AFP、AFP-L3和AFU聯合檢測診斷肝細胞癌的應用價值探討

陳宏斌 蘇明寬 陳勇 郭建峰 陳瓊 吳敏校

[摘要] 目的 探討聯合檢測甲胎蛋白（AFP）、甲胎蛋白異質體3（AFP-L3）和α-L-巖藻糖苷酶（AFU）診斷HCC的性能。 方法 選擇2017年1月～2018年12月就診于我院的81例HCC患者為觀察組，選擇同期就診于我院的50例良性肝病為良性組，24例健康者為對照組。采集3組空腹靜脈血檢測AFP、AFP-L3和AFU水平。對比3組AFP、AFP-L3和AFU水平，并分析AFP、AFP-L3和AFU單一檢測與聯合檢測HCC的診斷價值。 結果 觀察組AFP、AFP-L3、AFP-L3%和AFU中位水平分別為319.42 ng/mL、49.50 ng/mL、18.65%和46.00 U/L，高于良性組和對照組，差異有統計學意義（P<0.001）;AFP+AFP-L3+AFU檢測曲線下面積（AUC）為0.831，高于單一檢測AFP（0.761）、AFP-L3（0.828）和AFU（0.685）。 結論 聯合檢測AFP、AFP-L3和AFU可提高HCC的診斷性能。

[關鍵詞] HCC;甲胎蛋白;甲胎蛋白異質體;α-L-巖藻糖苷酶

[中圖分類號] R735.7? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）32-0125-04

[Abstract] Objective To explore the efficacy of combined detection of alpha-fetoprotein（AFP）， alpha-fetoprotein heterogene 3（AFP-L3） and α-L-fucosidase（AFU） in the diagnosis of HCC. Methods A total of 81 patients with HCC who were treated in our hospital from January 2017 to December 2018 were selected as the observation group. 50 cases of benign liver disease who were treated in our hospital during the same period were selected as the benign group. 24 healthy people were selected as the control group. Fasting venous blood in the three groups were collected to detect the levels of AFP， AFP-L3 and AFU. The levels of AFP， AFP-L3 and AFU in the three groups were compared and the diagnostic value of single and combined detection of AFP， AFP-L3 and AFU in the diagnosis of HCC was analyzed. Results The median levels of AFP， AFP-L3， AFP-L3% and AFU in the observation group were 319.42 ng/mL， 49.50 ng/mL， 18.65% and 46.00 U/L respectively， which were higher than those in the benign group and the control group， and the differences were statistically significant（P<0.001）; the area under the curve（AUC） of AFP+AFP-L3+AFU detection was 0.831， which was higher than that of AFP（0.761）， AFP-L3（0.828） and AFU（0.685） in the single detection. Conclusion The combined detection of AFP， AFP-L3 and AFU can improve the diagnostic efficacy of HCC.

[Key words] HCC; Alpha-fetoprotein; Alpha-fetoprotein heteroplasm; α-L-fucosidase

肝細胞癌（Hepato cellular carcinoma，HCC）是一種具有病程短、發展迅速、死亡率高等特點的惡性腫瘤。手術切除是臨床治療HCC的主要手段，但僅有1/5的患者有手術切除機會，多數患者因早期無特異性臨床表現，就診時已發展為中晚期，錯失最佳治療時機[1-2]。因此，早期準確鑒別診斷HCC，盡早實施有效的治療，對提高患者生存率尤為重要。血清腫瘤標志物檢測是臨床診斷HCC的常用方式，簡便易行，甲胎蛋白（Alpha fetal protein，AFP）是早期診斷HCC的傳統血清標志物，但在肝硬化、慢性肝炎等良性肝病患者中會不同程度升高，而部分肝癌早期AFP水平不升高，30%～40%患者AFP為陰性[3-5]。甲胎蛋白異質體3（Alpha fetoproteins L3，AFP-L3）是新一代HCC標志物，而α-L-巖藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）屬于溶酶體酸性水解酶類，也是HCC生物標志物之一。本研究通過聯合檢測AFP、AFP-L3和AFU評估診斷HCC的性能，旨在為臨床診斷HCC提供參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年12月～2018年12月就診于我院的81例HCC患者為觀察組，其中男54例，女27例;年齡27～80歲。選擇同期就診于我院的50例良性肝病為良性組，其中男33例，女17例;年齡26～79歲;乙型肝炎無癥狀攜帶者5例，慢性乙型肝炎20例，肝硬化25例。選擇同期在我院接受健康體檢的24名健康者為對照組，其中男16例，女8例;年齡27～79歲。3組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。納入標準：符合上述相關診斷標準者;簽署知情同意書者;認知功能正常者;年齡>18歲者。排除標準：精神疾病患者;妊娠期或哺乳期女性;自身免疫系統疾病者;嚴重心腦血管疾病者;肝腎等重要臟器功能不全者。

1.2 診斷標準

1.2.1 良性肝病組? 符合《慢性乙型肝炎防治指南》[6]中關于良性肝病相關診斷標準，當患者HBsAg陽性>6個月或既往有乙型肝炎病史，HBV DNA或/和HBsAg呈陽性，即可評定為慢性HBV感染。將慢性HBV感染按照病毒學、生物化學實驗、血清學和其他輔助、臨床檢查分為慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、無癥狀HBV攜帶者。

1.2.2 HCC診斷標準? （1）符合《原發性肝癌診療規范》[7]關于HCC相關診斷標準，將肝外轉移灶/肝臟占位病灶活檢，或手術切除組織表變，經細胞學或病理組織學檢查確診為HCC。（2）臨床診斷標準：根據臨床實際、既往國內標準和我國國情，患者滿足①、②a或①、②b、③時，即可判定為HCC。①患者合并HCV感染或/和HBV感染、肝硬化。②存在典型的HCC影像學特征，動態對比增強MRI和同期多排CT掃描檢查，動脈期肝臟占位快速不均質血管強化，延遲期或靜脈血快速洗脫。a：肝臟占位直徑2 cm及以上，MRI、CT檢查中任意一項顯示肝臟占位伴有肝癌的特征。b：肝臟占位直徑不足2 cm，MRI、CT檢查均顯示肝臟占位伴有肝癌的特征。③持續2個月血清AFP≥200 μg/L或持續1個月血清AFP≥400 μg/L，同時能排除生殖系胚胎源性腫瘤、妊娠、繼發性肝癌、活動性肝病等所致的AFP升高。

1.2.3 健康對照組標準? 健康對照生化指標均正常，HBV血清學標志物均為陰性，同時排除HIV/HCV感染和其他原因導致肝臟病變的疾病，如酒精性及代謝性肝病等。

1.3 方法

采集3組患者空腹靜脈血3 mL，待凝固后，10 min的離心，3000/min離心操作取上清液，置于-20℃冰箱中保存待檢。使用北京熱景生物技術股份有限公司提供的甲胎蛋白異質體比率測定試劑盒檢測AFP及AFP-L3。該試劑盒中預裝有甲胎蛋白異質體分離磁珠，通過分離磁珠將待測樣本中AFP-L3進行分離。將分離的AFP-L3及總甲胎蛋白分別在全自動化學發光免疫分析儀中檢測。儀器檢測出AFP及AFP-L3值，通過計算得出AFP-L3%。使用速率法測定血清AFU水平，儀器為貝克曼AU5821全自動生化檢測儀，試劑盒購買自北京中生北控生物科技股份有限公司。正常參考值：AFP為0～7 μg/L，AFP-L3%<10%，AFU為0～40 U/L。

1.4 統計學方法

本研究采用SPSS22.0統計學軟件進行數據分析，計量資料均為非正態分布，用中位數（P25，P75）表示，組間的比較采用Mann-Whitney U檢驗;繪制受試者工作曲線（ROC）評估各指標單獨和聯合檢測HCC的診斷效能，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組AFP、AFP-L3、AFP-L3%和AFU水平比較

觀察組AFP、AFP-L3、AFP-L3%、AFU水平均高于良性組和對照組，差異有統計學意義（P<0.001）。見表1。

2.2 AFP、AFP-L3和AFU單一與聯合檢測診斷HCC價值

聯合AFP+AFP-L3+AFU診斷HCC的AUC為0.831，高于單一檢測AFP、AFP-L3、AFP-L3%、AFU診斷HCC的AUC。見表2、圖1。

3 討論

HCC是常見的肝臟惡性腫瘤，丙肝和乙肝病毒感染是導致HCC的主要原因，會導致患者出現全身臟器組織中毒，伴自身肝功能異常，誘發多器官功能衰竭，死亡率較高，5年生存率不足5%[8-10]。HCC發病隱匿，早期無明顯臨床表現，大部分患者就診時病情已發展為中晚期，失去手術切除機會，增加治療難度。因此，早期準確診斷HCC，指導臨床實施針對性的治療，對改善患者預后具有積極意義。

生物標志物在HCC的診斷和復發轉移評估中具有突出作用，是指腫瘤細胞和組織因抗癌基因或癌基因、其他腫瘤相關的基因及產物異常表達所致的生物活性物質和抗原，在良性疾病或正常組織中產量甚微或幾乎不產生，反映癌發生、進展過程和癌相關基因的失活或激活程度，可在體液、癌組織、血液、排泄物中被檢測出[11-15]。AFP具有與雌激素結合，對肝細胞的生長進行調節，是目前臨床診斷HCC的最常用標志物。AFP是胚胎的重要血清成分，由肝細胞和卵黃囊合成，胎兒出生后1年血清水平降低至正常水平。當機體受到HCC侵襲時，會激活腫瘤細胞中AFP合成基因，分泌大量的AFP，升高血清濃度。AFP可在胃癌、肺癌、膽道腫瘤、胰腺癌等患者血清中出現，同時11%～47%肝硬化患者和15%～58%慢性乙型肝炎患者的血清中AFP也會升高，而HCC中部分患者血清AFP呈陰性，診斷缺乏特異性，易出現漏診、誤診[16-19]。而AFP-L3即通常所說的扁豆凝集素親和型甲胎蛋白異質體（Lentil lectin-reactive alpha-fetoprotein），目前認為僅由肝癌細胞所產生，可作為HCC標志物。AFP-L3存在鑒別診斷良惡性肝病的能力，HCC定性診斷中測定AFP-L3，利于其對影像學檢查無法確診的肝占位性病變進行鑒別，被稱為新一代HCC標志物。AFP-L3具有HCC早期診斷及預警作用，在影像學檢查尚未發現HCC特征性病變時，對AFP低濃度陽性病例進行AFP-L3檢測，可以早期發現很多血清AFP為20～50 μg/L的HCC。AFP-L3具有預測預后及評估療效的價值。楊針等[20]研究結果顯示，術前血清AFP-L3含量與HCC復發率關系密切，AFP-L3高含量組累計復發率明顯增高。因此，AFP-L3%陽性HCC患者存在易復發、預后差、易轉移等特點，可將AFP-L3可作為評估HCC預后的一個獨立指標。

AFU是廣泛存在于人體內各種細胞、組織、尿液中的溶酶體酸性水解酶，在尿液、血清、肝、腎、腦、肺、胰等均含有AFU，能催化含巖藻糖基的低聚糖、糖苷、糖蛋白的水解代謝，在信號轉導、免疫反應等多方面起到重要作用[21-22]。正常情況下，AFU作為細胞新陳代謝的少量產物不斷釋放到血液中，血清水平穩定在一個低水平范圍內，被作為HCC、口腔癌、結直腸癌等腫瘤早期診斷標志物的指示因子。HCC代謝中L-巖藻糖轉換增加，會升高AFU活性水平，同時肝細胞會產生一種AFU抑制劑，降低其對底物水解的能力，促使底物堆積，亦或肝臟清除溶酶過程受到干擾，進而提高血清AFU水平。本研究結果顯示，AFU+AFP+AFP-L3聯合檢測AUC高于AFP、AFP-L3、AFU單一檢測，提示AFP、AFP-L3、AFU聯合檢測具有互補性，可有效提高診斷HCC的性能，有利于臨床早期實施針對性的治療措施干預，提高患者生存率。

綜上所述，聯合AFP、AFP-L3和AFU檢查可有效提高診斷HCC的性能，可將其作為臨床診斷HCC的常用手段。

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（收稿日期：2020-08-04）