A型豬塞內(nèi)卡病毒流行病學(xué)、致病性、診斷研究進展

劉 存，劉 暢，劉 琪，王 靜，李秀博，崔尚金，梁 琳

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 海淀 100193；2.農(nóng)業(yè)部獸用藥物與獸醫(yī)生物技術(shù)北京科學(xué)觀測實驗站，北京 海淀 100193）

A型塞內(nèi)卡病毒（Senecavirus A,SVA）又稱為塞內(nèi)卡山谷病毒（Seneca Valley virus,SVV）是單股正鏈RNA病毒，屬小RNA病毒科塞內(nèi)卡病毒屬。該病毒能夠感染仔豬及母豬并造成仔豬死亡，其對養(yǎng)豬業(yè)的生產(chǎn)和經(jīng)濟效益具有重大的潛在威脅。2002年，在美國馬里蘭州蓋瑟斯堡，從PER.C6細胞系中首次分離出SVA，該分離株被命名為SVV-001[1]。之后的研究發(fā)現(xiàn)，SVV-001是一種有效地抗神經(jīng)內(nèi)分泌源性腫瘤的溶瘤病毒，這成為了學(xué)者關(guān)注點[2-4]。SVA自1988年即在美國的豬群中流行，但是加拿大和美國分別在2007年和2012年報道了塞內(nèi)卡病毒相關(guān)的豬水皰病病例[5-7]。2014年之前，可能因其低感染率而未得到廣泛研究，在此期間SVA的分子特征與其在豬群中的流行、傳播以及對豬的致病性等的相關(guān)研究鮮有報道。然而，自2014年底以來，SVA在北美以外國家或地區(qū)豬群中暴發(fā)，同時北美地區(qū)也出現(xiàn)了新的病例，SVA感染的新生仔豬表現(xiàn)出了新的臨床癥狀[8-16]。目前，美國、加拿大、巴西、泰國、中國、哥倫比亞等國家豬群中檢測出SVA。SVA是感染豬的一種新病毒，其所致的臨床癥狀與其他致水皰病的疾病相似，影響豬的生產(chǎn)及仔豬的存活率，對養(yǎng)豬業(yè)存在重大的潛在威脅。為了進一步了解SVA的病原學(xué)特征和感染豬致病特性，本文就SVA的流行病學(xué)、致病性、診斷方法等方面進行綜述。

1 SVA的發(fā)現(xiàn)和流行

SVA最初是于2002年在美國的馬里蘭州蓋瑟斯堡，由Neotropix公司實驗室作為PER.C6細胞系的污染物分離得到的，已確實該病毒是通過被污染的牛血清或者豬胰酶被引入其他細胞系中的[1]。首株SVA分離毒株被命名為SVV-001。最初研究發(fā)現(xiàn)，SVV-001對人和動物沒有致病性，也無證據(jù)表明其與任何有害的疾病有關(guān)系[2]。然而，加拿大和美國分別在2007年和2012年報道的豬水皰病病例提供了塞內(nèi)卡病毒可能與豬水皰病有關(guān)的證據(jù)[5，7]。

在2002年于美國首次發(fā)現(xiàn)并分離得到第一株SVA毒株。2014年以前，豬特發(fā)性水皰病的報道較少。2004年，美國印第安納州發(fā)生豬水皰病，排除了外來動物疫病病原的感染，但其病因未明確[17]。2014年底以來，豬水皰病在巴西不同地區(qū)的斷奶仔豬和成年豬上暴發(fā)，且據(jù)統(tǒng)計，1～4日齡的新生仔豬死亡率升高[18-19]。巴西動物衛(wèi)生進行的官方檢測排除了口蹄疫病毒、豬瘟病毒和豬流行性腹瀉病毒等動物疫病病原的感染，但由其他研究組從不同地區(qū)的發(fā)病豬中檢測出了SVA[17]。巴西一項10年（2007—2016）豬血清學(xué)回顧性研究表明，在2014年之前SVA并未在巴西豬群循環(huán)，而美國一項20年豬血清學(xué)回顧性研究表明，SVA在美國豬群中廣泛分布且一直在豬群中循環(huán)[5]。自2015年初，SVA相關(guān)的水皰病暴發(fā)增多，且發(fā)現(xiàn)SVA感染與新生仔豬的死亡率升高有關(guān)，特別是在母豬發(fā)生過水皰病的豬場[8-21]。2016年，加拿大、泰國、哥倫比亞的豬場受到了SVA感染的影響。

我國在2015年，首次從廣東地區(qū)發(fā)生豬特發(fā)性水皰病的豬場檢測到SVA，感染母豬發(fā)生水皰癥狀，感染仔豬出現(xiàn)急性死亡[11]。自2015年以來，SVA已在我國廣東、福建、河南、湖北等地區(qū)檢測出SVA。

由于自2015年初以來，關(guān)于SVA感染所致豬水皰病報道顯著增多，SVA的許多特征也得到了鑒定，因此2015年被認為是SVA感染流行病學(xué)的轉(zhuǎn)折點。SVA感染所致疾病的發(fā)病率和死亡率在不同種豬上存在差異。在首次感染的豬場，依據(jù)豬的日齡和臨床癥狀，發(fā)病率介于4%～70%之間。斷奶仔豬發(fā)病率在0.5%～5%間，肥育豬發(fā)病率在5%～30%間，不同的地區(qū)間存在差異，母豬發(fā)病率高，可達70%～90%[9，18，22]。然而，這些感染豬的死亡率很低，約為0.2%，且恢復(fù)較快，臨床癥狀持續(xù)10～15 d[11]。對于新生仔豬，尤其是1～4日齡的新生仔豬發(fā)病率可達70%，死亡率在15%～30%之間[22]。目前尚無感染SVA的豬場再次暴發(fā)豬水皰病的報道。在傳播媒介上，據(jù)Joshi等調(diào)查，鼠、蒼蠅等均檢測到了SVA，其可能在SVA傳播中起重要作用[23]。發(fā)病豬通過口、鼻、糞便排毒。尿液也可能是排毒的途徑，帶有病毒的尿液成為豬場重要傳染源[24]。易感動物與帶有水皰或水皰破裂發(fā)病豬的直接接觸可能是SVA重要的傳播途徑之一。SVA是否能夠垂直傳播尚需進一步的研究。

2 SVA的分子生物學(xué)特性

分離之初，認為SVV-001與心病毒屬成員相似，但是經(jīng)過進一步的深入分析，根據(jù)病毒特征和復(fù)制模式將其列入小RNA病毒科并將其歸入新的病毒屬—塞內(nèi)卡病毒屬。目前，該屬僅有代表種一個成員。

SVA具有典型的小RNA病毒的L434結(jié)構(gòu)基因組。基因組大小約7 200 nt，包括Vpg、666 bp 5'UTR、編碼2180氨基酸的ORF、71 bp 3'UTR和Poly(A)Trailer。其5'UTR區(qū)域具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)，而其406～625 bp區(qū)域丙型肝炎病毒的同源性達57.3%，這表明SVA核糖體結(jié)合位點為Ⅳ型[25]。SVA病毒基因組特征與心病毒屬的非常相似，尤其是P1、2C、3C、3D，其2B、3A、核糖體結(jié)合位點類型與心病毒屬的不同。然而，SVA的2A、2B、3A、3B與其他小RNA病毒的2A、2B、3A、3B存在明顯差異[5]。

3 SVA的致病性

目前，僅有少數(shù)關(guān)于SVA試驗性感染豬的研究。臨床上SVA感染豬表現(xiàn)的臨床癥狀主要為肌肉無力、嗜睡、跛足、腹瀉，在鼻部和蹄部冠狀帶出現(xiàn)充滿液體的水皰，破潰后形成潰瘍（圖1）。Joshi等和Montiel等分別用當(dāng)前SVA分離株感染9和16周齡的豬復(fù)制了SVA感染豬所致疾病[24，26]。在SVA致病性研究中，感染豬出現(xiàn)嗜睡、跛足和厭食等癥狀，在鼻部、唇部、蹄部冠狀帶及趾間出現(xiàn)水皰。SVA潛伏期為4～5 d；急性感染期，扁桃體是SVA復(fù)制的主要位置；病毒血癥約持續(xù)7 d，在第3天血液中病毒達到高峰。

4 SVA的檢測方法

目前，已有多種方法應(yīng)用于SVA的檢測，包括PCR方法、血清學(xué)方法、分子雜交技術(shù)等。PCR方法中普通PCR和熒光定量RT-PCR（qRT-PCR）均可有效地檢測SVA。qRT-PCR快速、靈敏度高、特異性強，應(yīng)用于SVA的快速檢測、排毒檢測及病毒載量檢測中[26]。分子雜交技術(shù)中RNA原位雜交技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于SVA的快速檢測當(dāng)中。RNA原位雜交是利用雜交探針識別、靶向經(jīng)固定、包埋和制片的組織樣品中的SVA特異性序列，通過雜交信號判定SVA的有無。血清學(xué)方法中包括間接ELISA、競爭ELISA、間接免疫熒光和病毒中和試驗等方法[27-30]。血清學(xué)的方法適于大規(guī)模的流行病學(xué)研究或監(jiān)測。

5 展望

SVA為小RNA病毒科成員，感染豬所表現(xiàn)的臨床癥狀與口蹄疫病毒、豬水皰病病毒、豬水皰疹病毒所致癥狀非常相似，需進行鑒別診斷。快速鑒別診斷對快速控制疫情、制定防控措施具有重要意義。SVA危害雖不及口蹄疫病毒，但其感染仔豬導(dǎo)致仔豬死亡率升高，造成經(jīng)濟損失，給養(yǎng)豬業(yè)高效綠色健康發(fā)展帶來了新的挑戰(zhàn)。SVA已在我國多個省份豬場檢測到，一方面需要對SVA進行回顧性研究，對其進行溯源；另一方面需要對其流行病學(xué)、免疫、快速診斷技術(shù)以及遺傳變異機制進行深入研究，以為制定SVA防控方案提供理論依據(jù)。