(xué)成分進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，采用硅膠柱色譜、重結(jié)晶等分離方法對(duì)蘆山藤的化學(xué)成分進(jìn)行分離、純化，并根據(jù)化合物的理化性質(zhì)、波譜方法等進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：從瑤藥蘆山藤中分離得到4個(gè)化合物，鑒定為：肉豆蔻酸（Myristic acid，1），豆甾醇（stigmasterol，2），山萮酸（Behenic acid，3），綠原酸（chlorogenic acid，4）。結(jié)論：化合物1、3、4為首次從該植物中分離得到，為進(jìn)一步研究其化學(xué)成分提供參考。

【關(guān)鍵詞】 蘆山藤;化學(xué)成分;結(jié)構(gòu)鑒定

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2020）23-0036-04

A Preliminary Study on Chemical Composition from Yao Medicine Cissampelopsis spelaeicola

HUANG Ying1 JIANG Yanhua2 YANG Xiaoliang1 LI Bing2*

1.Faculty of Chinese Medicine Science Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530222，China;

2.Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530200，China

Abstract：Objective To study the chemical constituents from Yao medicine Cissampelopsis spelaeicola. Methods The chemical components of C. spelaeicola were pretested by systematic pretest method. Constituents were isolated by silica gel column chromatography and recrystallization， et al. And their structures were identified by physicochemical properties and spectral methods. Result Four compounds were isolated from C. spelaeicola，and identified as Myristic acid（1），Stigmasterol（2），Behenic acid（3）and chlorogenic acid （4）。Conclusion Compounds 1， 2and 4 were isolated from the plant for the first time， and providing reference for further study of their chemical constituents.

Keywords：Cissampelopsis spelaeicola; Chemical Composition; Structural Identification

蘆山藤是菊科植物巖穴千里光Cissampelopsis spelaeicola（Vant）C. Jeffrey et Y. L.Chen的干燥莖葉，具有祛風(fēng)除濕、活血止痛等功效，用于治療小兒驚風(fēng)、風(fēng)濕骨痛、跌打損傷等癥[1]。該藥始載于《中國(guó)高等植物圖鑒》，《貴州植物志》中記載蘆山藤的別名叫巖生藤菊，產(chǎn)于四川、貴州、云南、廣西[2]。據(jù)前期的瑤藥調(diào)查發(fā)現(xiàn)，蘆山藤在廣西除了分布于友誼關(guān)外，在廣西壯族自治區(qū)金秀瑤族自治縣境內(nèi)多數(shù)地方也有分布。但通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)瑤藥蘆山藤的化學(xué)成分、藥理活性、質(zhì)量控制等方面的研究較少。僅有梁爽等[3]從糯米風(fēng)75%乙醇提取物中共分離鑒定出12個(gè)化合物。同屬植物研究也較少，僅有Ongkarn Vanijajiva1等[4]對(duì)藤菊屬植物的歷史沿革進(jìn)行考證并進(jìn)行完整的的修訂。然而其同科植物化學(xué)成分及藥理作用研究較多[5-13]，顯示出較好的活性及應(yīng)用價(jià)值，其主要含有生物堿類、酚酸類、黃酮類、揮發(fā)油類、萜類以及其他成分，其藥理作用包括抗菌、抗炎、抗病毒及抗腫瘤、抗氧化及清除自由基和毒理等作用。為了進(jìn)一步研究蘆山藤的化學(xué)成分，本研究利用多種色譜方法對(duì)廣西瑤藥蘆山藤進(jìn)行化學(xué)成分研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材及鑒定 蘆山藤，2019年購(gòu)于廣西金秀縣，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)壯醫(yī)藥學(xué)院韋松基教授鑒定為菊科植物巖穴千里光Cissampelopsis spelaeicola（Vant）C.Jeffrey et Y. L. Chen的干燥莖葉。

1.2 儀器與試劑 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52AA（上海亞榮）;低溫冷卻液循環(huán)泵DLSB-5L/20（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)）;循環(huán)水式多用真空泵SHB-ⅢA（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）;電熱恒溫水浴鍋HWS-26（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）;冷卻水循環(huán)裝置CCA-1112A（上海愛郎儀器有限公司）;各種不同規(guī)格的普通玻璃柱（上海欣維爾有限公司）。柱色譜硅膠（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;硅膠板（青島海洋化工有限公司）;乙醇、石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、丙酮、甲醇等試劑（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 蘆山藤的化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)

為初步了解蘆山藤中所含化學(xué)成分的類型，從而有目的地設(shè)計(jì)出提取和分離的路線，采用系統(tǒng)預(yù)試法對(duì)其進(jìn)行化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)。

2.1 水提取液 取蘆山藤藥材粗粉10g加水100mL，冷浸24h，濾取10mL濾液做蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸檢查。剩余藥渣，于60℃水浴上加熱30min，過(guò)濾，濾液作皂苷、糖、苷類、多糖、有機(jī)酸、鞣質(zhì)檢查，結(jié)果見表1。

2.2 乙醇提取液 取蘆山藤藥材粗粉10g加100mL乙醇，加熱回流1h，過(guò)濾，濾液分成兩個(gè)份，一份做黃酮、蒽酚類、內(nèi)酯等化合物的檢查。另一份回收溶劑至浸膏，15mL 5%HCl溶解，過(guò)濾，濾液做生物堿檢查，結(jié)果見表2。

2.3 石油醚提取液預(yù)試 取蘆山藤藥材粗粉1g，加5mL石油醚，放置3h，過(guò)濾，取少許濾液做揮發(fā)油和油脂檢查，結(jié)果見表3。

2.4 化學(xué)成分預(yù)試小結(jié) 化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明，瑤藥蘆山藤藥材中可能含有糖類、苷、鞣質(zhì)、有機(jī)酸、甾醇、三萜、黃酮、蒽醌、香豆素、酚類、生物堿、油脂等類型成分。

3 瑤藥蘆山藤化學(xué)成分的提取和分離

3.1 提取與分離過(guò)程 瑤藥蘆山藤藥材粗粉8.4kg，用10倍量90%乙醇回流提取三次，10倍量70%乙醇回流三次，合并提取液，減壓回收溶劑得到乙醇總提取物692.6g，取400g提取物，加水混懸后，依次用石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取分離，減壓回收溶劑，得石油醚部位41g，乙酸乙酯部位112g，正丁醇部位62g，剩余水部位。

取石油醚部位35g，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫8組分， Fr.s3（石油醚-乙酸乙酯（10∶1））合并濃縮后所得流份再經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-丙酮梯度洗脫，重結(jié)晶，得到白色結(jié)晶化合物1（3.3mg）。

Fr.s4瓶檢識(shí)合并后，取2.3g濃縮物加硅膠拌樣后，經(jīng)硅膠柱色譜再次分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，合并濃縮后，析出白色粉末，經(jīng)重結(jié)晶，得到白色結(jié)晶化合物2（1.9mg）。三氯甲烷-甲醇（10∶1）組分再次經(jīng)硅膠柱色譜分離，重結(jié)晶，得到化合物3（1.3mg）。乙酸乙酯（0∶10）組分后經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜分離及重結(jié)晶得化合物4（白色固體2mg）。

3.2 圖譜解析及結(jié)構(gòu)推斷 對(duì)蘆山藤中分離得到的化合物通過(guò)理化檢驗(yàn)、13C-NMR、1H-NMR等波譜方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。

3.3 結(jié)構(gòu)鑒定 化合物1：白色粉末，易溶于乙酸乙酯、氯仿。1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：0.87 （3H，t，J= 6.94Hz），為末端甲基信號(hào)峰;1.31（22H，m），1.62（2H，m）一系列亞甲基信號(hào); 2.34（2H，t，J=7.50 Hz）與吸電子基團(tuán)相連的亞甲基信號(hào)，提示該化合物為長(zhǎng)鏈脂肪族化合物。13C-NMR（500MHz，CDCl3）δ：180.42為羧基信號(hào)，34.11為羰基α位碳信號(hào)，31.94、29.71、29.68、29.66、29.61、29.45、29.38、29.26、29.07、24.68、22.70為一系列的亞甲基碳信號(hào)，14.12為末端甲基碳信號(hào)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，確定化合物2為肉豆蔻酸（Myristic acid），分子式為C14H28O2，不飽和度為1。

化合物2：白色細(xì)針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、丙酮，難溶于水。Libermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性。1H-NMR（500MHz， CDCl3 ）δ：0.67-1.54范圍內(nèi)，高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)多個(gè)甲基信號(hào)峰，，3.50（1H，m）為活潑氫，5.35（1H，m），5.14（1H，m），5.12（1H，m）為烯氫信號(hào)峰，13C-NMR（500MHz， CDCl3）高場(chǎng)區(qū)也出現(xiàn)多個(gè)甲基信號(hào)峰;71.82為連氧碳信號(hào)峰，140.76，138.34，129.28，121.73為烯碳信號(hào)峰，初步推斷為甾體類化合物。具體氫譜數(shù)據(jù)、碳譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道的豆甾醇數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為豆甾醇（stigmasterol），分子式為C29H48O。

化合物3：白色粉末，易溶于石油醚、乙酸乙酯，可溶于熱丙酮，難溶于水、甲醇。1H-NMR（500MHz，CDCl3）δ：0.84 （3H，t，J=6.70Hz），為末端甲基信號(hào)峰;2.26，1.58和1.25為系列亞甲基氫信號(hào)，提示該化合物為長(zhǎng)鏈脂肪族化合物。13C-NMR（500MHz，CDCl3）δ：176.48為羧基信號(hào)，33.96為羰基α位碳信號(hào)，31.90、29.67、29.63、29.59、29.46、29.33、29.27、29.13、24.88、22.66為一系列的亞甲基碳信號(hào)，14.07為末端甲基碳信號(hào)。因此該化合物應(yīng)該是脂肪烷酸類化合物。根據(jù)以上數(shù)據(jù)分析，化合物3的碳譜和氫譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[16]的山俞酸數(shù)據(jù)基本相同，因此確定化合物3為山萮酸（Behenic acid），分子式為 C22H44O2。

化合物4：白色粉末，mp：206～209℃，紅外光譜與綠原酸標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致，將綠原酸對(duì)照品與其共薄層色譜，分別以石油醚-乙酸乙酯-甲酸、氯仿-甲醇-甲酸、乙酸丁酯-甲醇-甲酸共三種系統(tǒng)展開，二者的Rf均相等，且二者混合熔點(diǎn)不下降，故確定化合物4為綠原酸（chlorogenic acid）。

4 討論

從瑤藥蘆山藤中分離得到4個(gè)化合物，鑒定為肉豆蔻酸（Myristic acid，1），豆甾醇（stigmasterol，2），山萮酸（Behenic acid，3），綠原酸（chlorogenic acid，4）?；衔?、3、4為首次從該植物中分離得到，本課題初步研究了蘆山藤的化學(xué)成分，為進(jìn)一步研究與開發(fā)蘆山藤提供依據(jù)。

蘆山藤研究較少，民間調(diào)研發(fā)現(xiàn)其治療風(fēng)濕骨痛、跌打損傷等療效較好，從本實(shí)驗(yàn)分離所得的成分來(lái)看，豆甾醇具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降低膽固醇和改善記憶等作用[17]，而綠原酸具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)代謝等藥理作用[18-20]，在食品、醫(yī)藥和化工等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用[21]。故很有必要繼續(xù)開展其化學(xué)成分和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究，以便進(jìn)一步闡明其發(fā)揮療效的作用機(jī)制及控制藥材的質(zhì)量，確保其臨床使用規(guī)范及安全。

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（收稿日期：2020-07-01 編輯：劉斌）

基金項(xiàng)目：2016年度廣西高校中青年教師基礎(chǔ)能力提升項(xiàng)目（KY2016YB828）。

作者簡(jiǎn)介：黃穎（1984-），女，漢族，碩士，講師，研究方向?yàn)橹兴幖捌渲苿┵|(zhì)量分析。E-mail：77869160@qq.com

通信作者：李兵（1982-），男，漢族，碩士，副教授，研究方向?yàn)橹兴幓钚猿煞峙c質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：215811180@qq.com