miRNA作為乳腺癌無創標志物的研究進展 *

王曉剛 綜述,陳 坤，王慧玲 審校

廣西壯族自治區桂東人民醫院:1.醫療管理科；2.乳腺甲狀腺外科,廣西梧州 543001； 3.廣東省肇慶市第一人民醫院醫務科，廣東肇慶 526000

微小核糖核酸(miRNA)是一種18～25個核苷酸長度的單鏈、進化高度保守的小分子非編碼RNA[1]。miRNA無開放閱讀框，不能編碼任何蛋白質，卻能通過降解信使RNA(mRNA)或抑制蛋白質翻譯來調控基因表達[2]。miRNA在腫瘤發生、發展中的機制已是研究熱點。miRNA在細胞增殖、凋亡、分化和入侵的多種生理及病理進程中發揮重要作用[3]，miRNA具有組織特異性和時序性[4]。近年來，越來越多的研究表明，不同類型癌癥的一些miRNA表達不同，如肺癌[5]、多發性骨髓瘤[6]、乳腺癌[7]、結直腸癌[8]、神經膠質瘤[9]和肝細胞癌[10]。全血或特定成分血的miRNA有助于腫瘤的診斷[11]。ARROYO等[12]證實，大多數的循環miRNA與Argonaute2核糖蛋白復合體(AgO2)結合，形成循環miRNA-AgO2復合體，使血液中的miRNA穩定存在。miRNA在血漿或血清中相當穩定，可能成為檢測癌癥的有效無創標志物[13]。

乳腺癌是世界范圍內女性最常見的一種惡性腫瘤，且是全球女性癌癥死亡的首要原因[14]，全球女性死亡的第二大原因[15]，每年有超過1 000 000例新發病例確診[16]。盡管乳腺癌患者的預后已大為改善，但仍然有約1/3的女性死于這種疾病，死因主要來自腫瘤轉移，尤其是腦轉移[17]。隨著現代醫學技術的快速發展，乳腺癌的早期診斷對提高療效和改善預后起到了至關重要的作用[18]。分子生物標志物如孕激素受體、雌激素受體和人類表皮生長因子受體，已用于診斷或預測腫瘤預后[19]，但這些生物標志物不能從外周血直接提取，存在一定的局限性，需要尋求癌癥早期診斷更精準的生物標志物。液體活檢由于無創和低成本，正成為乳腺癌新的診斷方法。由于血液采集具有簡單、方便、非侵入性等優點，血液miRNA作為一項無創生物標志物得到了廣泛的研究，因而檢測人血液中的miRNA作為乳腺癌的早期診斷指標,將具有重要的臨床意義。

1 miRNA作為乳腺癌無創標志物方面的研究進展

有研究證實，miRNA的表達模式與腫瘤惡性程度相關，并且循環miRNA具有易分離性和穩定性的特點，可被均勻地擴增和量化，它們代表了一類新出現的乳腺癌生物標志物[20-21]。循環miRNA在乳腺癌診斷、耐藥性預測、預后方面的研究越來越受到相關學者的關注和重視。

1.1miRNA作為乳腺癌診斷方面的無創標志物 miRNA能特異地表達于乳腺癌患者的血液中，并且乳腺癌患者的血液中可篩選出特定miRNA，某些miRNA對于乳腺癌的診斷有著較高的靈敏度和特異度。EICHELSER等[22]報道，患者的血清存在乳腺癌特定的miRNA表達，乳腺癌組外泌體miR-101和miR-372水平明顯高于健康對照組。此外，該研究發現三陰性乳腺癌患者的外泌體miR-373水平高于luminal乳腺癌患者和健康對照者，并進一步認為外泌體miR-101和miR-372可以作為乳腺癌的特異標志物，且外泌體miR-373為三陰性乳腺癌的表型。HENEGHAN等[23]的研究證明，循環miRNA-195在乳腺癌患者中能特異性表達，通過對外周血中miRNA-195的檢測可以將乳腺癌患者與其他種類的惡性腫瘤患者、健康人群區分開，而且單獨檢測循環miRNA-195的表達情況用于乳腺癌的診斷，其靈敏度為88.0%，特異度為91.0%。SHAO等[24]研究認為，血漿miR-200a[曲線下面積(AUC)為0.881，靈敏度為94.1%，特異度為76.7%]和miR-210(AUC為0.851，靈敏度為88.2%，特異度為72.1%)對乳腺癌有著較高的診斷效能。SHAKER等[25]檢測了80例非轉移性乳腺癌患者、20例轉移性乳腺癌患者和30例健康對照者血清標本，發現miR-29b-2、miR-155、miR-197和miR-205在乳腺癌患者的血清中明顯上調，進一步認為miR-29b-2、miR-155、miR-197、miR-205可作為有效的乳腺癌篩查無創標志物。

某些單個miRNA診斷乳腺癌的準確率、靈敏度、特異度可能具有一定的局限性，一些學者試圖利用多種循環miRNA或循環miRNA與傳統的血清學腫瘤標志物聯合檢測來提高乳腺癌的診斷效能。SHIMOMURA等[26]發現，血清miR-1246、miR-1307-3p、miR-4634、miR-6861-5p和miR-6875-5p能夠診斷乳腺癌，這5種miRNA組合診斷乳腺癌的靈敏度為97.3%，特異度為82.9%，在測試隊列中，該組合對乳腺癌的準確率為89.7%，可檢測早期乳腺癌，對Tis型乳腺癌的靈敏度為98.0%。ZHANG等[27]對76例早期診斷的乳腺癌患者及52例健康女性進行了血清miRNA的表達譜檢測，早期乳腺癌患者血清標本中有23種miRNA表達失調，其中有22種miRNA表達上調，1種miRNA(miRNA-202-3p)表達下調。miRNA-199a、miRNA-29c、miRNA-424三者聯合檢測診斷乳腺癌的靈敏度為77.6%，特異度為84.6%，AUC為90.0%，并證實這3種miRNA聯合檢測用于乳腺癌的診斷效能較高。LU等[28]的團隊分析了102例乳腺癌患者及90例健康女性血漿miR-127-3p和人附睪蛋白-4(HE4)的表達情況，發現乳腺癌患者血漿miRNA-127-3p和HE4聯合檢測能明顯提高乳腺癌的診斷效能，提示傳統的血清學腫瘤標志物與循環miRNA進行聯合檢測可提高檢測的準確性。CUK等[29]報道，miRNA-148b、miRNA-376c、miRNA-409-3p和miRNA-801這4種miRNA在乳腺癌患者中的表達明顯上調，miRNA-148b、miRNA-409-3p和miRNA-801三者組合時診斷效能最佳，其AUC為69.0%，靈敏度為70.0%，特異度為55.0%。

1.2miRNA作為乳腺癌耐藥預測方面的無創標志物 化療在轉移性乳腺癌的治療中起到了重要作用，耐藥將會阻礙化療，導致癌癥復發或轉移，因此，在轉移性乳腺癌患者外周血中尋找高度敏感、特異、非侵入性的預測性生物標志物顯得非常迫切。SHAO等[24]研究認為，高水平的血漿miR-200a和miR-210與轉移性乳腺癌患者的化療耐藥性相關，血漿miR-200a和miR-210可能是轉移性乳腺癌患者化療耐藥性預測的有效生物標志物。LIU等[30]的研究團隊認為，血清miR-21和miR-125b水平與化療反應相關，血清miR-21和miR-125b被認為是新輔助化療反應和乳腺癌預后的無創預測標志物。以上研究結果提示，循環miRNA在乳腺癌的化療耐藥過程中起到重要作用，循環miRNA可作為乳腺癌化療耐藥預測方面的無創標志物。

1.3miRNA作為乳腺癌預后評估方面的無創標志物 目前乳腺癌復發患者多預后不佳，miRNA與乳腺癌預后密切相關，因此臨床上迫切需要新的無創預后生物標志物來監測乳腺癌的復發，推進和啟動乳腺癌的個性化治療,最終提高患者的存活率。LIU等[30]的研究團隊認為，血清miR-21和miR-125b與無病生存相關，血清miR-21和miR-125b可作為乳腺癌預后評估的無創預測標志物。LI等[31]的研究表明，外泌體miR-1246可以通過抑制周期蛋白G2(Cyclin-G2)的表達來提示乳腺癌的進展。SHAKER等[25]研究發現，miR-155和miR-205的表達與乳腺癌遠處轉移密切相關，血清miR-92a和miR-21的表達水平與乳腺腫瘤大小和淋巴結轉移存在相關性。HUO等[32]鑒定了7種在復發和未復發的乳腺癌患者中異常表達的miRNA，發現miR-21-5p、miR-375、miR-205-5p和miR-194-5p的表達上調以及miR-382-5p、miR-376c-3p和miR-411-5p的表達下調，均與乳腺癌復發有關。SUETA等[33]及其團隊發現384個來自乳腺癌患者的外泌體miRNA，并證實在復發的患者中miR-338-3p、miR-340-5p、miR124-3p明顯表達上調，miR-29b-3p、miR-20b-5p、miR17-5p、miR-130a-3p、miR-18a-5p、miR-195-5p、miR-486-5p、miR-93-5p明顯表達下調，他們認為以上11個外泌體miRNA與乳腺癌復發相關，可作為乳腺癌的預后因子。YANG等[34]研究認為，miR-30家族成員將成為乳腺癌的生物標志物，miR-30c與乳腺癌轉移具有高度正相關性，并確認miR-30e、miR-30a、miR-30c為乳腺癌患者淋巴結轉移和無病生存的新的預后評估生物標志物。以上的研究結果都表明，miRNA可作為乳腺癌預后評估的無創標志物。

2 總結與展望

早期診斷乳腺癌對于提高乳腺癌的療效和改善預后是至關重要的。miRNA具備作為乳腺癌潛在的無創生物標志物、耐藥預測無創標志物和預后評估無創標志物的潛力。目前，miRNA作為乳腺癌無創標志物的研究仍存在以下問題：(1)miRNA對于乳腺癌具體精確的調控機制還不是特別清楚，還需要對乳腺癌診斷、治療和預后評估等方面深入研究；(2)有待更深入的研究來驗證循環miRNA在乳腺癌的早期或晚期階段、治療反應及患者預后方面的臨床意義；(3)目前尚未制定標準化的miRNA測定方法；(4)不同標本類型、不同人群的檢測結果可能存在差異；(5)循環miRNA受人體生理及病理狀態的影響。有效解決以上問題將有助于循環miRNA作為無創標志物的臨床轉化，實現乳腺癌早期無創診斷，為乳腺癌診斷提供更多的新思路和新方法，以及為乳腺癌的診斷及預后判斷提供理論依據。近年來，miRNA在乳腺癌的診斷、耐藥預測、預后評估方面不斷取得突破性進展，miRNA作為乳腺癌的無創標志物有著廣闊的應用前景。